rBS-WC霍乱疫苗的动物免疫研究

rBS与WC联合免疫比单纯免疫效果好;小鼠或家兔的免疫间隔适当缩短未见影响免疫保护力;小鼠一次大剂量口服疫苗后可获良好保护.rBS-WC抗原、吸附霍乱类毒素疫苗(上海苗)和吸附霍乱疫苗(武汉苗)经家兔肌肉免疫,武汉苗未见抗CT反应,对cT攻击无保护,对Eltor(小川)活菌攻击保护较弱;上海苗抗CT反应比rBS-WC低.家兔口服rBS-WC半年后,抗CT及杀弧菌抗体维持较高水平,显示其动物免疫的持久性.     

冻干口服霍乱rBS-WC疫苗现场试验及评价

为考核冻干口服霍乱rBS-WC疫苗的安全性、免疫原性和对人群的保护效果,1997年7月～1998年7月在广州军区指战员中,进行了冻干口服霍乱rBS-WC疫苗(胶囊剂型)的现场试验,将6 079人随机分为3组,采用双盲法分别服用高剂量疫苗(1mg rBS+1×1011WC),低剂量疫苗(Img rBS+5×1010WC)及安慰剂.从疫苗的副作用,人群的抗体反应、服苗后半年内急性腹泻病的发病率,对产毒性大肠杆菌(ETEC)感染的保护率等方面进行了考核,结果表明该疫苗安全、有效.     

乙型肝炎病毒adw亚型基因组在大肠杆菌中的克隆

乙型肝炎是严重危害人类健康的一种疾病,其感染率相当高,尤其在亚洲及非洲地区某些国家更高。患者中有相当数量成了慢性患者,致使劳动力丧失,部分导致肝硬变、肝坏死和肝癌。乙型肝炎的病原是乙型肝炎病毒(HBV),存在于感染者的血浆或肝细胞中,在感染者的血浆中为42nm球状的Dane颗粒结构,HBV感染的免疫学标志有表面抗原(HBsAg)、“e”抗原(HBeAg)及其相应的抗体和抗核心抗原(HBcAg)的抗体。     

从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酸转移酶

末端脱氧核苷酸转移酶(以下简称TdT)能催化脱氧核苷三磷酸在寡聚或多聚脱氧核苷酸以及DNA的3′—OH端的聚合反应,不需要模板。TdT是遗传工程试验中的重要工具酶之一,利用这种酶在一条DNA分子的3′—OH端加上一个同聚物,     

O139霍乱弧菌O-抗原基因的克隆表达

Ｏ１３９霍乱弧菌Ｏ┐抗原基因的克隆表达＊曲殿波刘传暄马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０霍乱弧菌脂多糖已经被公认为一种保护性抗原。它由３部分组成：Ｏ－抗原、核心多糖和磷脂Ａ。其Ｏ－抗原具有特异的免疫原性及抗原性。霍乱弧菌的抗血清与脂多糖...     

径向离子交换色谱分离纯化分泌表达的重组霍乱毒素B亚单位

离子交换色谱作为常用的制备色谱技术，已广泛应用于生物工程产品的分离纯化。但传统的色谱技术处理量小、流速低，柱体设计对大规模纯化实用性差，不利于工业化生产。近年来发展的径向色谱柱，具有容量和负荷量大、操作方便、可原位再生并可高压消毒的特点，同时由于柱体...     

工程菌产CT-B和加热灭活霍乱弧菌菌体单独或组合免疫家兔效果观察

霍乱毒素 B 亚单位(CT-B)加灭活霍乱弧菌菌体构成的组合苗已在人群经口免疫试验中被证明效果优于传统的单一菌苗,但 CT-B 来源困难。我们用遗传工程方法构建成了分泌 CT-B 的高产工程菌株,为此型苗的广泛应用开辟了美好前景。本文以日本大耳白兔为动物模型观察工程菌产 CT-B 和灭活霍乱弧菌单独或组合经口免疫的效果。试验组用工程菌产 CT-B     

糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定

目的：构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体，探讨SRR氨基酸相应9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的关系。方法：以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板，用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应9核苷酸的KR6酶域DNA片段，并克隆到载体pWHM3上，构建了同源重组质粒pWHM3-SRR。将pWHM3-SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株，筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3-A、B和C。λC3-A在无硫链丝茵肽(Thio)的R3M斜面上生长两代后，制备的原生质体涂R3M平皿，挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3-SRR。结果：部分基因组DNA序列分析表明，糖多孢红霉菌λC3-SRR染色体上SRR氨基酸相应9核苷酸已经敲除，Zabspec Fab质谱分析证实λC3-SRR菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B。结论：糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应9核苷酸敲除的λC3-SRR突变菌株可以合成3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B，SRR为KR6酶域上NADPH2′-磷酸结合位点。     

糖多孢红霉菌表达载体pZMW的构建

目的：构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法：用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子，并利用pSET152质粒上链霉菌染色体整合位点(attP)和安普霉素抗性基因，构建了染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZW。结果：pZMW表达载体能够整合到链霉菌和糖多孢红霉菌染色体上，并能够在链霉菌和糖多孢红霉菌体内表达硫链丝菌素抗性基因tsr。结论：pZMW表达载体能够在糖多孢红霉菌中表达外源基因。     

碱性磷酸单酯酶在DNA体外重组试验中的应用

在遗传工程中,目的基因与载体DNA进行连接反应时,为确保这些DNA与载体重组成功,通常需加入数倍于目的基因的载体DNA。但是,大量加入载体DNA,由于连接反应使大多数DNA分子自身环化,在转化时产生大量不含目的基因的转化子,而含重组DNA的转化子则很少,需筛选大量菌落,才能得到含有重组DNA的转化子。