新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建

目的 构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN(hemagglutinin-neuraminidase)基因.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段,将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,经过定向插入组织凝血酶原激活物(tPA)的前导序列和/或A型流感病毒血凝素(HA)基因跨膜区(TM)片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒.结果 所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确.经过体外转染真核细胞,间接免疫荧光和SDS-PAGE蛋白质电泳检测,证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外.结论 成功构建了定位DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2009.04.003作者单位:150040,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科(隋红,李乐静,白玉贤);150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室(李曦,张永欣,肖晶,符芳)通信作者:李曦,E-mail:lx2005@126.com表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型.     

新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建

目的 构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN(hemagglutinin-neuraminidase)基因.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段,将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,经过定向插入组织凝血酶原激活物(tPA)的前导序列和/或A型流感病毒血凝素(HA)基因跨膜区(TM)片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒.结果 所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确.经过体外转染真核细胞,间接免疫荧光和SDS-PAGE蛋白质电泳检测,证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外.结论 成功构建了定位DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2009.04.003作者单位:150040,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科(隋红,李乐静,白玉贤);150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室(李曦,张永欣,肖晶,符芳)通信作者:李曦,E-mail:lx2005@126.com表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型.     

134例首次稽留流产患者的胎儿绒毛染色体分析

稽留流产(missed abortion)又称过期流产,即胚胎或胎儿已死亡滞留在官腔内尚未自然排出者,是自然流产的一种特殊类型.据报道,胚胎发育异常为早期自然流产最常见的原因,胚胎染色体异常所致的流产约占50%～60%[1].目前,临床上通常运用绒毛细胞长期培养法进行染色体检测[2],但通常仅针对于多次稽留流产的患者.     

延伸护理对脑卒中吞咽障碍患者康复的作用

目的：探讨延伸护理对脑卒中吞咽障碍患者康复的作用。方法在脑卒中吞咽障碍患者中抽取79例作研究对象,随机分为观察组（n=39）和对照组（n=40）,观察组应用延伸护理,对照组仅定期来院复查,比较2组患者吞咽功能变化。结果出院后4w,观察组吞咽功能优良率为92.3%,远高于对照组的69.2%（P＜0.05）。结论延伸护理在促使脑卒中吞咽障碍患者康复上有积极作用,值得推广应用于临床。     

留置导尿在无痛分娩中的必要性研究

目的探讨留置导尿在无痛分娩中的必要性。方法采用随机分组的方法对60例接受腰硬麻醉无痛分娩的产妇进行病例对照研究,对照组(30例)在腰硬麻醉后常规给予立即插尿管留置导尿;观察组(30例)腰硬麻醉后未插尿管,而是通过专责助产士在产程进展中积极鼓励和协助患者排尿,产后通过B超观察膀胱残余尿量和尿液培养评估产后尿潴留和尿道感染情况,观察两组的区别。结果观察组在分娩过程中有19例(63.33%)能够成功自行排尿,发生产后尿潴留3例,尿道感染1例;对照组发生产后尿潴留14例,尿道感染6例。结论无痛分娩过程中无需常规持续留置导尿,积极鼓励、指导和协助患者排尿,可以减少尿道感染和产后尿潴留的发生。     

应用微阵列比较基因组杂交技术产前诊断DiGeorge综合征一例

胎儿孕25+周,B超提示宫内生长发育受限,心脏室间隔缺损(图1),主动脉转位,合并羊水过多.父母非近亲结婚,孕期无不良因素接触史,无家族病史.     

微阵列比较基因组杂交技术在产前诊断中的应用研究进展

出生缺陷约占新生儿总数的3％,出生缺陷的原因有遗传学因素、环境因素或者是两者共同作用.在高风险胎儿中,常规染色体核型分析异常检出率为2％～3％.而在产前超声检查提示结构发育异常的胎儿中,常规染色体核型分析异常检出率高达35％[1-3]].传统的G显带染色体核型分析技术通过对羊水、绒毛及脐血细胞进行分析,能够检出所有的非整倍体异常和较大的染色体结构异常,但不能检出较小的(＜10 Mb)染色体结构异常[4].     

荧光定量聚合酶链反应技术快速产前诊断常见染色体非整倍体的临床应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-PCR)技术在快速产前诊断染色体非整倍体中的临床应用价值. 方法 分别选择21、18、13、X及Y染色体上的22个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点及AMXY作为遗传标记,用QF-PCR技术对因唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠(≥35岁)行介入性产前诊断的1740例孕妇的绒毛或羊水样本进行检测,并同时进行染色体核型分析,比较并分析2种方法 检测结果 的符合率.结果 共有1690例产前诊断样本同时成功进行染色体核型分析和QF-PCR技术检测.所有QF-PCR检测报告均在48 h内得出.QF-PCR技术共检出染色体数目正常1649例,占97.57％;异常41例,占2.43％.其中染色体核型分析检测到的1639例正常病例,QF-PCR技术检测结果 均正常.染色体核型分析检测到51例染色体异常中,有41例用QF-PCR技术成功检测出,包括30例21-三体、6例18-三体、1例45,XO、1例47,XYY、1例47,XXX、1例69,XXX,1例47,XXY[94]/46,XY[6](QF-PCR技术检测结果 为47,XXY).QF-PCR技术对21、18、13、X及Y染色体非整倍体检出率100.0％,无假阳性.对于唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠人群,QF-PCR与染色体核型分析这2种方法 检测一致性可达99.4％ (1680/1690),该人群中2例染色体数目异常嵌合体、4例结构异常嵌合体及4例染色体结构异常病例QF-PCR技术未能检出,占总检测样本0.6％(10/1690).结论 QF-PCR技术能够快速、准确、经济、高效地产前诊断染色体非整倍体,对于21、18、13、X及Y染色体非整倍体检出率100.0％,对于唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠人群,QF-PCR可以准确和快速地为孕妇提供99.4％的诊断信息.     

基于微阵列芯片的比较基因组杂交技术在原发性闭经患者中的应用

目的 采用array-CGH技术对原发性闭经患者进行检测,探讨原发性闭经的分子生物学机制.方法 选取原发性闭经患者10例,另外选择10名具有规则月经周期的同龄女性自愿者作为健康对照者.分别采用常规细胞核型分析技术及array-CGH技术对10例原发性闭经患者和健康对照者进行分析.细胞核型分析技术采用常规G显带染色体核型分析技术,array-CGH技术采用美国Affymetrix公司Cytogenetic 2.7M微阵列芯片技术.结果 10例原发性闭经病例经常规G显带染色体核型分析未发现异常,所有病例和健康对照标本均为正常女性染色体核型:46,XX.Array-CGH 分析结果显示,有5例原发性闭经患者的X染色体短臂末端发生了约110000 bp的细小缺失,定位到染色体上的位置为:46,X,del(X)(p22.33).所有健康对照者经array-CGH分析均未见异常的DNA拷贝数改变.结论 Array-CGH技术在DNA水平上提高了染色体病的诊断水平,对于常规方法不能明确诊断的原发性闭经患者,有必要应用array-CGH技术进行更高分辨率的遗传学分析.     

孕产妇心理情感在胎儿超声结构异常中的结局变化

目的探讨孕产妇在早孕期和中孕期胎儿超声结构异常中的心理情感结局,以便能够在遗传咨询中有针对性地进行心理指导。方法选取早孕期和中孕期胎儿超声结构异常的孕妇各50例,分别于初次超声确诊胎儿结构异常的当天,终止妊娠后1个月及终止妊娠后6个月发放不良事件影响之下评估心理健康的调查问卷表,并进行单独访谈,统计评估问卷表的分值,分析患者心理情感的变化。结果 2组妇女在3个测量时间点的心理障碍值都显著高于正常参考值。其中,中孕期妇女在超声检查发现胎儿结构异常的当天其心理抑郁水平达到高峰。结论孕产妇在胎儿超声结构异常中普遍发生心理情感障碍,且该心理异常长期持续存在。本研究提示中孕期超声结构异常胎儿终止妊娠对妇女造成的心理伤害较早孕期的伤害更加严重。