蛋白激酶Cδ亚型磷酸化参与6羟基多巴胺对SH-SY5Y细胞的毒性作用

目的观察蛋白激酶Cδ亚型(PKCδ)磷酸化激活在6羟基多巴胺(6-OHDA)引起的多巴胺能神经细胞死亡过程中所起作用,探讨帕金森病中神经元缺失的分子发病机制。方法体外培养多巴胺能神经细胞系SH-SY5Y细胞,观察预先加入的PKC抑制剂和激活剂对6-OHDA毒性作用的影响,噻唑蓝比色法观察细胞生存率,Western免疫印迹法观察磷酸化PKCδ的表达。结果PKCδ抑制剂rottlerin2μmol/L可抑制PKCδ磷酸化激活,减轻6-OHDA引起的细胞死亡约57%±6%(P<0.01)。总PKC抑制剂双吲哚亚酰胺(BisindolylmaleimideⅠ)和钙依赖性PKC抑制剂G6976不影响6-OHDA的毒性作用和PKCδ激活,而PKCδ激活剂100nmol/L佛波酯,增加磷酸化PKCδ水平,加重6-OHDA的损害,使细胞生存率下降至单用6-OHDA时生存率的66%±9%(P<0.01)。结论磷酸化激活的PKCδ是6-OHDA发挥毒性作用的关键一环,抑制PKCδ可减轻6-OHDA诱导的多巴胺能神经细胞死亡,说明PKCδ在帕金森病患者神经元缺失中可能起作用。     

单克隆抗体免疫荧光法快速诊断合胞病毒肺炎的临床意义(附32例分析)

我科于1987年11～1988年2月月对住院77例支气管肺炎患儿应用我校微生物教研室制备抗呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体(McAb)检查患儿咽部脱落细胞中的RSV特异抗原。国外用McAb检查患者咽部脱落细胞中病毒抗原已有报道[1]。本文就应用McAb免疫荧光法快速诊断呼吸道RSV肺炎32例的临床意     

骨髓基质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的：通过体内、外实验，研究骨髓基质干细胞（BMSCs）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的治疗作用及其机制。方法：建立Lewis大鼠EAE动物模型，在免疫后第6天尾静脉回输PKH26标记的BMSCs，于发病高峰期处死大鼠，组织取材。通过临床评估、荧光示踪、免疫学病理学等方法检测，评估BMSCs对EAE的治疗作用及其机制。同时在体外用化学方法诱导BMSCs向少突胶质细胞分化，观察其分化的情况。结果：通过尾静脉回输，BMSCs能够聚集到病变部位，并发生分化。与对照组相比，回输组大鼠发病临床评分较低，中枢神经系统脱髓鞘的病理改变和炎性细胞浸润减轻，CD4^＋和CD8^＋T细胞表达明显减少（P〈0．05），血清及淋巴细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平显著降低（P〈0．05），IL4的分泌水平显著升高（P〈0．05）。体外诱导72小时未见到BMSCs向少突胶质细胞分化；4天后45％的BMSCs发生分化。结论：在体外BMSCs通过化学诱导可以向少突胶质细胞分化；在体内BMSCs能向病变部位迁移，并部分分化成少突胶质细胞，同时BMSCs通过调节免疫系统的炎症细胞因子表达、CD4^＋和CD8^＋T细胞数和Th1和Th2细胞平衡，对EAE起治疗作用。     

骨髓间充质干细胞定向诱导成类软骨细胞的实验研究

目的　体外诱导骨髓间充质干细胞 (MSCs)向软骨细胞表型分化 ,探讨其分化的条件 ,为其作为软骨组织工程种子细胞提供实验基础。方法　取第二代成年大鼠骨髓间充质干细胞 ,实验组用无血清培养液诱导 ;对照组用含 10 %胎牛血清的培养液自然分化。Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色、透射电镜检测其分化情况。统计学分析不同时间、不同接种密度的软骨分化率。结果　诱导后的MSCs具有软骨细胞特点 ,不同诱导时间、不同接种密度的Ⅱ型胶原免疫组化阳性率有显著差异。诱导 14d为最佳 ,诱导率与细胞接种密度成正相关。结论　成年大鼠骨髓间充质干细胞在无血清培养基能向软骨细胞方向转化。     

实验性重症肌无力大鼠模型的建立及巨噬细胞在发病机制中的作用探讨

目的探讨早期重症肌无力发病机理中巨噬细胞的作用及巨噬细胞相关的细胞因子和趋化因子的变化。方法用原位杂交探索在EAMG动物模型靶器官肌肉组织中细胞因子和趋化因子mRNA的表达。采用原位杂交和免疫细胞化学染色双染技术,检测在Lewis大鼠EAMG早期,巨噬细胞浸润和程序性细胞凋亡。结果在EAMG早期观察在7和12天的EAMG大鼠肌肉组织中可见TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表达细胞瞬时爆发,其峰值分别是(8.7±2.2)、(13.1±1.2)和(6.9±2.4)cells/mm2。第15天TNF-αmRNA的表达细胞数量再一次上升,IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β和溶细胞素的mRNA表达细胞非常低。这些细胞主要在EAMG的早期观察到,范围是1～4cells/mm2。结论(1)EAMG早期大量巨噬细胞浸润,程序性细胞凋亡是浸润的巨噬细胞消除的主要方式;(2)EAMG早期于肌肉组织中细胞因子低水平表达;没有发现C-C趋化因子。     

磷酸化PKCδ参与6-OHDA诱导的多巴胺能神经细胞凋亡

目的： 观察磷酸化PKCδ在6-OHDA诱导的大鼠PC12细胞株凋亡过程中所起的作用，探讨帕金森病发病的可能分子机制。方法： 体外培养多巴胺能神经细胞株PC12细胞，观察PKC激动剂和抑制剂对6-OHDA毒性作用的影响，分别用TUNEL染色和透射电镜法观察细胞凋亡，Western免疫印迹法观察磷酸化PKCδ的表达。结果： PKCδ激活剂PMA加重6-OHDA的毒性作用，使细胞凋亡率上升。PKCδ抑制剂Rottlerin可抑制PKCδ的磷酸化，减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。总PKC抑制剂Bis和钙依赖性PKC抑制剂G6976不能减轻6-OHDA引起的细胞凋亡。结论： 在6-OHDA诱导PC12细胞凋亡的过程中，PKCδ的磷酸化是重要环节之一，PKCδ可能直接参与帕金森病人的神经元凋亡过程。     

骨髓基质干细胞治疗脊髓损伤的体外诱导分化及相关蛋白表达

目的 探讨模拟脊髓细胞环境下骨髓基质干细胞(BMSCs)的分化及蛋白差异表达.方法 分离培养Wistar大鼠骨髓的BMSCs和脊髓的神经细胞,设立BMSCs自然分化组、与神经细胞共培养组和双层培养组,8 d后对各组BMSCs进行神经特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光检测.应用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选双层培养组BMSCs变化明显的蛋白进行分析.结果 BMSCs与神经细胞共培养和双层培养8 d后,BMSCs呈神经细胞形态.NSE和GFAP检测结果 ,BMSCs与神经细胞共培养组明显高于BMSCs与神经细胞双层培养组(P＜0.05),而BMSCs和神经细胞双层培养组又明显高于BMSCs自然分化组(P＜0.05).SELDI-TOF-MS检测到TIP39_RAT和CALC-RAT增加到原来的5.360和2.807倍,INSL6-RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT减少到原来的38.0%、49.9%和43.8%.结论 在脊髓神经细胞微环境下体外培养BMSCs能诱导其分化成神经细胞,而且接触培养分化率高;BMSCs在向神经细胞分化机制中与TIP39_RAT、CALC_RAT、INSL6_RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT密切相关.     

七年制神经生物学教学的几点体会

哈尔滨医科大学开展七年制专业的目的在于培养出更多有较深厚医学基础理论和较熟练专业实践技能的优秀人才。神经生物学作为一门快速发展的新兴学科，正逐渐步入学生课堂，通过亲身的授课体验，浅谈几点教学体会。     

Experimental Research on the Cryopreserved Human Fetal Brain Tissue in Culture

４个月龄的人胎脑组织在无菌条件下分离，经酶消化，低温冷冻保存６个月，胎脑组织在３７℃水浴中快速复温并在体外培养。实验结果证实经冻存的人胎脑组织在体外可以继续生长发育。因此我们得出结论，人胎脑组织可被冷冻保存且保持活性。     

骨髓间充质干细胞定向诱导成类软骨细胞的实验研究

背景用组织工程的方法修复软骨缺损克服了传统方法的诸多不足.目的体外诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性.设计完全随机设计,对照实验研究.单位哈尔滨医科大学组胚教研室及神经生物教研室.材料Wistar大鼠(清洁级动物)6只,雌雄不限,来源于哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心,实验动物生产许可证号SCXK(黑)20020002.方法取第二代成年大鼠骨髓间充质干细胞,实验组用无血清培养液诱导;对照组用含10%胎牛血清的培养液自然分化.Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色检测其分化情况.主要观察指标软骨细胞的鉴定,不同诱导时间Ⅱ型胶原免疫组化阳性率的比较.结果诱导后的MSCs具有软骨细胞的特点.结论成年大鼠骨髓间充质干细胞在特定的培养基能向软骨细胞方向转化,作为软骨组织工程种子细胞具有可行性.