粪肠球菌类毒力基因sprE功能的动物实验研究

目的构建粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因(sprE)突变株,通过动物实验来研究sprE基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价粪肠球菌sprE基因的突变株(sprE mutant)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,小鼠的存活率明显高于野生株感染组,引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论sprE基因在粪肠球菌致病中起着重要的作用,可能是粪肠球菌的毒力因子之一。     

医学细菌学实验课改革的尝试

为了在医学细菌实验课中培养学生实际操作能力和独立工作的能力,我们在我院98级临床医学及护理学五年制本科学生中进行了精心选择实验内容,将实验课相对独立;以病例讨论开始,开设连续性综合实验,增加学生动手机会,培养学生实际工作能力和配以录象及图片教学使教学规范化,内容直观化的细菌学实验课程的改革,结果显示。实验教学方式,方法及内容选择较好,得到了绝大部分学生的认可。     

果糖胺测定在隐性糖尿病中的诊断价值

目的：探讨果糖胺（Ｆｒｕｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＦＭＮ） 与隐性糖尿病的关系。方法：检测２０７ 例健康体检者,１１９ 例非胰岛素依赖性糖尿病（ＮＩＤＤＭ） ,３５ 例隐性糖尿病人的空腹血糖（ＦＢＧ） 和ＦＭＮ。结果：糖尿病组空腹血糖（ＦＢＧ） 及ＦＭＮ明显高于正常对照组（ Ｐ＜ ０．０１） ,而隐性糖尿病组ＦＢＧ与正常对照组相比差异无显著（ Ｐ＞ ０．０５） ,ＦＭＮ明显高于正常对照组（ Ｐ＜ ０．０１） 。隐性糖尿病患者糖耐量试验阳性,餐后２ 小时血糖增高,ＦＭＮ与空腹时无差异（ Ｐ＞ ０．０５） 。结论：ＦＭＮ是诊断隐性糖尿病的一项可靠指标。     

幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 ,产生高水平     

屎肠球菌Hyl蛋白的免疫保护性研究

目的用基因工程方法获得屎肠球菌类透明质酸酶(Hyalronidase,Hyl)蛋白,经口服免疫小鼠后,探讨机体产生的免疫应答和抗感染保护作用。方法Hyl用Ni2+-NTA柱纯化后,作为抗原给小鼠灌胃进行免疫,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。并用屎肠球菌TX0016腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性。结果重组蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,灌胃免疫小鼠后。ELISA检测结果血清IgA、IgG,粪sIgA,肠粘液sIgA明显高于对照组(P<0.01)。通过细菌攻击后,小鼠的平均存活时间也明显长于对照组。结论重组蛋白Hyl经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部粘膜免疫作用和抗菌保护作用。Hyl有望作为预防屎肠球菌口服疫苗的候选抗原。     

屎肠球菌类毒力基因hyl功能的动物实验研究

目的构建屎肠球菌透明质酸酶基因(hyaluronidase,hyl)突变株(*hyl),通过动物实验来研究hyl基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价屎肠球菌hyl基因突变株(*hyl)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于野生株,引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。     

重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的 了解重症监护病房铜绿假单胞菌的耐药情况以及对氟喹诺酮类耐药的分子机制,为临床合理用药提供依据.方法 用E试验法测定83株铜绿假单胞菌对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),从中筛选28株氟喹诺酮类耐药菌,以标准敏感菌株ATCC 27853作为质控菌株,PCR扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),扩增产物片段进行直接测序分析.结果 83株铜绿假单胞菌在痰标本的阳性率最高71.08%;28株氟喹诺酮耐药菌株的gyrA基因在83位(ACC-ATC)有突变,导致氨基酸Thr-Ile的改变;有11株高耐药菌gyrA基因同时在87位(GAC-GGC)有突变,导致氨基酸Asp-Gly的改变;有14株耐药菌株的parC基因在87位有TCG-TTG突变,导致氨基酸由Ser-Leu的改变,未发现parC突变单独存在.结论 重症监护病房铜绿假单胞菌对美罗培南保持较高的抑菌活性;而亚胺培南和氟喹诺酮类药物的滥用,已造成细菌对其耐药率急剧升高,gyrA和parC基因突变与铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物密切相关.     

淋球菌的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

目的 检测108株临床分离淋球菌(NG)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药淋球菌对环丙沙星的MIC以及gyrA和parC基因突变情况.方法 用KB法检测淋球菌对9种药物的敏感性,用E-test法检测耐药菌株对环丙沙星的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变.结果 淋球菌对大观霉素最敏感,其次为头孢曲松、头孢他啶、阿米卡星、四环素、红霉素和青霉素,对喹诺酮类药物高度耐药.环丙沙星的MIC范围在0.008-32μg/ml之间,10株淋球菌喹诺酮类耐药中有6株存在gyrA的Ser91→Phe突变的同时还存在gyrA的Asp95→Gly和/或parC的Aap86/Asn、Ser87→Arg/Ile,有4株只有gyrA基因Ser91→Phe的突变.结论 在淋球菌治疗中可首选大观霉素,其次为头孢曲松和头孢他啶.gyrA和parC基因突变与淋球菌耐喹诺酮类药物密切相关.     

粪肠球菌sprE基因的功能研究

最近有报道在肺炎链球菌发现HtrA（high-tempemtttre requirement A）蛋白，与细菌克服高温、氧化和渗透压力有关。肠球菌原来属于D组链球菌，其许多特性与链球菌相似。肠球菌能否产生HtrA蛋白酶以及确切的功能目前尚不清楚。我们利用BLAST将肺炎链球菌HtrA蛋白酶编码基因与粪肠球菌染色体基因组进行同源性比较，发现粪肠球菌有一个全长为851bp的开放性读框与肺炎链球菌htrA基因有较高的同源性。进一步从基因文库查找此开放性读框，发现它是编码粪肠球菌假定的丝氨酸蛋白酶基因，被命名为sprE。     

双歧杆菌基因工程疫苗研究进展

双歧杆菌是人类最早发现的生理性细菌之一,是能在健康人肠道内定植的益生菌.如今,随着分子生物技术的发展,双歧杆菌基因工程疫苗研究日趋受到重视.此文综述了双歧杆菌基因工程疫苗的理论基础、研究进展以及前景.