人SMRT基因真核和原核表达载体的构建及鉴定

目的：构建人SMRT基因真核和原核表达载体。方法：体外人工合成SMRT-C645bp对应的基因片段,克隆至pUC57载体,酶切,测序正确后,PCR扩增目的基因片段,酶切后亚克隆至pCMV-myc载体和pGEX-6p-1载体,并酶切和测序鉴定。结果：成功构建了人pCMV-myc-SMRT真核表达载体和pGEX-6p-1-SMRT原核表达载体。结论：成功构建了人SMRT真核和原核表达载体,为下一步蛋白间相互作用的证实提供了基础。     

水痘-带状疱疹病毒RAA检测方法的建立及初步应用

目的建立水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus, VZV)的重组酶等温扩增(recombinase-aid amplification, RAA)快速检测方法。方法通过全球共享数据库下载VZV全基因组序列进行比对分析, 针对四个保守基因分别设计特异性引物与探针并筛选出最佳组合, 通过引物与探针浓度梯度筛选出最佳反应体系, 建立荧光型RAA检测方法。用VZV阳性质粒标准品与梯度稀释的临床样本评价方法的灵敏度, 以最低检出极限浓度的阳性质粒标准品进行重复实验评价方法的重复性, 以其他病毒核酸评价方法的特异性, 同时用本方法和荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR, qPCR)对临床样本进行检测并对检测结果进行比较。结果本方法筛选出针对开放阅读框架(open reading frame, ORF)28基因的引物对F2/R2与探针P2为最佳组合;考虑到成本因素, 最佳引物浓度为500 nmol/L, 最佳探针浓度为280 nmol/L;最低检出极限为101拷贝/μL, 最低可检测到Ct值为36.027的临床阳性样本;重复实验的检测...     

朗格罕细胞组织细胞增生症25例临床分析

朗格罕细胞组织细胞增生症(Langherhens cell histiocytosis,LCH)曾被称为组织细胞增生症X(histiocytosis HX),是一组病因不明、临床表现多样、多发于儿童的一组反应性、增殖性疾病.     

早期血乳酸清除率在危重新生儿预后评估中的意义

目的：探讨早期血乳酸清除率在危重新生儿预后评估中的作用。方法对郑州市第一人民医院NICU2011年7月~2013年5月份收治的165例危重新生儿进行回顾性分析。患儿入住NICU进行新生儿危重病例评分（NCIS）、测定动脉血乳酸水平;治疗6h后再次进行动脉血乳酸测定,计算6h血乳酸清除率。根据6h血乳酸清除率将患儿分为高乳酸清除率组（乳酸清除率≥10%）和低乳酸清除率组（乳酸清除率＜10%）,比较两组间的病死率差异;按入院时乳酸水平将患儿分为乳酸轻度升高人群和乳酸明显升高人群,分别比较两组内高乳酸清除率组和低乳酸清除率组间病死率的差异。结果乳酸明显升高患儿中高乳酸清除率组病死率显著低于低乳酸清除率组;乳酸轻度升高患儿中高、低乳酸清除率组间病死率差异无统计学意义。结论早期血乳酸清除率可以作为乳酸明显增高新生儿预后判断的一个良好指标,而对于乳酸轻度增高新生儿的预后判断意义不大。     

马达里亚加病毒TaqMan RT-PCR检测方法的建立

目的 建立马达里亚加病毒(Madariaga virus, MADV)早期且快速的TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法 从GenBank中下载MADV基因序列,根据多序列比对结果选择MADV的NSP1基因中的高保守序列片段设计引物与探针,利用体外转录的RNA 标准品建立了MADV的绝对定量分析模型,并进行灵敏度和特异性评价以及重复性验证。结果 该检测方法的灵敏度为1.0×10²拷贝/反应,与其它虫媒病毒无交叉反应,重复性检测变异系数均小于1.5%。通过本研究建立的快速检测方法对源自宁夏回族自治区、浙江省和云南省的共计81份不明原因脑炎病例血清标本及161批库蚊标本进行了测定,检测结果均为阴性。结论 成功建立了MADV TaqMan RT-PCR的快速检测方法,可应用于实验室的早期检测。     

中国2012年麻疹/风疹实验室网络运转情况分析

目的评价中国2012年麻疹/风疹实验室网络（Measles/Rubella Laboratory Network,M/RLN）（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同）运转情况。方法分析中国2012年M/RLN监测数据库、中国疾病预防控制中心（Center for Disease Control and Prevention,CDC）病毒病预防控制所国家麻疹/风疹实验室（National Measles/Rubella Laboratory,NM/RL）血清学和病毒学监测数据库,评价中国M/RLN运转的各项指标。结果①血清学监测：中国2012年共检测疑似麻疹血清学标本45 474份,其中麻疹免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）M阳性6347例,占疑似麻疹病例的14.9%;共检测疑似风疹血清学标本44 076份,风疹IgM阳性7611例,占疑似麻疹病例的17.3%。②病毒学监测：2012年22个省（自治区、直辖市,下同）级CDC麻疹/风疹实验室（Measles/Rubella Laboratory,M/RL）共送检474株麻疹病毒,经基因定型证实454株为H1基因型的H1a基因亚型,同时也检测出6株A基因型（疫苗相关株）、13株输入性的D9和1株D8基因型;18个省级CDC M/RL共送检288株风疹病毒,其中198株为1E基因型,同时也检测出90株2B基因型风疹病毒。③M/RLN质量控制：NM/RL作为世界卫生组织（World Health Organization,WHO）西太平洋区参比实验室,通过了2012年度WHO的职能考核和现场认证;所有省级CDC M/RL通过了麻疹血清标本复核和职能考核,同时11个省级CDC M/RL通过了WHO专家组的现场考核。结论中国2012年M/RLN运转良好,为疑似麻疹病例的实验室诊断、鉴别诊断、麻疹/风疹病毒学监测提供了良好的技术平台,进一步建立了中国的麻疹/风疹病毒毒株库和基因型数据库,为消除麻疹奠定了良好的实验室基础,也为我国制定消除麻疹的策略提供重要的依据。     

中国2013年麻疹/风疹实验室网络的运转与监测

目的评价中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同）2013年麻疹/风疹实验室网络（Measles/Rubella Laboratory Network,M/RLN）的运转状况。方法分析中国2013年麻疹监测报告管理信息系统中实验室数据和全国M/RLN监测数据,评价中国2013年M/RLN运转的各项指标。结果 1血清学检测：中国2013年共采集散发麻疹疑似病例（Measles-like Illnesses,MLIs）74 296例的血清标本,占中国散发MLIs的97.30%;实验室确诊的散发麻疹病例26 686例,占散发MLIs的34.02%;中国2013年报告MLIs爆发157起,实验室证实麻疹爆发108起,风疹爆发26起。2病毒学监测：中国2013年M/RLN从29个省（自治区、直辖市,下同）分离到2325株麻疹病毒,其中2217株为H1a基因亚型,13株为A基因型,47株为D9基因型,45株为D8基因型,3株为B3基因型。2013年从17个省分离到187株风疹病毒,其中103株为1E基因型,84株为2B基因型。3质量控制：作为世界卫生组织（World Health Organization,WHO）西太平洋区麻疹参比实验室,中国疾病预防控制中心（Center for Disease Control and Prevention,CDC）病毒病预防控制所国家麻疹/风疹实验室通过了2013年WHO的职能考核和现场认证。8个省级CDC麻疹/风疹实验室（Measles/Rubella Laboratory,M/RL）（包括新疆、北京、河北、四川、黑龙江、宁夏、广东和广西）通过了2013年WHO专家组的现场认证;32个省级（包括新疆生产建设兵团）CDC M/RL,全部通过了由M/RLN组织的血清标本复核和WHO组织的职能考核。结论中国2013年M/RLN运转良好,MLIs的实验室诊断比例和病原学检测比例进一步提高,为麻疹和风疹的鉴别诊断和病原学监测提供了良好的技术平台,同时也积累了大量的本土麻疹/风疹病毒流行株和输入株的基因背景资料,为在中国实现消除麻疹的目标提供了重要的和实验室技术支撑。     

急性下呼吸道感染患儿病毒病原学及其临床特征

目的 了解急件下呼吸道感染(ALRI)住院患儿病毒感染情况及其临床特征.方法 收集2004-2006年冬季(11月至次年2月)因ALRI在北京儿童医院住院治疗的＜5岁患儿鼻咽吸出物333份.男230例,女103例;年龄1个月～4.8岁.采用PCR技术和病毒分离方法对鼻咽吸出物进行呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(AdV)、副流感病毒(PIV)1～4型、鼻病毒(RhV)、人偏肺病毒(hMPV)、冠状病毒(HCoV)及人博卡病毒(HBoV)检测.采用人喉上皮癌细胞和非洲猴肾细胞对鼻咽吸出物进行病毒分离,对阳性结果进行序列测定和鉴定.结果 ALRI 333例患儿中,病毒检测阳性123份(36.94%),其中RSV阳性102例,AdV、HBoV阳性各16例,RhV阳性1例,其中12例为双重阳性.未检测到PIV、hMPV及HCoV.333份鼻回吸出物中病毒分离得剑11株病毒株.经PCR扩增及序列测定证实均为AdV,包括AdV1型2株,AdV2型、AdV3型、AdV7型各3株.肺炎患儿病毒阳性检出率为30.35%,毛细支气管炎患儿病毒阳性检出率为62.50%,急性支气管炎患儿病毒阳性检出率为23.08%,毛细支气管炎患儿病毒阳性检出率高于肺炎和急性支气管炎患儿(χ2=24.75,19.66 Pa＜0.01).结论 RSV感染在北京儿章医院2004-2006年冬季ALRI住院患儿中占首位;感染的AdV血清型包括AdV 1型、AdV 2型、AdV 3型及AdV 7型;HBoV可能是ALRI的重要病原.毛细支气管炎患儿病毒感染检出率最高.     

江苏省2007年麻疹野毒株基因特征分析

目的 阐明江苏省2007年流行的麻疹野病毒分离株的基因特征,为控制、消除麻疹提供依据.方法 用Ve-ro-Slam细胞从麻疹患者的咽拭子标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的麻疹病毒株中扩增出核蛋白(Nucleoprotein,N)基因羧基末端600个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.结果 江苏省2007年分离的14株麻疹野病毒全部为H1基囚型中的H1a基因亚型,在基因树上有多个分支.14株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.7%～100.0%,氨基酸同源性为94.0%～100.0%.与中国沪191麻疹疫苗株的核苷酸同源性为90.1%～91.6%,氨基酸同源性为84.7%～88.0%;与H2基因型代表株China94-1的核廿酸问源性为91.6%～93.4 0A,氨基酸同源性为88.0%～91.3%.结论 江苏省2007年流行的麻疹野病毒优势基闪亚型为H1a,与我国大陆其它省份流行的优势基因亚型相同.