脐血CIK细胞表型变化与细胞毒活性相关性研究

目的 研究脐血来源细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞表型变化与细胞毒活性相关性.方法 用流式细胞术测定诱导前脐血单个核细胞及诱导后培养7、14和21 d CIK细胞的表型;用CCK-8测定培养0、7、14和21 d CIK细胞按20∶1、10∶1、5∶1与肿瘤细胞U251、SiHa和A549接种时对其的细胞毒活性.结果 ...     

濒危动物药材替代品的研究进展

濒危动物药材是中医药的重要组成部分，在疾病的治疗中具有独特性。目前，虎骨、犀牛角、穿山甲、羚羊角和熊胆等珍稀濒危动物药材，其来源动物均被列为国家重点保护动物，临床应用受到限制，现今解决方式主要是基于药理药效相似、亲缘关系相近、人工养殖、人工合成等途径寻找和开发濒危动物药材替代品。虽然人工养殖获取的熊胆、麝香及人工合成的虎骨、牛黄、麝香等可在一定程度上解决濒危动物药材短缺的现状，但仍存在养殖技术突破难、替代品行业内不完全认可等问题。据此，在对现有濒危动物药材替代品进行梳理的基础上，笔者提出了关于替代品“同源、同质、同效”的构想，拟构建利用前沿生物技术与多组学检测相结合的方式来开发、评价替代品的新思路，为保护珍稀濒危动物和解决濒危动物药材短缺问题提供一定的支撑。     

脐带间充质干细胞对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老实验研究

目的研究人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对D-半乳糖所致的亚急性衰老小鼠的抗衰老作用。方法对模型对照组和治疗组连续8周颈部皮下注射D-半乳糖(0.25 mg/10 g)以建立衰老模型,两周之后治疗组注射脐带间充质干细胞。检测脐带间充质干细胞治疗前后衰老相关指标:包括小鼠血清、肝组织、脑组织中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化。结果模型对照组与治疗组相比,SOD、CAT偏低,MDA含量偏高并且存在显著性差异(P≤0.05),与空白对照组相比,则存在极显著性差异(P≤0.01)。结论脐带间充质干细胞能够显著改善D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的相关衰老指标,具有抗衰老作用。     

开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及ATP/AMP 的影响

目的：探讨开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆及ATP/AMP、GABA、iNOS含量的影响。方法：采用微血栓栓塞法制备多发梗死性痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫和开场实验评价学习记忆功能及运动行为;HE染色法评价海马CA1区病理形态学改变;HPLC法测定脑组织ATP和AMP的含量;ELISA试剂盒检测脑组织γ-氨基丁酸含量和外周血清iNOS含量。结果：与模型组比较,开心散可以显著缩短模型大鼠逃避潜伏期、增加穿越平台次数、增加开场实验大鼠站立次数、延长运动时间、缩短静止时间,改善海马CA1区神经细胞损伤,显著提高脑组织ATP/AMP、降低脑组织GABA含量和血清iNOS含量,具有显著的统计学意义（P < 0.05）。结论：开心散具有改善多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及运动行为异常的作用,其机制与降低脑组织GABA和血清iNOS含量,提高脑组织ATP/AMP,改善脑组织能量供应有关。     

风泄的临床表现与治疗探讨

“风泄”之病,古有记载,但今人罕提,未见系统论述者。本文结合文献和临床实例,从肠道阴肤的角度,系统论述了风泄的主要病机,涉及外风、内风、外风内风夹杂三大方面,并结合了兼夹邪气概括风泄的临床表现,根据临床实践得出风泄久病后常见气虚证、阴虚证或血虚证。本文还总结了中医常用于风泄的三类治法和主要方药,提出外风内袭,以祛风透邪为主;内风者,从肝论述,以息风健脾为要;内外风夹杂者,当用搜风之法。并附验案1则。     

体外培养不同时间后冻存对脐血来源CIK细胞生物学活性的影响

目的： 观察体外培养不同时间后冻存对人脐血来源细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞增殖、免疫表型、细胞毒活性以及细胞因子分泌的影响。 方法： CIK细胞在体外培养6 、9 、12 d后冻存1个月,复苏后培养至72 h,其间每隔24 h检测细胞增殖情况,并采用流式细胞术检测复苏后细胞免疫表型、CCK-8法检测复苏后细胞对A549细胞的杀伤活性、ELISA方法检测复苏后CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的变化。 结果： 体外培养不同时间后冻存的CIK细胞在复苏后仍然显示出较好的增殖活性,其中,体外培养6 d后冻存组CIK细胞增殖活性明显高于体外培养9 d和12 d后冻存组CIK细胞,复苏72 h时,6、9、12 d冻存组CIK细胞数分别为(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106个（P<0.01）。 体外培养6、9、12 d后冻存组CIK细胞复苏24 h后,各冻存组CD3+CD56+、CD3+CD8+细胞比例逐渐增加,且复苏72 h后6 d冻存组CIK细胞中CD3+CD56+和CD3+CD8+细胞比例最低。体外培养后冻存组CIK细胞在复苏24 h内对A549细胞的杀伤活性较低,但24 h后细胞毒活性有较大幅度的增加,且体外培养12 d后冻存组CIK细胞对A549细胞的杀伤活性高于6 d和9 d冻存组CIK细胞,如复苏后72 h,12、6、9 d冻存组CIK细胞对A549细胞的抑瘤率分别为（0.81±009）%、（0.59±0.06）%、（0.42±0.08）%（P<0.01）。ELISA检测结果显示,随着复苏时间的延长,体外培养不同时间后冻存的CIK细胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐渐上升;复苏72 h时,体外培养6 d后冻存组CIK细胞分泌IFN-γ的量要高于其他组,而体外培养12 d后冻存组TNF-α的分泌量则明显高于其他组。 结论： 体外培养不同时间后冻存对CIK细胞的生物学活性有一定影响,但复苏后经短时间培养后基本恢复,提示CIK细胞可以在培养至12 d后进行冻存。     

细胞因子预处理对体外扩增NK 细胞活性的影响

目的 采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血单个核细胞（PBMCs）进行自然杀伤细胞（NK）的 扩增培养,培养过程中白细胞介素IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 以不同组合及不同方式添加,探究体外培养 NK 细胞的细胞因子最佳组合和添加方式。方法 根据细胞因子组合及添加方式的不同,将NK 培养分为3 组。 A 组：IL-2+IL-15 组,B 组：IL-2+IL-12+IL-15+IL-18 组,C 组：IL-12+IL-15+IL-18 预处理/IL-2 组。 培养过程中第7 天和第14 天分别取样统计各组细胞因子培养后的细胞数量,并使用流式细胞仪检测NK 细胞 表面分子表达;将NK 细胞与K562 细胞共培养,然后ELISA 测定NK 细胞的IFNγ 释放量,CSFE/7-AAD 法 检测NK 细胞的杀伤活性。结果 3 组不同的培养方式所得细胞的扩增倍数差异无统计学意义,随着培养时间的 增加,NK细胞的比例也逐渐上升,3组间NK细胞比例差异无统计学意义（P >0.05）。NK细胞表面CD25（IL-2Rα） 的表达情况比较,差异有统计学意义（P <0.05）,C 组的阳性率高于A 和B 组。IFN-γ 的释放量和NK 细胞的 体外杀伤活性一致,均为C 组高于A 和B 组。对肿瘤患者的NK 细胞,C 组的细胞因子添加方式也能很好的进 行扩增（CD3-CD56+ 细胞比例大于50%）。结论 C 组中的细胞因子预处理方式能够高效扩增NK 细胞,与A 或B 组联合添加的方式比较,该方式能显著激活NK 细胞的杀伤活性。     

成都市健康中青年人群外周血淋巴细胞免疫表型正常参考值调查

目的:调查成都地区健康人群中外周血淋巴细胞免疫表型分布,建立该地区淋巴细胞免疫表型正常值参考范围.方法:使用流式细胞术对112例健康人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型检测并分析结果,运用SPASS17.0进行统计学分析,确定各淋巴细胞亚群正常值参考范围.结果:成都地区30岁～50岁健康人群外周血淋巴细胞亚群正常值参考范围为:CD3+CD19-,33%～86%;CD3+CD4-CD8+,7%～38%;CD3+CD4+CD8-,12%～63%;CD3-CD19+,2%～19%;CD3-CD(16+56)+,6%～43%.结论:建立了成都地区健康中青年人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型正常值参考范围,为分析和研究机体细胞免疫状态及肿瘤、免疫性疾病的预防提供了参考依据.     

CIK细胞输注联合化疗治疗食道癌1例

食道癌是发生在食道上皮组织的恶性肿瘤,食道癌的发病与食道发炎受损相关,同时也具有一定的遗传性.我国是食道癌的高发区,死亡人数仅次于胃癌.通常食道癌患者接受大剂量的化疗后,免疫能力下降,极易引起感染,同时食道癌治疗后仍有转移复发的危险.CIK(cytokine-induced killer,多细胞因子诱导的杀伤细胞)是经过多种细胞因子诱导外周血单个核细胞产生的一类免疫细胞,扩增速度快,细胞毒性强,具有T细胞的抗肿瘤性,同时具有NK细胞的非MHC(major histocompatibility complex)限制性,可以有效杀伤通过免疫逃逸途径隐藏的癌细胞,无毒副作用.