4,5,7-三羟基异黄酮对绒癌耐药细胞株JAR/MTX增殖、凋亡和侵袭的影响及相关机制

目的：研究4,5,7-三羟基异黄酮（genistein）对绒癌耐药细胞株JAR/MTX增殖、凋亡和侵袭能力的影响，并探讨其影响侵袭的相关机制。方法： 分别采用MTT法、Annexin-Ⅴ和PI双染法、transwell 小室法，检测不同浓度genistein 作用于JAR/MTX细胞72 h后细胞增殖、凋亡和侵袭能力的变化。采用RT-PCR技术检测雌激素受体（ER）以及与侵袭有关的MTA3、Snail基因mRNA的表达，采用蛋白印迹法和明胶酶谱法检测E-钙黏附蛋白（E-cadherin）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）和9(MMP-9)蛋白的表达。结果： Genistein能抑制JAR/MTX细胞的增殖和侵袭能力，并呈剂量依赖关系。小剂量genistein（10 μmol/L）仅能引起少部分JAR/MTX细胞凋亡，而25、50、100 μmol/L genistein则引起大量细胞凋亡和坏死。JAR/MTX细胞经genistein作用后，ERβ和MTA3的mRNA表达量多于对照组，Snail基因的mRNA表达量少于对照组。E-cadherin的蛋白表达大于对照组，MMP-2和MMP-9的蛋白表达量少于对照组。结论： Genistein能抑制JAR/MTX细胞的增殖，诱导细胞凋亡和坏死，通过上调E-cadherin和下调MMP-2以及MMP-9的表达、抑制JAR/MTX细胞的侵袭能力，MTA3→Snail→E-cadherin通路可能是genistein抑制JAR/MTX细胞侵袭的信号通路之一。     

维甲酸对白血病的诱导分化及基因表达的影响

本研究在临床晚期恶性肿瘤综合治疗中,应用生物反应调节剂(BRM)直接注入转移淋巴结,观察其在临床晚期恶性肿瘤综合治疗中的治疗效果和副作用,探索其可行性和实用性。依据晚期肿瘤患者经多方治疗后,无有效方法或/和文献报导内免疫疗法较有效的疾病种类,并结合患者完全自愿,选择适应症。自1990年3月至1993年6月,共治疗11例,男5例,女6例;37～80岁,中位年龄59岁。本组研究所用药物主要是IL-2等,小剂量应用。淋巴结注射穿刺技术与淋巴结穿刺抽吸细胞病理学检查一致,但要求将药液注入肿大淋巴结皮质层。11例病人,均完成4周一个疗程以上治疗(1～3疗程不等)。疗效评价,根据转移淋巴结及其他病灶治疗前后变化情况,按国际上通用的实体瘤近期疗效标准,进行综合评价,结果完全缓解(CR)5例(45.45％),部分缓解(PR)5例(45.45％),有效率(CR PR)90.91％;缓解后生活质量提高,KPS提高中位数20分。10例缓解后,随访至1994年3月,结果,缓解期从1个月至3年11个月以上,2～5个月以上者8例,占72.73％;效果满意的病种有恶性淋巴瘤、结直肠癌、乳腺癌和小肠平滑骨肌瘤。治疗中和治疗后未观察到因该项治疗引起的任何不良反应,包括无种植性皮肤转移灶发生。     

小鼠SRS腹水瘤SAC克隆系列c－erbB－2表达研究

将ＳＲＳ淋巴瘤小鼠腹水液分离得到ＳＲＳ－８２、ＳＡＣ－ⅡＢ２、ＳＡＣ－ⅡＣ３三个细胞株，应用免疫组化ＡＢＣ法对上述三者分别进行癌基因蛋白ｃ－ｅｒｂＢ－２的检测。结果发现携带有ＳＲＳ病毒的三株细胞系均呈中等强度表达ｃ－ｅｒｂＢ－２，提示ＳＲＳ病毒可能与ｃ－ｅｒｂＢ－２的激活有关。     

CD73对人乳腺癌细胞侵袭力和运动力的影响

目的：探讨CD73在乳腺癌细胞中的表达特征及其与乳腺癌细胞侵袭转移的相关性。 方法： ①采用半定量RT-PCR法和高压液相层析法检测6种乳腺癌细胞株CD73的mRNA表达及CD73的活性。②构建CD73真核表达载体pcDNA-NT5E,采用脂质体转染法将其导入无侵袭力、CD73低表达的乳腺癌细胞T47D，同时以空载体质粒pcDNA和未转染细胞作为对照。利用Transwell体外侵袭力实验和运动力实验，观察转染pcDNA-NT5E对T47D细胞侵袭力和运动力的影响。 结果： ①高度恶性乳腺癌细胞的CD73 mRNA水平和CD73活性均显著高于低度恶性细胞（P<0.05）。②转染后细胞T47D的CD73基因转录、CD73酶活性、细胞的侵袭力和运动力明显高于转染前。 结论： 乳腺癌细胞的恶性程度与CD73表达呈正相关。 CD73可增强人乳腺癌细胞的侵袭力和运动力。提示在乳腺癌转移过程中CD73发挥重要的促进作用。     

研讨式教学法培养医学生创新意识的探索与实践

以培养医学生的创新性思维为宗旨,针对以器官为中心,以疾病为线索的课程编排特点,因材施教,改变传统的结论式教学方式,开展以问题和典型临床病例为线索的研讨式教学,对培养学生创新能力及解决实际问题的能力起到较好的效果.     

C57BL6近交系小鼠前列腺癌原位移植瘤模型的建立

目的建立C57BL6近交系小鼠前列腺癌原位移植瘤模型并探讨其应用价值.方法用微量注射器在C57BL6近交系小鼠的前列腺左右背外侧叶包膜下接种小鼠前列腺癌RM-1细胞2×106个建立原位移植瘤模型,以皮下移植瘤模型作为对照比较两者的肿瘤转移发生情况及生存期.结果原位模型小鼠全部发生肿瘤转移,其中盆腔淋巴结和肺的转移发生率分别为(10/10)、(8/10),对照组仅有肿瘤的局部生长和浸润,无转移发生;原位模型的小鼠平均生存期为(11.0±2.4)d较对照组(23.0±4.7)d明显缩短,差异有非常显著性(P＜0.01).结论小鼠的前列腺癌原位移植瘤模型较好地模拟了人癌体内的自然生长状况,是观察转移性前列腺癌较为适宜的模型.     

病毒导向酶联药物前体5—FC疗法对 前列腺癌的抑制作用研究

前列腺癌是男性常见肿瘤之一 ,在我国的发病率及死亡率也有逐年增加及年轻化的趋势 ,一旦诊断明确已失去手术治疗机会。传统的化疗易使肿瘤细胞产生药物毒性作用及耐受性 ,而ＣＤ(ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉ ｎａｓｅ) /5ＦＣ自杀基因疗法恰可弥补上述不足。ＣＤ基因存在于细菌中 ,其编码产物ＣＤ可催化无毒性的5—氟胞嘧啶 ( 5ＦＣ)脱氢变为有毒性的 5—氟尿嘧啶 ,可在实体瘤或全身使用 ,降低化疗的毒性作用 ,提高敏感性。目的和方法 :采用腺病毒作为载体 ,将ＣＤ基因导入后 ,观察其对前列腺癌细胞系的敏感性、感染率、旁观者效应、在体内…     

Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。     

高脂血症apoE基因敲除小鼠心脏中一氧化氮合酶含量及基因表达

目的 探讨高脂饲料对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠心肌组织中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric-oxide synthase,eNOS）的含量及基因表达的影响。方法 将13只apoE-/-小鼠随机分为两组,即高脂饲料组（n=7）和普通饲料组（n=6）。喂养12周后,测血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）和低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）含量,采用Real-Time RT-PCR法检测心肌组织中eNOS的mRNA表达水平,以免疫组化方法检测eNOS蛋白的表达。结果 高脂饲料组TC、TG和LDL明显高于普通饲料组,HDL则低于普通饲料组（P<0.01）;高脂饲料组心肌组织中eNOS的mRNA和蛋白水平均低于普通饲料组（P<0.01）。结论 高脂饲料导致apoE-/-小鼠发生高脂血症,并引起心肌组织中eNOS的mRNA表达的减少和相应蛋白水平的降低。     

不同浓度甲氨蝶呤对外周血单个核细胞表达和分泌白细胞介素-17的影响

目的 体外观察不同浓度的甲氨蝶呤(MTX)对外周血单个核细胞(PBMCs)表达和分泌白细胞介素(IL)-17的影响,探究MTX有效治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制.方法 分离RA患者和健康人PBMCs,予不同浓度MTX预处理,抗人CD3和抗人CD28刺激后,37 ℃体积分数为0.05的CO2培养箱培养.分别于培养的不同阶段收集细胞或上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析IL-17mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中IL-17的浓度;荧光抗体标记细胞表面抗原CD4和胞内蛋白 IL-17,流式细胞仪分析CD4+IL-17+细胞的比例.结果 比较采用两两配对t检验或独立样本t检验.结果 浓度为0.1、1.0、5.0、25.0μg/ml MTX组IL-17mRNA/GAPDH比值分别为(0.58±0.09、0.48±0.11、0.50±0.09、0.51±0.14),与无药抗体组(0.76±0.08)组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);IL-17分泌水平则分别为(121±54)、(104±45)、(90±36)、(115±41)pg/ml,与无药抗体组(370±187)pg/ml组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);MTX处理组CD4+IL-17+细胞比例的平均值下降,但统计学检验差异无统计学意义(P＜0.05).结论 MTX可以有效抑制PBMCs合成和分泌IL-17,而且在一定的剂量下可发挥显著作用,加大剂量并不能增强该作用.