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152.
目的:从大鼠脾中克隆出血红素氧化酶1(RHO-1)基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中表达其蛋白。方法:用RT-PCR从大鼠脾总RNA中扩增出RHO-1 cDNA,并将其克隆入pMD18-T载体, 经TA克隆测序分析后,将阳性TA克隆RHO-1片段亚克隆入pET28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经限制性内切酶图谱鉴定后,阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析。结果:TA克隆测序分析证实该基因全长870 bp,编码289个氨基酸,所克隆的基因序列与GenBank中登录的RHO-1基因序列完全一致;限制性内切酶图谱结果表明成功构建了RHO-1的原核表达载体;SDS-PAGE结果显示RHO-1基因在大肠杆菌中获得表达。结论:用RT-PCR正确克隆RHO-1基因,构建pET28a(+)/RHO-1表达载体,并成功表达RHO-1融合蛋白。 相似文献
153.
SPIO标记大鼠骨髓基质干细胞及体外磁共振成像研究 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 探讨以多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)为转染介质介导超顺磁性氧化铁微粒(superparamgnetic ironoxides,SPIO)标记大鼠骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的合适条件,通过标记细胞的体外磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)获取最佳的磁共振扫描序列.方法 分离、纯化、培养大鼠BMSCs,SPIO和PLL以1:0.001 2混合配制氧化铁一多聚赖氨酸(F-PLL)混合液,用铁浓度分别为0、4.2、8.4、21、42、84μg/ml的FE-PLL复合物标记BMSCs.计算细胞标记阳性率,测量并绘制末标记细胞和不nd浓度铁标记细胞的MTT生长曲线;对不同浓度铁标记的细胞进行磁共振成像.分别用浓度为0、0.05、0.25、0.5、1.0、5.0 μg/ml的PLL同BMSCs共同培养,了解各种浓度PLL对细胞的生存是否有影响.结果 细胞的标记率分别为O%、(44.40±11.33)%、(71.97 4±8.01)%、(88.86±9.10)%、(98.24±2.94)%、100%,随着SPIO浓度的增加而增加.MTT显示在铁浓度<42 μg/ml时FE-PLL上复合物对细胞的生长活性无明显影响,而铁浓度为84μg/ml时,细胞的生长活性受到抑制.PLL在浓度≤1.0μg/ml时对细胞的活力无明显影响;当PLL浓度为5.0μg/ml时,细胞生长明显受抑.MRI信号随FE-PLL复合物浓度的增加而增加(P<0.05),标记细胞的信号在T1WI的改变不及在T2WI及T2*WI明显,而以T2*WI信号改变最明显(P<0.05).结论 以PLL为转染介质,SPIO能够高效的标记BMSCs,并且在合适的浓度范围内不会影响干细胞的生长活性. 相似文献
154.
155.
腺病毒介导的人心肌营养素对颈脊髓损伤大鼠功能恢复的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察腺病毒介导的人心肌营养素(human cardiotrophin-1,hCT-1)对大鼠不完全性颈脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后可塑性变化、功能恢复和运动诱发电位的作用.方法:在立体定位仪的引导下,致伤大鼠双侧红核和颈3节段皮质脊髓背侧束SCI局部注射hCT-1重组腺病毒载体,并采用荧光免疫组织化学检测其表达.采用改进后的大鼠前肢食物小球抓取动作评分标准和运动诱发电位评定大鼠前肢功能恢复情况.生物素化葡聚糖胺示踪未受损皮质脊髓腹侧束(ventral corticospinaltract,vCST)的出芽情况.结果:SCI局部高效表达的hCT-1诱导vCST出芽增加,同时伴有大鼠前肢运动功能和运动诱发电位P1、N1波波幅的恢复.结论:腺病毒介导的hCT-1在SCI局部的高效表达可增加vCST的出芽数量,并促进运动功能的恢复. 相似文献
156.
目的 观察内毒素血症大鼠(endotoxemia)的血液流变性变化。方法 给大鼠一次性静注内毒素(LPS,0.5mg/kg,iv),分为LPS(lipopolysaccharide,LPS) 多粘菌素B组,LPS 生理盐水组,LPS模型组,给大鼠一次性静注内毒素(lipopolysaccharide,LPS,0.5mg/kg,iv),前2组分别于注入内毒素后0.5h静脉给予多粘菌素B(polymyxinBsulfate,0.2mg/kg)和1ml生理盐水(saline solution,NS),LPS模型组大鼠于注入内毒素后不作其它处理,在给内毒素后1、2、4h抽血液,并检测全血粘度(whole blood viscosity,WBV),聚集指数(aggregation index of red cells,AI)和红细胞压积(hematocrit of red cells,HRC)。结果 LPS 多粘菌素B组,可明显降低内毒素血症后1h的全血粘度(高切变、低切变),红细胞压积,聚集指数显著升高,MAP于2、4h明显高于LPS 生理盐水组和空白对照组。结论 多粘菌素B治疗能明显改善内毒素血症早期的血液流变性,增强红细胞变形能力,降低聚集性,改善微循环,对预防内毒素血症有一定作用。 相似文献
157.
158.
目的:观察流体冲击致大鼠脑损伤后不同时相点脑组织兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAA)和局部血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)的变化,及它们在脑损伤和继发性脑损伤中的作用,方法:用流体冲击装置制作中废脑损伤,基酸微量分析系统检测谷氨酸(glutamate,GLu)天门冬氨酸(aspartate,Asp)含量,氢清除法检测大脑局部血流量。结果:中度脑损伤后rCBF明显低于伤前和正常对照组:脑组织Glu Asp的含量在伤后30min即可见明显增加,1h有所回落,2h又有所升高 ,4h,.至6h趋于稳定,结论:结果显示脑损伤后脑血流量的下降可能与氨基 释放有在定的关系,氨基酸大量释放可能在脑损伤和继发性脑损伤中起着主要作用。 相似文献
159.
160.
实验性颅脑损伤后兴奋性氨基酸及脑血流量的变化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察大鼠颅脑损伤后脑组织兴奋性氨基酸和局部血流量(regional cerebral blood flow,riBF)的变化规律。方法:用流体冲击装置制作中度大鼠颅脑损伤模型,氨基酸微量分析系统检测脑组织谷氨酸(gluamate,Glu)和天冬氨酸(aspartate,Asp)含量,氢清除法检测脑局部血流量。结果:脑损伤后rCBF明显下降,脑组织Glu、Asp的含量在伤后明显增加。结论:脑组织氨基酸的变化与脑血流量有一定的关系,脑损伤后血流量的降低可能是引起氨基酸大量释放的主要因素。 相似文献