EBV转化技术中小鼠腹腔巨噬细胞的作用

EBV转化—融合技术是制备人单克隆抗体(McAb)的重要途径之一。但是,EBV转化技术的难点是在转化后,由于同时被EBV激活的特异性记忆T细胞的细胞毒作用,B细胞     

膜结合型肿瘤坏死因子在人乳腺癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

肿瘤坏死因子(TNFL-α)具有较强的抗肿瘤作用.膜相关的肿瘤坏死因子(MA-TNF-α)同样具有抑制肿瘤生长的作用.由于MA-TNF-α仅在局部微环境中起作用,因此没有全身性的毒副作用.为了观察MA-TNF-α对肿瘤的作用,本研究将含突变的MA-TNF-α基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,以其产生的病毒上清感染人乳癌细胞MDA231研究了外源基因在靶细胞中的整合与表达,并通过体外杀伤及裸鼠体内致瘤性实验观察了其抗肿瘤效应.基因转导后生成的产病毒细胞产生的病毒上清能有效转染MDA231细胞(转导后的细胞称为MDA231T).提取细胞基因组DNA行PCR分析     

膜结合型TNF-α基因在人胃癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

TNF-α是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子．它有二种形式，一种是26kD膜结合型，另一种是17kD分泌型，二者在体外均有细胞毒活性。我们利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体。用Lipofectin将逆转录病毒载体及重组逆转录病毒载体引入包装细胞CRIP，     

PROMOTER HYPERMETHYLATION OF p16 GENE IN PRE- AND POST-OPERATIVE PLASMA OF PATIENTS WITH GASTRIC ADENOCARCINOMA

Objective: To detect promoter hypermethylation of p16 gene in matched pre- and post-operative plasma of patients with gastric adenocarcinoma for evaluating the effectiveness of therapeutic intervention. Methods: Tissue samples, pre- and post-operative plasma of 84 patients were collected. Plasma of 15 healthy people was collected as control. After sodium-bisulfite treatment, extracted DNA was amplified for p16 promoter by methylation-specific polymerase chain reaction (MSP). The PCR products were detected by both gel-ethidium bromide electrophoresis and high performance liquid chromatogram (HPLC). Results: Among 84 patients, p16 hypermethylation was detected in 26 (31.0%) cancer tissues and 2 (0.02%) tumor-adjacent tissues and 12 (14.3%) pre-operative plasma, while negative in plasma of healthy people. For positive plasma cases, the paired tumor tissues were confirmed to be methylated.Within available 30 pairs of matched pre- and post-operative plasma, 6 pre-operative plasma was positive, and only 1 of 6 plasma remained hypermethylated after surgery. The results detected by HPLC exactly matched those by gel-electrophoresis. Conclusion: The alteration of status of p16 hypermethylation in post-operative plasma is considered the consequences of surgical intervention. Although p16 hypermethylation has no role in pre-operative staging of gastric cancer, detecting hypermethylated p16 in plasma could be utilized in monitoring patients after surgery.     

ATP对人白血病细胞U937凋亡的影响

目的　探讨ATP诱导人白血病细胞U937细胞凋亡的机理。　方法　应用ATP(0 2 3g L)作用于培养的U937细胞 ,应用免疫荧光细胞化学方法检测连接蛋白Cx4 3、F 肌动蛋白 (F actin)、纽蛋白 (vinculin)的表达。　结果　ATP诱导U937细胞凋亡小体形成的同时Cx4 3表达增强、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装改善。　结论　ATP诱导人白血病细胞凋亡时 ,凋亡小体的形成与间隙连接蛋白Cx4 3表达、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装有着平行关系 ,表明它们在U937凋亡小体形成过程所起的重要作用     

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况.方法: 从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照.结果: 96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变.肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性.结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一.     

含人突变DMFR基因的逆转录病毒对造血细胞的转导及其对小鼠造血功能的重建和长期保护作用

本研究以含人突变的二氢叶酸还原酶(DHFR)基因的逆转录病毒载体,应用共培养的方法将突变的DHFR基因导入小鼠造血干细胞,再回输给经致死剂量照射的小鼠,经不断MTX筛选和反复移植,研究了其对骨髓的重建和长期保护作用.     

Hu-PBL-SCID小鼠的构建及其在人单抗制备中的应用

由于抗原免疫的受限,使人单抗的研究一直处于十分困难的境地,因此就有多种人单抗制备技术路线:转化、融合和基因工程抗体技术。各种技术方法都有其特点,也互相吸收各自的长处.移植有人淋巴细胞的严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)的构建,使我们有可能利用体内免疫去刺激记忆B细胞,或诱发原发免疫反应,使抗原特异性B细胞增殖,从而有可能进一步用于融合或制     

人突变DHFR基因高效逆转录病毒载体及其在小鼠造血细胞的表达

本文用转染了人突变DHFR基因逆转录病毒载体的新一代产病毒细胞AM12-S31,研究了其耐药特性、产生的病毒滴度及DHFR基因在小鼠造血细胞的表达.MTT法显示AM12-S31细胞对G418和氨甲喋呤耐受,对照细胞AM12对G418和MTX敏感.产生的病毒滴度为7.8×10~4～4.2×10~5CFU/ml,且为无复制活性病毒.将AM12-S31上清转染小鼠骨髓造血细胞后进行体内、外研究.CFU-GM分析显示:于不同C418浓度均有阳性克隆,而AM12上清转染组则无耐G418克隆.将转染后骨髓细胞从尾静脉回输给经致死剂量(900 rad)照射小鼠,MTX筛选(第一周为4mg/kg,每周二次;以后各周10mg/kg,每周二次),结果:实验组小鼠白细胞计数和红细胞压积逐渐恢复正常;对照组小鼠 30天内全部死亡.PCR分析耐G418 CFU-GM克隆和实验组小鼠骨髓细胞,均检测到标志基因Neo~R的存在.因此,初步研究表明该产病毒细胞能够产生高滴度、安全有效的非复制型逆转录病毒,并能成功转染小鼠造血细胞、表达目的基因,使在MTX筛选条件下重建小鼠造血功能.该研究为进一步开展耐药基因治疗打下了基础.     

膜结合型TNF-α基因转导人胃癌细胞株的建立及其生物学特性研究

本研究利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体,将重组载体及空载体导入包装细胞CRIP,筛选G418抗性克隆。测定病毒滴度均为1×10~4CFU/ml,并转入胃癌细胞MGC-803,经筛选分别获得抗性克隆MGC-803~T及MGC-803~P。经Southern杂交证实目的基因已整合在MGC-803~T细胞基因组中。MGC-803~T对L929细胞有杀伤作用,而对照细胞无杀伤作用。MGC-803~T细胞的形态、体外增殖率无明显改变。裸鼠体内接种结果表明,与对照组相比,MGC-803~T细胞在裸鼠体内的生长受到明显抑制,表现为肿瘤发生延缓,肿瘤重量明显减轻。上述结果表明,逆转录病毒介导的突变型膜结合型TNF-α基因可在人胃癌细胞中获得有效表达,并能改变其生物学特性。