重庆地区耐多药结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药基因突变的特征分析

分析重庆地区分离的耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)菌株pncA和rpsA基因突变特征及其与吡嗪酰胺(PZA)耐药的相关性。     

努力加强基础研究能力 提高结核病临床诊治水平

当前结核病仍然是严重危害人类健康的主要传染病之一,结核病是单一致死性传染病中仅次于人类获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的第2位杀手.据WHO报告,2012年全球有结核病患者860万例,其中110万例为结核病与AIDS双重感染者;在2012年死于结核病的130万例患者中,有32万例是结核病与AIDS双重感染者;据WHO估算,2012年全球有45万例耐多药结核病患者,其中17万例死亡.     

尿液代谢组学在结核病研究中的应用及其进展

结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染性疾病。目前, 在结核病诊断、抗结核药物代谢、监测抗结核药物不良反应以及治疗效果的考核与判断等方面还存在着不足之处。代谢组学可提供细胞和代谢过程中的下游产物及特定组织或器官健康/疾病状况等关键信息, 在药物研发、疾病诊断、药物代谢、药物不良反应以及治疗效果的监测等方面具有重要价值。近年研究表明, 应用尿液代谢组学对结核代谢生物标志物进行研究, 不仅能区分结核病与潜伏结核感染还能用于鉴别肺结核病与其他肺部疾病, 为结核病的诊断提供重要依据。应用尿液代谢组学研究抗结核药物的代谢以及不良反应发生机制, 为研发新药、监测药物不良反应等提供重要手段。此外, 尿液代谢组学分析对于判断结核病的程度及其治疗转归等也具有重要意义。本文就尿液代谢组学在结核病诊断、抗结核药物代谢、监测抗结核药物不良反应及治疗效果的考核与判断等方面进行综述。     

世界卫生组织《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录及其临床应用指南》解读

［摘要］　耐药结核病是我国面临的重大公共卫生问题。分子诊断技术的不断发展促进了耐药结核病患者的早期诊断,但是不同耐药相关基因突变类型结果的解读成为分子耐药诊断领域的首要挑战。世界卫生组织于2021年出版了《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录及其临床应用指南》,旨在规范结核分枝杆菌分子耐药结果解读,特别是对于基于二代测序技术获得的结核分枝杆菌菌株获得的突变信息进行深入剖析,以期为临床提供更准确的耐药检测报告,也为耐药结核分子诊断技术在我国的推广使用奠定基础。     

单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究

目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。 方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株（69.6%）检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml、4 μg/ml、2 μg/ml和0.5 μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为 8 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和 pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16 μg/ml。结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。     

Xpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价

目的 评估Xpert Mtb/RIF检测技术快速诊断肺结核及利福平耐药的可靠性.方法 在4个县（区）级结核病防治机构（湘潭县、岳阳县、绥化市北林区和兰西县）,门诊医生连续纳入2142例初诊肺结核可疑患者,每例患者留取3份痰标本,实验室工作人员对每份标本同时进行涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF（利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术）检测,临床医生2个月末对患者完成随访.省级参比实验室对555例培养阳性患者完成比例法利福平药敏试验,国家参比实验室对传统药敏试验和Xpert Mtb/RIF检测结果不一致菌株进行rpoB耐药基因核心区间测序.以随访后临床诊断结果为金标准,比较涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度.以传统药敏试验结果为金标准,分析Xpert Mtb/RIF检测利福平耐药的效能.结果 以临床诊断结果为金标准,涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度分别为25.68％（284/1106）、51.44％（555/1079）和58.82％（650/1105）,Xpert Mtb/RIF检测敏感度高于涂片镜检（x2=360.10,P＜0.05）和固体培养试验（x2=50.13,P＜0.05）.以传统药敏试验结果为金标准,XpertMtb/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为87.10％（27/31）和97.95％（477/487）.结论 Xpert Mtb/RIF检测操作简单,检测敏感度高于涂片镜检和固体培养,同时可以诊断患者是否对利福平耐药,在我国县（区）级实验室具有非常好的应用前景.     

重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA与rrs基因突变特征分析

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征。结果89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00%,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36%,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G。Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(χ²=62.937,P<0.001;Fisher双侧P<0.001)。结论gyrA基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因。