紫柏凝胶通过调节ERK及P38/MAPK信号通路下调宫颈癌荷瘤裸鼠E6、E7蛋白表达研究

目的:观察ERK及P38/MAPK信号通路在紫柏凝胶影响宫颈癌裸鼠移植瘤致癌蛋白E6、E7表达中的作用。方法:体外培养Siha细胞,成功建立人宫颈癌荷瘤裸鼠模型,随机分为模型组,顺铂组(腹腔内注射0.5 ml顺铂,4 d1次),紫柏凝胶高、中、低剂量组(外用紫柏凝胶0.9428、0.4714、0.2357 g/kg,1 d1次),试验期28 d。称取瘤重并测量瘤体积,HE染色观察移植瘤组织病理学变化,免疫组化SP法检测瘤体中的p-p38、p-ERK、E6及E7蛋白表达水平。结果:紫柏凝胶各组的裸鼠肿瘤体积均明显小于模型组(P<0.05),高、中、低剂量组抑瘤率分别为36.23%、31.24%和14.94%。HE染色紫柏凝胶各剂量组移植瘤组织出现明显坏死样改变。与模型组比较,高、中剂量紫柏凝胶组瘤组织的E6、E7蛋白表达水平降低(P<0.05),同时p-ERK及p-p38蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:紫柏凝胶对HPV(+)宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,可下调致癌蛋白E6和E7的表达,其机制可能与抑制ERK及P38/MAPK信号通路有关。     

鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

目的：探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法：以鸦胆子油乳（2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml）作用于SiHa细胞24、48、72 h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果：MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80 μg/ml 药物作用72 h时的抑制率可达92.43%;20 μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化“梯状”条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40 μg/ml药物组作用48 h后凋亡率分别为（8.02±241）%、（51.60±7.67）%、（77.22±5.80）%。结论：鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。     

异紫堇碱抑制裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长

目的研究异紫堇碱(ICD)对裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的影响,探讨异紫堇碱抑制宫颈癌发生发展的机制。方法将人宫颈癌Siha细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠皮下建立动物模型,待移植瘤平均直径≥0.5 cm时,随机分为对照组及腹腔注射不同剂量异紫堇碱干预组。4周后取出瘤体组织,用HE染色法观察瘤体组织病理形态学,用免疫组化染色及Western blot方法观察负荷瘤组织中的蛋白表达。结果经异紫堇碱干预后的宫颈癌Siha细胞裸鼠负荷瘤体积减小(P<0.05);细胞形态可由干细胞样向上皮样细胞转化;上皮细胞分化成熟标记E-cadherin表达明显升高,而HPV16E6蛋白和间叶组织标志物vimentin的表达下降。结论异紫堇碱可能通过抑制携带HPV亚型的宫颈癌Siha细胞中E6蛋白的表达及EMT相关信号通路来抑制宫颈癌的发生发展。     

甘氨双唑钠和塞来昔布联合同步 放化疗对宫颈癌细胞的影响

目的:探讨甘氨双唑钠和塞来昔布联合同步放化疗(顺铂10 mg/L+放疗2 Gy)对宫颈癌Siha细胞增殖的影响.方法:用不同浓度的甘氨双唑钠及塞来昔布分别处理Siha细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖活性,并求出无毒浓度;用两药的无毒浓度分别及同时联合同步放化疗处理Siha细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖活性...     

20(s)-原人参二醇诱导体外培养Siha细胞凋亡的作用

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养人宫颈癌Siha细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)、阳性对照组(40 μg/L顺铂)及PPD 10、20和40 μmol/L组。分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,采用Annexin V-EGFP/PI双染色法、TUNUL染色法检测细胞凋亡情况,分别采用RT-PCR、Western blotting方法检测bax基因的转录及蛋白表达情况。结果：不同剂量的PPD处理后,Siha细胞变圆回缩并出现碎片,Annexin V-EGFP/PI染色呈现不同程度的绿染和红染,TUNUL染色可见绿色荧光,bax基因的转录与蛋白表达升高。结论：PPD可诱导人宫颈癌Siha细胞出现凋亡,其作用与bax基因表达上调有关。     

真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1的构建及其在Siha细胞中的表达

目的：构建真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRN1表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法：用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRN1的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂质体介导转染Siha细胞;Western Blot鉴定MKRN1在Siha细胞中的稳定表达.结果：RT-PCR成功地扩增出一条约1477 bp的片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western Blot证明人MKRN1能以融合蛋白的形式在Si-ha细胞中稳定表达.结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1,获得了稳定表达人MKRN1基因的Siha细胞克隆,为进一步研究人MKRN1的功能及其与细胞增殖及凋亡的关系提供了实验基础和重要的细胞模型.     

紫柏凝胶抑制宫颈癌Siha细胞增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 研究紫柏凝胶对HPV阳性宫颈癌细胞Siha的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法 选取对数生长期Siha细胞,采用不同浓度(15、7.5、3.25 mg/mL)组,不加药物Siha细胞为对照组.MTS检测细胞生长抑制,台盼蓝染色检测细胞存活率,HOECHST 33342/PI染色法检测凋亡细胞形态学改变.结果 MTS法检测,各组紫柏凝胶对Siha细胞的生长均有不同程度的抑制作用,3.125 mg/mL剂量组与空白组相比有统计学意义(P<0.05),IC50为(15±2.1)mg/mL;台盼蓝染色,紫柏凝胶对Siha细胞生长有一定抑制作用,各浓度组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);紫柏凝胶作用Siha细胞后细胞间质变松,细胞质颗粒增多,染色质凝聚,分块,胞质浓缩;HOECHST 33342/PI染色,荧光显微镜下观察到紫柏凝胶引起细胞发生凋亡.结论 紫柏凝胶能抑制宫颈癌Siha细胞的增殖和诱导其凋亡.     

异常黑胆质成熟剂与顺铂能下调宫颈癌细胞Bcl-2和Survivin的表达

目的:研究异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合对体外培养的人宫颈癌细胞SiHa增殖的影响,并探讨对凋亡抑制基因Bcl-2和Survivin的表达的影响。方法:异常黑胆质成熟剂总酚分别与顺铂联合作用于SiHa细胞后,荧光倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞术检测Siha细胞各组早期凋亡率的变化及Bcl-2的表达,实时荧光定量PCR法检测Survivin的表达。结果:①倒置显微镜下观察单药和联合用药组细胞体积变小变圆,细胞核固缩,核质比减小,胞质浑浊,可见空泡状细胞,部分细胞核膜消失,可见较多脱落圆形死亡细胞。②异常黑胆质成熟剂总酚和顺铂对Siha细胞作用48 h后,流式细胞术检测Siha细胞各组早期凋亡率分别为(14.2±4.06)%和(16.2±1.66)%,明显高于对照组(5.43±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.001)都有很好地促进凋亡的作用,异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合有交互作用,其促进凋亡的作用比单药更显著(P<0.01)。③异常黑胆质成熟剂总酚和顺铂单药及总酚与顺铂联合均能降低Bcl-2的表达,并且单药与对照组、联合用药组与单药组之间均有统计学差异(P<0.001)。④实时荧光定量PCR法检测Survivin的表达定量在异常黑胆质成熟剂总酚组和顺铂组分别为(0.334±0.038)及(0.562±0.035),明显低于对照组Survivin的表达(3.470±0.091),差异有统计学意义(P<0.001),药物联合组有很好的交互作用,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂联合能显著增加SiHa细胞的早期凋亡率,其机制与降低Bcl-2和Survivin表达有关。     

20(s)-原人参二醇对体外培养宫颈癌Siha细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养宫颈癌Siha细胞生长周期的作用及其对p53、p21及细胞周期素E(cyclin-E)基因转录和表达的影响,探讨PPD抑制Siha细胞增殖的机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组（乙醇）和实验组（20  μg•L^-1 PPD）,分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48 h后流式细胞术检测细胞周期,Real time PCR和Western blotting法检测宫颈癌Siha细胞内p53、p21及cyclin-E　mRNA及蛋白的表达情况。结果：与阴性对照组比较,20  μg•L^-1 PPD处理48 h后,G0/G1　期Siha细胞比例增加（P<0.01）,G1期阻滞作用明显增强;Siha细胞中p53与p1 mRNA及蛋白表达水平上调（P<0.01）,cyclin-E  mRNA及蛋白表达水平下调（P<0.01）。结论：PPD可抑制人宫颈癌Siha细胞增殖,其机制可能与上调p53、p21基因表达,下调cyclin-E基因表达有关。
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As2O3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗对宫颈癌治疗的体外实验研究

目的：研究As2O3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗（MFH）对宫颈癌Siha细胞株的治疗作用。方法：采用改良的乳化冷冻凝聚法制备As2O3磁性纳米微球，能谱仪、原子荧光光谱仪对其进行表征；高频交变磁场中进行体外升温实验。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测As2O3磁性纳米微球联合MFH对宫颈癌Siha细胞株生长的影响，流式细胞仪（FCM）检测凋亡。结果：所制备As2O3磁性纳米微球近似球形，粒径约为120nm，含砷量为0．61％，在输出电流I=300A的高频交变磁场中具有升温能力，且能达到肿瘤治疗的有效温度（41℃～46℃）；As2O3磁性纳米微球联合MFH能抑制宫颈癌Siha细胞株的生长，促进其凋亡，且均较单纯As2O3液及单纯MFH明显。结论：As2O3磁性纳米微球可同时发挥As2O3的细胞毒性作用和磁感应加热的联合定向治疗作用，效果优于单一治疗，为临床治疗宫颈癌提供新的方法。