肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备和鉴定人卵巢癌cDNA文库筛选到的肿瘤相关抗原OVA66的单克隆抗体,为研究其生物学功能提供手段。方法：采用基因重组方法构建pET32bOVA66重组表达质粒,经大肠杆菌诱导表达OVA66融合蛋白,利用NiTED亲和层析技术分离纯化HisOVA66融合蛋白;采用经典的杂交瘤技术制备OVA66单克隆抗体;ELISA和Western blotting鉴定单克隆抗体的生物学和免疫学特性,并对OVA66单克隆抗体在细胞免疫荧光法、流式细胞术和免疫组化等方法中进行了初步应用。结果：成功构建重组表达载体pET32bOVA66,并诱导表达和纯化OVA66融合蛋白。制备获得两株小鼠OVA66单克隆抗体杂交廇细胞株5F4和4G9。两株细胞分泌的抗体亚类均为IgG1,轻链为κ型,亲和力常数Ka分别为2.96×1010和0.4×1010L/mol,初步表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可以采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测OVA66的表达,5F4还可通过免疫组织化学检测肿瘤组织中OVA66的表达。结论：成功制备两株特异性的小鼠OVA66单克隆抗体杂交瘤细胞株,为进一步研究OVA66的生物学特性和临床应用奠定了基础。     

探讨血清lncRNA联合检测CEA、CA724、CA199在胃癌诊断中的临床意义

目的 探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)FOXD2-AS1、含铜胺氧化酶4的假基因(AOC4P)的相对表达水平,以及与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199、CA724的联合检测在胃癌(GC)诊断中的临床应用价值。方法 收集该院80例GC患者和85例年龄相仿的体检健康者的血清以及16组GC组织与癌旁组织。利用TCGA数组库分析FOXD2-AS1在GC及癌旁组织中的表达;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测组织AOC4P,以及血清FOXD2-AS1、AOC4P的相对表达量;化学发光法检测血清CEA、CA199、CA724的水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线评价FOXD2-AS1、AOC4P单独诊断以及其与CEA、CA199、CA724联合检测对GC的诊断效能。结果 初诊GC患者血清FOXD2-AS1、AOC4P相对表达量升高,且显著高于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,FOXD2-AS1、AOC4P、CEA、CA199和CA724的曲线下面积(AUC)分别为0.879、0.856、0.699、0.654和...     

肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达

目的分析肿瘤相关抗原OVA66在人肿瘤组织中的表达特征,探讨其临床应用价值。方法采用免疫组织化学法检测多种组织肿瘤芯片和肿瘤组织标本(包括胃癌、肠癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌和卵巢癌)及其相应的非肿瘤组织中OVA66蛋白的表达,分析其表达与组织的良恶性以及肿瘤转移和临床病理特征的关系。结果 OVA66蛋白在胃、肠、卵巢、膀胱和肾的肿瘤组织中的表达显著高于正常组织,在肺和乳腺肿瘤组织中表达较弱。膀胱癌OVA66的表达与膀胱癌的病理分级呈现相关性,肠癌和膀胱癌的淋巴转移组表达阳性率略高于未转移组,但差异无统计学意义。结论 OVA66蛋白在多数肿瘤组织中均呈高表达,在膀胱癌中与肿瘤病理分级相关,提示OVA66有可能成为新的肿瘤标志物应用于多种肿瘤的辅助诊断。     

EB病毒感染患儿淋巴细胞亚群特征和EBV DNA载量分析

目的探讨儿童EB病毒(EBV)感染引起的外周血淋巴细胞亚群的变化特点,并检测EBV感染患儿血清EBV DNA的载量。方法选取17例传染性单核细胞增多症(IM)患儿(IM组)、18例慢性活动性EB病毒(CAEBV)感染患儿(CAEBV组)和15名健康儿童(健康对照组)。采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清EBV DNA载量,采用Kruskal-Wallis H和Mann-Whitney U检验进行统计分析,Spearman法进行相关分析。结果 IM组淋巴细胞比例和计数、CD4~+T细胞计数、CD8~+T细胞计数均明显高于健康对照组(P0.05),其中CD8~+T细胞比例和计数的中位数分别高达61.5%和5 217个/μL,自然杀伤(NK)细胞、CD19~+细胞比例明显低于健康对照组(P0.05)。CAEBV组淋巴细胞比例明显高于对照组(P0.05),B、NK、CD4~+T、CD8~+T 4种细胞计数2个组之间差异无统计学意义(P0.05),CD4~+T细胞、CD8~+T细胞计数明显低于IM组(P0.05)。IM组和CAEBV组EBV DNA载量中位数分别为3.60×103和1.25×104拷贝/m L,2个组之间差异有统计学意义(P=0.027)。IM组和CAEBV组EBV DNA载量与淋巴细胞亚群数量无相关性(P0.05)。结论 IM患儿与CAEBV感染患儿的淋巴细胞亚群特点有很大不同,IM患儿CD8~+T细胞大量增殖是淋巴细胞计数显著升高的主要原因。综合血清EBV DNA载量与淋巴细胞亚群检测有助于IM与CAEBV感染的鉴别诊断。     

乙型肝炎患者外周血各淋巴细胞亚群绝对值的变化及临床意义

目的分析乙型肝炎患者外周血各淋巴细胞亚群的绝对值的变化,以评估乙型肝炎患者机体的免疫水平。方法选取2012年6月至2014年8月在上海交通大学医学院附属新华医院就诊的109例乙型肝炎肝患者作为乙型肝炎组,另选取20例同期体检健康者作为健康对照组。采集所有研究对象的促凝和肝素抗凝外周血,临床检测乙型肝炎病毒(HBV)抗原抗体免疫指标,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA载量,采用流式细胞术检测其外周血各淋巴细胞亚群的百分比与绝对值。并根据乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达水平及HBVDNA载量将患者分为HBeAg阳性组与阴性组,以及HBV-DNA阳性组与阴性组,比较外周血各淋巴细胞亚群绝对值。结果乙型肝炎患者外周血CD3+T细胞、CD4+T辅助细胞(CD4+Th细胞)、CD8+杀伤性T细胞(CD8+Tc细胞)、CD19+B细胞绝对数均低于健康对照组(P0.05),组间CD3-CD16+CD56+自然杀伤性细胞(NK细胞)绝对数比较差异无统计学意义(P0.05)。HBeAg阴性患者外周血CD3+T、CD4+Th、CD8+Tc及CD19+B细胞绝对值均低于HBeAg阳性患者(P0.05),但CD3-CD16+CD56+NK细胞绝对值比较差异无统计学意义(P0.05);HBV-DNA阳性患者CD4+Th细胞绝对值低于HBV-DNA阴性患者(P0.01),其余各淋巴细胞亚群的绝对值比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论乙型肝炎患者外周血淋巴细胞绝对数量的变化可提示其免疫功能的紊乱。     

多重基因甲基化分析在宫颈癌诊断中的应用研究

目的 分析宫颈脱落细胞CADM1、C13ORF18、PCDHA4和TERT 4种基因的甲基化水平在识别宫颈癌及癌前病变中的价值.方法 收集2019年9月至2020年8月在上海交通大学医学院附属新华医院妇科就诊的101例女性患者及20例健康女性(对照组)的宫颈脱落细胞,提取基因组DNA进行人乳头瘤病毒(HPV)16/18...     

人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位预测

目的:预测人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位。方法:B细胞表位预测,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、极性)预测为基础,结合ABCpred预测结果,并经二级结构预测筛选等综合分析。结果:OVA66的B细胞表位可能位于209-216,266-275,294-301,362-368和391-396氨基酸残基的区域内或附近。结论:该结果对应用合成肽抗原进行肿瘤患者的早期诊断研究具有重要指导意义。