Kh DIC小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽的影响

目的 观察Kh DIC（KM hn／IDL JIMP CAMS）小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽（β-amyloid precursor protein，APP，319-335肽段）的影响。方法 2．5月龄的Kh DIC小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用月龄和性别相匹配的正常昆明（KM）小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽，每只每次0．34g-g，每周3次；模型组和正常对照给予等量的生理盐水；25W后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化，应用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法分别检测了海马神经细胞线粒体抗氧化酶活性及自由基水平。结果 ①水迷宫结果显示，模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍，其游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多（P〈0．05）；APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组，其上述的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著性差异。②与正常对照组比较，模型组小鼠海马神经细胞线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低（P〈0．01），丙二醛（MDA）含量显著升高（P〈0．01）；APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近，SOD活性高于模型组（P〈0．01），而MDA含量低于模型组（P〈0．01）。结论 ①Kh DIC小鼠存在学习和记忆功能障碍；而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。②APP17肽具有清除自由摹和抑制氧化应激反应的作用，从而提高脑组织的抗氧化能力，保护学习、记忆功能。     

APP17肽对糖尿病大鼠海马线粒体膜电位的影响

应用流式细胞仪分别观察糖尿病模型组、糖尿病APP1 7肽治疗组和正常对照组大鼠海马线粒体膜电位和凋亡率。结果 :糖尿病组大鼠海马线粒体膜电位明显下降 (P <0 .0 1 ) ,凋亡发生率增加 (P <0 .0 1 ) ;APP1 7肽治疗组与糖尿病组相比海马线粒体膜电位增高 (P <0 .0 5 ) ,凋亡发生率降低 (P <0 .0 5 ) ,与正常对照组比较无显著性差异。结果提示 :海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生和发展 ;APP1 7肽具有改善这一病理过程的作用     

妊娠合并糖尿病对新生儿脐血C肽、胰岛素以及胰高血糖素水平的影响

【目的】探讨妊娠合并糖尿病对新生儿脐血C肽(C-peptide)、胰岛素(insulin)以及胰高血糖素(gluca-gons)质量浓度的影响。【方法】选择34例妊娠合并糖尿病的孕妇(妊娠期糖代谢异常17例,糖尿病合并妊娠7例)及其新生儿为观察对象,同时随机收集同期分娩的51例糖代谢正常孕妇及其新生儿作为对照组。抽取两组新生儿的脐静脉血,分离血清。采用放射免疫方法测定C肽、胰岛素、胰高血糖素。采用多因素Logistic回归分析探讨脐血C肽水平的影响因素。【结果】观察组脐血C肽、胰岛素以及胰高血糖素的质量浓度及生后1 h末梢血糖分别为(1.87±1.41)μg/L,(24.94±22.91)mU/L,(176.24±72.90)ng/L,(2.63±0.71)mmol/L;对照组分别为(1.33±0.68)μg/L,(17.93±15.32)mU/L,(161.75±47.38)ng/L,(3.23±0.69)mmol/L;两组脐血C肽水平差异有显著性,观察组显著高于对照组(P<0.05),胰岛素及胰高血糖素水平组间比较差异无显著性;观察组新生儿生后1 h末梢血糖显著低于对照组(P<0.01)。此外,观察组孕妇年龄及分娩时体重均大于对照组(P值均<0.05),观察组新生儿的外父母患糖尿病、心脑血管疾病者显著多于对照组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示新生儿外父母患糖尿病、心脑血管疾病家族史对其脐血C肽水平有重要影响,其风险比值为11.30。【结论】妊娠合并糖尿病母亲的新生儿脐血C肽水平升高。对具有糖尿病高危因素的新生儿应早期开始追踪观察及时发现其潜在的代谢综合征的表现。     

复方金思维对老年性痴呆模型大鼠海马神经元微管和Tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响

[目的]观察中药复方金思维对老年性痴呆(AD)模型大鼠海马CA1区神经元微管结构和Tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响.[方法]48只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组和金思维大、中、小剂量组.采用双侧脑室注射微量链脲佐菌素(STZ 3mg/kg)建立拟AD大鼠模型,模型成功后,治疗组分别予盐酸多奈哌齐和金思维(分为3个不同剂量)进行3个月的治疗,模型组和假手术组给予等体积的双蒸水.行灌注固定,冰冻切片,取各组大鼠海马CA1区组织进行光镜和电镜观察,并进行糖原合成激酶3β(GSK-3β)、蛋白磷酸酶-1(PP-1)、蛋白磷酸酶-2A(PP-2A)的免疫组化染色.[结果]1)AD大鼠海马神经元微管结构出现明显的断裂或溶解现象,而用金思维治疗后这种现象得到明显改善.2)AD大鼠海马内的蛋白激酶GSK-3β明显增多、PP-1、PP-2A明显减少,金思维各剂量组上述酶类表达均接近至正常水平,与盐酸多奈哌齐组比较无差异.[结论]AD大鼠模型脑组织微管结构和Tau蛋白磷酸化相关酶类的表达发生异常,金思维可修复断裂或溶解的微管,使蛋白激酶和磷酸酶的表达接近至正常水平.     

APP17肽对糖尿病KK小鼠海马神经元胰岛素信号转导途径的影响

目的观察APP17肽对2型糖尿病KKAy小鼠(以下简称KK小鼠)大脑海马神经元胰岛素信号转导蛋白表达的影响。方法根据血糖水平将KK小鼠分为正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)和APP17肽治疗组(DM+APP17P组)。治疗组给予皮下注射APP17肽,每周3次,每次8μg/kg,共12周。处死前尾静脉取血测定糖化血红蛋白、血糖含量;将3组小鼠处死,心脏取血测血浆胰岛素;冰浴中快速分离海马组织,匀浆后,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果与C组相比,DM组与DM+APP17P组的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平显著升高(P<0.05),但是DM组与DM+APP17P组之间无显著差异;DM组海马神经元胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达低于C组和DM+APP17 P(P<0.05);CREB、pCREB、Bc l-2的表达3组之间差异无统计学意义。Tunel细胞染色3组小鼠海马均未发现Tunel染色阳性细胞。结论2型糖尿病KK小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常,主要表现为P13-K上游起始途径的异常。这种异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善,并不导致细胞凋亡状态;APP17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分,从而使存活信号转导通路恢复正常。     

APP17肽对APP转基因小鼠突触相关蛋白表达的影响

目的研究APP17肽对APP转基因小鼠(APP V717 I)海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法将3 mon龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组(皮下注射0.16 mg.kg-1.d-1,每周3次),并以相同年龄和背景的C57BL/6 J小鼠做正常对照组。7 mon后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行PSD-95、Shank1蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于治疗组和正常对照组,且模型组小鼠大脑海马CA4区中的PSD-95、Shank1阳性反应神经元明显减少,染色浅;APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在突触后致密区蛋白表达异常,由此引起突触功能损害,进而导致记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过提高PSD-95、Shank1的表达,使突触的损伤接近恢复正常。并能改善小鼠的记忆、学习能力。     

AD7C-NTP在老年痴呆患者及不同种属动物脑内的存在和意义

目的研究Alzheimer相关的神经丝蛋白(Alzheimer-associated neuronal thread protein,AD7C-NTP)在老年痴呆(Alzheimer’s disease,AD)患者脑内、猪脑和小鼠脑内的表达,初步确定一种AD7C-NTP蛋白含量丰富的组织来源。方法采用免疫组织化学染色方法观察猪脑、小鼠脑内AD7C-NTP的分布,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)的方法检测AD患者脑内、猪脑、小鼠脑内AD7C-NTP的表达水平。结果免疫组化结果显示,猪大脑皮质、小鼠海马内有AD7C-NTP免疫反应阳性神经元分布;Western blot的结果显示,以AD7C-NTP C端抗体作为检测抗体时,AD患者脑和猪脑内可见相对分子质量为41000bp的免疫反应阳性条带,小鼠脑内未见免疫反应阳性条带。结论AD患者脑内、猪脑内存在AD7C-NTP,可作为提取AD7C-NTP蛋白纯品的来源之一,为研制AD7C-NTP诊断试剂盒提供实验材料。     

APP5肽类似物P165对2型糖尿病大鼠学习记忆的影响

目的研究APP5肽类似物P165(简称P165)对2型糖尿病大鼠学习记忆的影响。方法将Sprague Dawley(SD)大鼠分为正常组(C)、糖尿病组(DM)、DM+P165小剂量组、DM+P165大剂量组。采用高脂高糖饮食及腹腔注射小剂量链脲菌素(streptozotocin,STZ)的方法,建立2型糖尿病模型。成模后给予SD大鼠P165灌胃治疗8周后行水迷宫实验。每周检测动物的空腹血糖和体质量。结果与C组相比,DM组从第2天开始逃避潜伏期明显延长(P<0.01);与DM组比较,P165治疗组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。空间探索实验结果显示,与C组比较,DM组第1次穿越平台所在位置时间显著延长(P<0.05),在平台所在象限游泳距离显著缩短(P<0.01);与DM组相比,P165治疗组第1次穿越平台所在位置时间明显缩短(P<0.01和P<0.05),DM+P165小剂量组在平台所在象限游泳距离显著延长(P<0.01)。从给予P165治疗开始到实验结束,DM组、DM+P165小剂量组和DM+P165大剂量组动物血糖差异均无统计学意义。结论2型糖尿病大鼠存在学习记忆功能障碍,P165能够缩短动物水迷宫实验逃避潜伏期和找到平台时间,改善模型动物的学习记忆功能,但并不影响血糖。     

胃酸分泌调节肽和KA8肽的生物活性研究

分别中枢和外周给以胃酸分泌调节肽（ＯＭ）及其Ｃ端８肽ＫＡ８肽，观察并比较它们对胃酸分泌、血糖及其调节激素的影响．结果表明，外周给以ＫＡ８肽可抑制胃酸分泌，而脑室给以ＫＡ８肽和ＯＭ对胃酸分泌无影响，外周给以ＫＡ８肽和ＯＭ对血糖调节激素无影响，中枢给以ＯＭ具升高血糖的作用。     

APP17肽对2型糖尿病KK小鼠海马神经元超微结构和InsR、IRS-1的影响

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮下注射 )。 1 2周后将 3组小鼠处死 ,心脏取血测血糖和血浆胰岛素 ;灌注固定后 ,取海马送电镜检查并作免疫组织化学染色。结果显示 :①DM组与DM +APP1 7P组的血糖、胰岛素水平比C组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,但是DM组与DM +APP1 7P组之间无显著差异 ;②DM组海马神经元胰岛素受体 (InsR)、胰岛素受体底物 1 (IRS 1 )的表达低于C组和DM +APP1 7P组 (P <0 .0 5 ) ;③海马超微结构显示DM组海马神经元线粒体肿胀 ,未见凋亡的神经元 ,DM +APP1 7P组和C组神经元基本正常。提示 :APP1 7肽作为神经营养因子能激活信息转导通路 ,从而对神经元凋亡有改善作用。