沙蚕提取物的抗氧化活性研究

目的探讨沙蚕提取物的抗氧化活性。方法采用DPPH法观察沙蚕提取物的抗氧化活性，通过Sephadex LH-20凝胶过滤，对沙蚕提取物中的抗氧化物质进行了初步分离纯化。结果与结论沙蚕提取物具有较强的清除自由基（DPPH）的能力，通过定性分析方法确定该物质为一类小分子量的多肽类物质。     

沙蚕(Perinereis aibuhitensis)硫酸多糖的结构表征及抗凝血活性研究

目的 对来源于沙蚕（Perinereis aibuhitensis）的硫酸多糖进行结构表征和抗凝血活性研究。方法 采用两步酶解法从沙蚕中提取多糖;利用强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱对粗多糖进行分离纯化;通过离子色谱法、高效液相色谱法（HPLC）、高效凝胶渗透色谱-多角度激光光散射仪（HPGPC-MALLs）联用技术、硫酸软骨素酶ABC酶法分析、核磁共振氢谱（1H-NMR）等方法,研究纯化多糖的化学组成和结构特征;通过测定APTT、PT和TT评价其体外抗凝血活性。结果 从沙蚕中纯化得到了2种硫酸多糖组分PAE1和PAE2,二者的总糖含量、蛋白含量、硫酸根含量及分子量分别为65.21%、14.31%、0.33%、24.49 kDa和53.08%、11.33%、13.46%、57.39 kDa。PAE1主要由Gal（43.58%）、Glc（32.63%）、GalN（8.71%）、GlcA（7.66%）及少量Fuc（2.77%）组成;PAE2主链为硫酸软骨素C（GlcAβ1→3GalNAc6S）,支链主要由Fuc（35.33%）、Gal（20.9%）和Glc（8.98%）构成。PAE1和PAE2均可明显延长APTT和PT。结论 首次从沙蚕中提取、分离得到2种硫酸多糖,其中PAE2是1种含有Fuc、Gal与Glc支链并具有明显的体外抗凝血活性的结构新颖的类硫酸软骨素,该发现为沙蚕硫酸多糖的开发提供了依据。     

沙蚕纤溶酶的一种纯化方法

目的 从双齿围沙蚕体内提取并纯化一种新的纤溶酶。方法 应用硫酸铵沉淀、透析、凝胶柱层析（Sephadex G-100）以及电泳等生化手段对沙蚕纤溶酶进行分离纯化。用平板法测定它降解纤维蛋白的活性。结果 得到纯的沙蚕纤溶酶,测出其等电点为4．5左右,由两条边组成,其相对分子量分别为33000u和14400u。结论 该酶为首次从沙蚕中发现的一种新的纤溶酶。     

重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究

目的表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究。方法将表达载体pMAL-PPA转化入Ecoli DH5α构建工程菌，IPTG诱导工程菌大量表达麦芽糖结合蛋白一沙蚕溶栓活性蛋白酶（MBPPPA），细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Sepharose FF离子交换层析得到了纯化。用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤维蛋白溶酶原激活活性，然后对其部分性质进行了研究。结果构建了表达MBP—PPA的工程菌。经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白，Factor Xa切割融合蛋白后，重组沙蚕溶栓活性蛋白酶（PPA）体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性，性质研究表明PPA热稳定性好，最适pH为8．0，该酶在pH6．0～9．0范围内有较好的稳定性，酶活在有机溶剂中至少维持20d，25mmol·L^-1PMSF能完全抑制其活性。结论证实PPA是一种纤溶酶原激活剂，且将来有望成为一种新型溶栓药物。     

双齿围沙蚕蛋白酶的纯化及其性质

目的:纯化双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis Grube)蛋白酶,并对其性质进行研究.方法:将沙蚕匀浆液先后进行Superdex-75凝胶柱层析、MonoQTM阴离子交换柱层析及SP-Sepharose 4B阳离子交换层析进行纯化.将经过非还原性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白酶电转移至含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中,通过观察明胶的分解来确定电泳条带的蛋白酶活性.对纯化后蛋白酶的最适pH值,热稳定性,最适温度,蛋白酶抑制剂的影响,有机溶剂的稳定性,金属离子对酶活性的影响等性质进行了测定.结果:纯化后得到的一种蛋白酶,还原性SDSPAGE显示纯化的蛋白酶为两条带,分子量分别为M,34 900和M,33 900,而非还原性SDSPAGE出现了分子量分别为Mr 65 600、Mr 57 900、Mr 43 500的三条蛋白带,明胶蛋白酶活性图谱检测显示酶活性主要在约Mr 66 000处.该蛋白酶具较好的热稳定性,在pH 8-10和20-35℃的情况下有较高活性.PMSF对该酶有较强抑制作用,而有机溶剂对该酶没有明显的影响.结论:该蛋白酶由两个通过二硫键连接在一起的亚基构成,两亚基的分子量分别为Mr33 900和Mr 34 900;本文所采用的新的明胶蛋白酶活性图谱检测法是一种非常灵敏和有效的蛋白酶活性检测方法.     

沙蚕组织内几种营养成分的分析

对沙蚕组织内营养成分进行了分析。结果表明，沙蚕组织内含有67.43％的氨基酸，14.24％的脂肪酸，其中EPA含量为6.5343％，谷氨酸含量为10.2888％；此外还含有大量的Zn，I和Se等元素以及纤溶酶等，显示了它作为功能食品及药用物质的潜在应用价值。     

基因重组沙蚕纤溶活性蛋白的克隆、表达和活性检测

 目的从双齿围沙蚕消化道中克隆并表达具有纤维蛋白溶解活性的蛋白。方法提取沙蚕消化道上皮细胞RNA,逆转录获得cDNA。根据丝氨酸蛋白酶家族基因保守序列设计兼并引物,筛选包含丝氨酸蛋白家族保守位点的阳性克隆,进行核苷酸测序。根据该序列利用5′RACE技术进行扩增,将获得的基因片段克隆到pMAL-p2载体中,在大肠杆菌BL21中进行融合表达。表达的融合蛋白经过直链淀粉树脂亲和色谱和DEAE-Sepharose 4B纯化后,纤维蛋白平板法检测其溶栓活性。结果cDNA经5′RACE扩增获得长度为260 bp的基因片段,推测其包含可编码83个氨基酸的完整序列(约9.0×10³);重组pMAL-p2表达出51.0×10³的融合蛋白,经过测定具有明显的溶栓活性。结论从双齿围沙蚕中克隆获得的基因片段表达的融合蛋白具有溶栓活性,有望成为一种新型的纤溶药物。     

沙蚕纤溶酶的一种纯化方法

目的 从双齿围沙蚕体内提取并纯化一种新的纤溶酶。方法 应用硫酸铵沉淀、透析、凝胶柱层析（Sephadex G-100）以及电泳等生化手段对沙蚕纤溶酶进行分离纯化。用平板法测定它降解纤维蛋白的活性。结果 得到纯的沙蚕纤溶酶,测出其等电点为4．5左右,由两条边组成,其相对分子量分别为33000u和14400u。结论 该酶为首次从沙蚕中发现的一种新的纤溶酶。     

茂名双齿围沙蚕营养元素的测定

目的:测定茂名双齿围沙蚕Ca、Mg、Cu、Fe、Mn、Zn6种营养元素的含量。方法:采用湿法消化法消解样品,采用火焰原子吸收光谱法测定样品Ca、Mg、Cu、Fe、Mn、Zn6种营养元素的含量。结果:双齿围沙蚕Ca、Cu、Fe、Mn、Zn的含量丰富,尤其富含Ca、Fe和Zn。结论:方法简便、准确,可用于双齿围沙蚕营养元素的测定。