猪IL-10在软骨细胞中的表达

为了构建猪IL 10真核表达载体并在猪软骨细胞中表达。将目的基因酶切连入真核表达载体pcDNA3 1,以FuGENE 6介导转入猪软骨细胞中表达 ,RT PCR检测IL 10在软骨细胞中mRNA表达水平 ,ELISA检测细胞培养上清中IL 10蛋白含量。观察其对效应细胞PBMC分泌IFN γ和软骨细胞MHCII类分子表达的影响。结果显示 ,成功构建了猪IL 10真核表达载体 ,并转入软骨细胞 ,检测到细胞内IL 10mRNA转录 ,细胞培养 2 4、 4 8和 72h后 ,经ELISA检测上清中IL 10蛋白含量分别为 196 1 9、 2 92 5 9和 2 95 3 4pg/ml,能明显抑制经PHA刺激的PBMC分泌IFN γ (抑制率达 6 8 1% )和软骨细胞MHCII类分子的表达。猪IL 10真核表达载体的成功构建并在软骨细胞中表达 ,发挥其免疫调节功能 ,为研究IL 10诱导软骨细胞体内同种异体移植耐受奠定了基础。     

肿瘤相关抗原基因OVA66特异的RNA干扰对肿瘤细胞生物学特性的影响

构建OVA66基因的特异小干扰RNA表达载体,转染HeLa细胞,分析对该基因表达和肿瘤生物学特性的影响。以RT-PCR、Westernblot方法检测OVA66基因在多种肿瘤细胞系的表达谱。利用计算机辅助设计和合成针对OVA66的特异小干扰RNA的DNA片段,定向克隆于特定的干扰载体(pSUPER)。利用脂质体法将重组载体转染于OVA66高表达细胞系HeLa,筛选得到shRNA-OVA66稳定表达细胞。采用Real-timePCR检测目的基因的表达;FACS、Westernblot方法分析目的蛋白的表达。MTT、3H-TdR掺入等方法检测干扰OVA66基因表达后对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。双酶切鉴定得到针对OVA66基因特异的shRNA表达载体(pSUPER-shRNA-OVA66),并经序列分析证实。经检测pSUPER-shRNA-OVA66稳定表达的HeLa细胞(shRNA-OVA66)中目的基因mRNA水平降低;OVA66蛋白表达受到抑制,表明设计的靶片段对目的基因有显著的抑制效果。并显示shRNA-OVA66细胞DNA合成下降;细胞周期分析表明阻断OVA66基因表达可抑制shRNA-OVA66细胞增殖能力,并引发细胞凋亡。OVA66特异的shRNA表达载体构建成功,阻断OVA66基因表达可抑制细胞增殖,促使细胞凋亡,为OVA66蛋白肿瘤生物学功能与肿瘤发生、发展的研究奠定基础。     

子宫内膜异位症患者腹腔液对子宫内膜细胞MHC-Ⅰ类分子表达以及NK细胞功能的调节

目的分析子宫内膜异位症(EM)患者腹腔液对IFN-y诱导异位子宫内膜细胞上MHC-Ⅰ类抗原表达以及对正常人γδT细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法.结果 EM患者腹腔液对IFN-y诱导异位子宫内膜细胞上MHC-Ⅰ类抗原表达具有下调作用.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδT细胞及NK细胞的杀伤功能具有负相调节作用.结论子宫内膜异位症患者腹腔液中存在yδT细胞及自然杀伤细胞功能的抑制因子,对IFN-γ诱导异位子宫内膜细胞上MHC-Ⅰ类抗原表达具有下调作用.     

抗CD94单抗与NK细胞、γδ^＋T细胞及CTL功能的关联

目的：探讨抗CD94单抗与NK细胞、γδ^ T细胞及CTL的相关性。方法,采用荧光检测法,分别分析NK细胞、γδ^ 细胞和CTL上CD94分子的表达,采用^3H TdR掺入法和MTT释放法,分析抗94单抗对这3种细胞的杀伤活性和细胞增殖的影响。结果NK细胞和γδ^ T细胞上CD94分子的表达,明显高于PBL和CTL。抗CD94单抗能激活NK细胞、γδ^ T细胞和CTL的增殖,并能提高γδ^ T细胞和CTL的杀伤活性。结论CD94分子在NK细胞和γδ^ T细胞表面呈高表达。抗CD94单抗对NK细胞、γδ^ T细胞及CTL的增殖具有上调节作用,对它们的杀伤活性具有正向调节作用。     

小鼠局灶性脑缺血模型中细胞间粘附分子-1表达升高

目的　白细胞可以导致缺血细胞损伤,内皮细胞上表达的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）有利于白细胞迁移至组织。本研究目的是对小鼠大脑中动脉栓塞（ＭＣＡＯ）后脑内ＩＣＡＭ－１ 蛋白在组织中表达和含量进行检测。方法　通过对成年雄性ＣＤ－１ 小鼠使用血管腔内尼龙线栓塞术,造成０、３、６、１２、２４、４８ 和７２ ｈ 的持续性大脑中动脉栓塞。缺血程度由激光多普勒流量仪确定,缺血脑组织ＩＣＡＭ－１ 的阳性表达由免疫组化技术检测,并用免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹来定量。结果　在大脑中动脉栓塞后,小鼠缺血脑半球的表面脑血流量减少到基准值的９％ ～１５％ 。各组间大脑中动脉栓塞过程中的脑血流量无显著差异。免疫组化技术显示,缺血中心区和末影区都见ＩＣＡＭ－１ 阳性的微血管内皮细胞,从缺血中心到缺血边缘区微血管内皮细胞表达ＩＣＡＭ－１ 出现增高的趋势。免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹分析结果表明,缺血区ＩＣＡＭ－１的表达在大脑中动脉栓塞后３ ｈ 增高,６～１２ ｈ 达到高峰,并持续到７２ ｈ。结论　研究表明,在持续性大脑中动脉栓塞的小鼠中检测到ＩＣＡＭ－１ 表达明显升高,因为在持续局灶性大脑中动脉缺血后ＩＣＡＭ－１ 可介导白细胞和内皮细胞粘附,加速     

TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2相关多肽的初步研究

从黑色素瘤病人的瘤块和淋巴结中制备黑色素瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）系,通过流式细胞仪对黑色素瘤细胞表型分析。经去垢剂处理、免疫沉淀和亲和层析法从ＨＬＡ Ａ２阳性患者黑色素瘤细胞中分离纯化ＨＬＡ Ａ２蛋白,其纯度通过４％～２０％梯度ＳＤＳ ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ鉴定。１００℃沸水浴和弱酸处理ＨＬＡ Ａ２蛋白经反相 高压液相色谱层析（ＲＰ ＨＰＬＣ）得到不同组份多肽,将其与抗原加工缺陷的ＨＬＡ Ａ２阳性Ｔ２细胞反应,进行重建瘤细胞特异性表位测定。ＴＩＬ杀伤活性结果表明,来源于６２４ 黑色素瘤细胞的不同组份多肽中有三个活性峰值,而来源于Ｃｈａｐ 黑色素瘤细胞的不同组份多肽中仅一个与上述细胞组份位置相同的单一活性峰值。提示具有活性组份的多肽与ＨＬＡ Ａ２限制性ＴＩＬ识别的人黑色素瘤细胞抗原肽有关。     

体外培养中黑色素瘤细胞表面HLAI类分子丢失的鉴定

应用流式细胞术,从ＨＬＡ Ａ２阳性人黑色素瘤细胞系（６２４ Ｍｅｌ）中选择培养,鉴定出一株丢失ＨＬＡ—Ａ２分子的黑色素瘤细胞（６２４—ｎＭｅｌ）,它具有抵抗ＨＬＡ Ａ２限制的、黑色素瘤抗原肽特异性ＴＩＬ杀伤作用。经ｒＩＦＮ γ诱导,能提高６２４－ＭｅｌＨＬＡ－Ａ２分子表达,而不能增强６２４ ｎＭｅｌＨＬＡ－Ａ２分子表达和其对ＴＩＬ的敏感性。结果提示,ＴＩＬ对瘤细胞抗原的识别依赖于ＨＬＡⅠ类分子,而瘤细胞ＨＬＡⅠ类分子的缺失可能是肿瘤逃逸机体免疫监视的一个重要因素。     

正常人及肿瘤病人血清中CML66蛋白抗体水平

正常人及肿瘤病人血清中CML66蛋白抗体水平@程琳玲$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025 @尤强$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025 @王颖$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025 @王树军$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025 @张惠珍$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025 @葛海良$上海第二医科大学免疫学教研室上海免疫学研究所!上海200025~~~~…     

卵巢癌基因治疗的研究现状及进展

随着分子生物学、免疫学以及相关学科的发展,基因治疗可望成为治疗恶性肿瘤的重要方法,目前基因治疗应用于卵巢癌的临床前实验研究已取得较大进展,给卵巢癌特别是晚期患者的治疗带来新的希望.卵巢癌基因治疗的方法主要有基因增补法、基因矫正法、抗血管形成基因治疗、RNA干扰基因治疗等.现综述近几年卵巢癌基因治疗的研究进展.     

剑桥大学免疫学教学带给我们的启示

英国剑桥大学是世界优秀大学之一,英免疫学教学有英独特的教学安排、课程设置和教学理念.结合对剑桥大学免疫学教学的考察,分析他们的教学优点,对我们的免疫学教学改革具有重要的启示作用.