Foxp3和HO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的相关性表达及依达拉奉保护作用的研究

目的探讨叉头样转录因子-3(Foxp3)和血红素加氧酶(HO-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的相关性及依达拉奉对EAE的保护机制。方法建立大鼠EAE动物模型,观察依达拉奉干预前后动物发病情况,应用Real-time PCR方法检测脊髓组织中Foxp3 mRNA和HO-1 mRNA的含量变化;应用免疫组化染色观察脊髓组织Foxp3和HO-1阳性表达。结果依达拉奉能降低EAE的发病率,延迟发病,改善神经功能评分,减少脊髓中炎性细胞浸润和"血管袖套"的形成,促进脊髓中Foxp3和HO-1的转录。结论依达拉奉对EAE和MS具有保护作用,这种作用在病程早期更明显,是通过促进HO-1的表达上调和CD4+CD25+Foxp3+T调节型淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs)的发育和功能实现的,具有抗炎和抗氧化的双重作用。     

载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响

目的探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apo E)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响。方法采用MOG35-55诱导apo E基因敲除的C57BL/6小鼠(apo E-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型。取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 apo E-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);apo E-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apo E缺乏可以加重这一病变。     

"清心通脉饮"对动脉粥样硬化兔模型相关炎症因子的影响研究

目的:观察清心通脉饮对动脉粥样硬化(AS)兔模型的治疗作用,并探索其可能的机制。方法:新西兰兔采用股动脉球囊扩张术建立AS模型,造模成功后随机分为模型组、阿托伐他汀组和清心通脉饮低、中、高剂量[3.33,6.66,13.32g/(kg·d)]组,每组10只,另取10只兔作为正常组。各组均灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周。末次给药后麻醉采血,全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测血清C反应蛋白(CRP)、白介素-1(IL-1)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。取腹主动脉,苏木精-伊红染色法(HE)观察腹主动脉病理学变化,蛋白免疫印迹法(WB)检测腹主动脉组织中p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、调节蛋白激酶(ERK)蛋白及磷酸化p38MAPK、NF-κBp65、JNK、ERK(p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组兔血脂水平和TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量均显著升高(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κB、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显升高(P0.01)。与模型组比较,清心通脉饮中、高剂量组和阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平明显降低(P0.01,P0.05);清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组HDL-C水平明显升高(P0.01,P0.05);清心通脉饮各剂量组和阿托伐他汀组TNF-α、IL-1、CRP、IFN-β含量明显降低(P0.01),腹主动脉p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显降低(P0.01,P0.05)。模型组腹主动脉内膜破坏,结缔组织增生,泡沫细胞形成,纤维斑块钙化,坏死;清心通脉饮高剂量组和阿托伐他汀组动脉壁规整,平滑,未见明显脂质沉积,动脉内皮增生不明显。结论:清心通脉饮可改善动脉粥样硬化进展,其治疗动脉粥样硬化的机制可能与调节血脂代谢,下调p-p38MAPK、p-NF-κBp65、p-JNk、p-ERK蛋白表达,抑制炎症反应,降低炎症因子的表达有关。     

中药影响实验性自身免疫性脑脊髓炎CD4+T细胞亚群分化的研究进展

实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是由CD4⁺T细胞介导的中枢神经系统脱髓鞘性疾病,是国际公认研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的动物模型。CD4⁺T细胞作为EAE模型的主要免疫应答细胞,存在多个亚群,可分泌多种细胞因子,参与病情进展。CD4⁺T细胞增殖分化及功能紊乱与EAE发病机制密切相关。目前临床尚无治疗MS的有效药物,多以对症应用皮质类固醇激素为主,但不良反应严重,且易产生药物依赖。近年来中药因作用温和、药物安全性较高、成本低、耐受性好等优点逐渐走进大众视野,针对中药对EAE中CD4⁺T细胞亚群分化的影响展开论述,为临床用药提供更多理论基础。     

炙马钱子对自身免疫性重症肌无力大鼠免疫调节机制研究

目的：探讨炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠的免疫调节机理。方法：采用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段方法免疫Lewis大鼠建立实验性重症肌无力模型，观察实验大鼠的临床表现，并将建模成功的EAMG大鼠随机分为模型组，强的松组，炙马钱子低剂量、中剂量和高剂量组，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测正常对照组和成模各组大鼠血清中体液免疫指标AChRab与细胞免疫指标IL-6的含量情况并比较各组之间的差异。结果：大鼠EAMG模型组血清中AChRab和IL-6含量相比正常组显著升高（P＜0.01），药物干预后各组含量都有所下降。炙马钱子高剂量组AChRab含量比中、低剂量组下降更显著（P＜0.01），与强的松组比无显著差异（P＞0.05）；炙马钱子各剂量组IL-6含量均低于强的松组，特别是中、高剂量组更明显低于强的松组，差异有统计学意义（P＜0.01）；炙马钱子中、高剂量组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：炙马钱子能降低EAMG大鼠血清中AChRab和IL-6含量，抑制T、B细胞活化，减轻对突触后膜AchR的损害，缓解EAMG病情，一定剂量范围内的炙马钱子在免疫调节方面表现优于强的松。     

松果菊苷对人肝癌细胞HepG2生长和缝隙连接细胞通讯的影响

目的观察松果菊苷(ECH)对人肝癌细胞Hep G2生长和缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响。方法 Alamar Blue法绘制Hep G2细胞生长曲线,并检测ECH的细胞毒作用;划痕标记染料示踪技术(SL/DT)法观察空白对照组、API阳性对照组、AGA阴性对照组和ECH组对GJIC的影响;异硫氰酸荧光素(FITC)间接免疫荧光法观察ECH对缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。结果 Hep G2细胞在20 000个/m L的细胞密度Alamar Blue还原率与时间有线性关系。ECH(5、10、20、40和80μM)处理Hep G2细胞24 h,细胞存活率分别为(92.69±3.35)%、(88.33±2.12)%、(80.97±2.50)%、(76.95±1.40)%和(69.09±1.11)%(P0.01)。抑制率最高(80μM浓度下)为30.91%。IC50为467.8μM(368.3μg/m L)。SL/DT显示阳性对照芹黄素和ECH处理24 h后,荧光染料在划痕外4列细胞出现了明显荧光(++++),说明细胞出现染料传输的现象。间接免疫荧光法对Cx43表达进行计分,空白对照组细胞得分为(1.40±0.55)分,ECH组得分为(1.60±0.55)分。结果表明ECH组的Cx43表达增强不明显。结论 ECH对Hep G2细胞有细胞毒作用,同时可增强GJIC功能,但Cx43表达不明显,为ECH抗肿瘤机制提供依据。     

补脾强力方对实验性自身免疫重症肌无力大鼠作用研究

目的:研究补脾强力方对实验性自身免疫重症肌无力大鼠的治疗作用及量-效关系。方法:选择Lewis大鼠,经造模,随机分为正常对照组、模型对照组、强的松5.4 mg/kg组、补脾强力方9.49 g/kg、7.12 g/kg、4.75 g/kg组,除正常对照组外,均采用鼠源性AchR-α亚基97-116肽段序列(R97-116)免疫接种复制实验性自身免疫重症肌无力大鼠模型。给药后,采用ELISA法检测各组大鼠血清中AchR-Ab水平及细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17的含量。结果:补脾强力方对实验性自身免疫重症肌无力大鼠体质量的作用效果与给药剂量的高低成正相关;与模型对照组相比,强的松组5.4 mg/kg组、补脾强力方9.49 g/kg、7.12 g/kg、4.75 g/kg组中AchR-Ab水平及细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17的含量明显下降,且下调趋势与剂量高低成正相关。而大鼠血清中IL-10的含量,各给药组间均无明显差异。结论:补脾强力方可明显改善实验性自身免疫重症肌无力大鼠的体质量,同时,可明显下调该模型大鼠血清中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17的含量,抑制AchR-Ab的产生而起到治疗作用,且干预效果与给药剂量成正相关。     

壳聚糖复合药膜的研制及实验研究

目的 :制备壳聚糖口腔复合膜 ,并通过建立口腔溃疡的动物模型 ,观察复合药膜对实验性口腔溃疡愈合的影响。方法 :选择壳聚糖作为膜载体 ,加入芦荟、表皮生长因子 (EGF)等药物制备口腔复合膜 ,用动物实验验证复合膜的疗效。结果 :(1)复合膜厚约 0 .5mm ,复合膜每平方厘米含水溶性壳聚糖 0 .0 0 7g、芦荟全叶冻干粉 0 .0 5 1g、EGF 40IU、丁卡因 0 .5 3 3mg。(2 )不同时间复合膜组溃疡面积均小于对照组 (P <0 .0 5 ) ;平均愈合速度复合膜组快于其他组 (P <0 .0 5 ) ;水肿充血程度明显好于对照组 ;炎性细胞在各个时间点复合膜组均少于对照组 (P <0 .0 5 ) ;成纤维细胞高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :壳聚糖复合药膜可明显促进实验性口腔溃疡愈合 ,具有一定的应用前景 ,但作用机制有待进一步阐明。