丹蛭降糖胶囊通过mTOR/S6K1信号通路对糖尿病肾病大鼠的干预作用研究

目的研究丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠的肾脏病理改变和足细胞自噬水平的影响,初步探讨其相应的作用机制。方法选取GK大鼠40只,采用醋酸脱氧皮质酮-盐皮下注射联合高脂饲料喂养诱导糖尿病肾病模型。造模成功后随机分为模型组、丹蛭降糖胶囊低剂量组[0.54 g/(kg·d)]、高剂量组[1.08 g/(kg·d)]、缬沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只。另选取10只同周龄正常Wistar大鼠作为正常组。模型组和正常组给予等容积生理盐水。连续灌胃10周后检测空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和尿微量蛋白(U-mAlb)。Western Blot检测肾小球p-mTOR、p-S6K1、Beclin-1、LC3和Nephrin蛋白的表达,HE染色和PAS染色后于光镜下观察肾脏病理变化,电镜下观察各组亚细胞形态结构变化。结果与正常组比较,模型组FBG、SCr、BUN、U-mAlb水平升高(P<0.01);与模型组比较,丹蛭降糖胶囊低、高剂量组和缬沙坦组U-mAlb水平降低(P<0.01)。模型组可见肾小球基底膜增厚,系膜基质沉积,足细胞损伤,各用药组均有不同程度改善,丹蛭降糖胶囊高剂量组足细胞内有较多自噬体形成。与正常组比较,模型组p-mTOR、p-S6K1的表达增高,Nephrin、Beclin-1和LC3的表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组p-mTOR、p-S6K1的表达下降,Nephrin、Beclin-1和LC3的表达增高(P<0.01)。丹蛭降糖胶囊高剂量组和缬沙坦组Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平较丹蛭降糖胶囊低剂量组升高(P<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊具有减轻糖尿病肾病大鼠U-mAIb、足细胞损伤及相关肾脏病理改变的作用,其机制可能与抑制mTOR/S6K1信号通路进而提高足细胞的自噬活性有关。     

miR-21对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及作用机制

目的　探讨MicroRNA-21（miR-21）对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖的影响及作用机制。方法　采用Real-time PCR技术检测miR-21在正常视网膜组织和确诊RB组织中的表达情况；然后在转染的基础上运用MTT检查RB细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白PDCD4、Bax、Bcl-2的表达。结果　与正常视网膜组织miR-21表达 （0.703±0.071）相比，RB组织miR-21为高表达（2.214±0.162），差异有统计学意义（P<0.01）。在Weri-Rb-1细胞中，与NC组(2.245±0.213)相比，miR-21抑制剂转染后明显降低了miR-21的表达水平，miR-21 inhibitor组为0.683±0.075,差异有统计学意义 （P<0.01）。两组细胞转染后24 h、48 h、72 h、96 h，MTT测定法检测细胞活力结果显示:两组24 h的A值比较，差异无统计学意义 （P>0.05），miR-21 inhibitor 组在 48 h、72 h、 96 h的A值均低于 NC 组，差异均有统计学意义 （均为P<0.01）。流式细胞术检测结果显示:NC组凋亡细胞在总细胞中百分比为（3.045±0.301）%和（4.832±0.493）%，miR-21 inhibitor组凋亡细胞在总细胞中百分比为（2.593±0.257）%和（40.167±4.014）%，miR-21 inhibitor组Weri-Rb-1细胞的凋亡率明显高于miR-21 NC组(P<0.01)。Western blot检测结果显示:NC组PDCD4表达（0.192±0.045）相比miR-21 inhibitor组（0.683±0.091）表达明显减少，NC组Bax的蛋白表达水平（0.143±0.036）相比miR-21 inhibitor组（1.192±0.054）也明显减少，差异均有统计学意义（P<0.01)，NC组Bcl-2蛋白表达（0.864±0.038）相比miR-21 inhibitor组（0.257±0.026）明显增多，差异有统计学意义（P<0.05)。结论　miR-21是RB的促癌基因，miR-21抑制剂可以通过降低miR-21表达抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡，这一过程与PDCD4、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白有关。     

X线及MRI对聚丙烯酰胺凝胶隆胸后乳腺病变诊断价值的评价与比较

目的对聚丙烯酰胺凝胶(PAG)注射式隆胸术后,出现并发症或合并乳腺其他病变的X线与MRI的诊断价值进行评估。方法回顾性分析26例PAG隆胸术后钼靶X线与MRI的影像表现。结果钼靶X线及MRI能显示充填物位置、形态,合并乳腺病变4例,X线全部漏诊,MRI能检出病灶。结论钼靶X线是PAG隆胸术后普查、随访的首选方法,但出现并发症或者合并乳腺病变时,MRI具有无法比拟的优越性,在临床诊断与治疗中发挥了重要作用。     

hTERT反义cDNA对人脑胶质瘤细胞的抑制作用

目的探讨人端粒酶催化亚基(hTERT)反义cDNA(pAdeasy-hTERT)在体外对胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法将腺病毒介导的pAdeasy-hTERT作用于人胶质瘤细胞系U251,用MTT法检测细胞存活率、端粒酶重复序列扩增法测定端粒酶活性、Westem杂交鉴定hTERT蛋白的表达、RT-PCR法检测hTERT cDNA水平、PCNA观察肿瘤细胞的凋亡情况以及用流式细胞仪对转染后肿瘤细胞的周期进行分析。结果pAdeasy-hTERT在体外明显抑制肿瘤细胞生长,降低端粒酶活性,抑制hTERT表达。结论pAdeasy-hTERT显著抑制人胶质瘤细胞生长,可成为恶性胶质瘤基因治疗的靶基因。     

一种新型的适用于延迟溶栓治疗的大鼠脑血栓模型的制作

目的 通过对血栓大小的改良,建立适用于延迟溶栓治疗的大鼠脑血栓模型.方法 将10个长度0.8～1.0 mm、宽度0.35 mm的白色血栓经颈内动脉分别注入栓塞脑动脉,形成局灶性脑血栓模型.接受脑血管栓塞的138只SD雄性大鼠被随机分为两大组,分别为单纯缺血组(n=68)和延迟溶栓治疗组(n=70).单纯缺血组不接受任何治疗;延迟溶栓治疗组分别在血栓注入3、6和9 h后,将10 mg/kg的rt-PA自股静脉缓慢注入.使用MRI评价梗死灶的位置、大小、栓塞后不同时间的相对脑血流量.末次MRI检查结束后,大鼠脑组织用4%甲醛固定,作病理检查.结果 共有131只大鼠在血栓注入后脑内形成明确梗死灶,模型成功率为95%,脑梗死仅位于同侧大脑半球占84.7%(111/131),局限于左侧顶叶皮质或(和)左侧基底节的占79.4%(104/131),局灶性脑梗死体积占同侧大脑半球(23.12±6.04)%;对侧大脑半球也同时出现梗死灶占14.5%(19/131).发生局灶性出血11只,大面积出血1只,出血率为9.2%(12/131),均发生在延迟溶栓组.单纯缺血组大鼠,在血栓注入后3、6和9 h的rCBV分别为(34.13±17.55)%、(40.67±25.91)%和(40.72±26.51)%,各组之间rCBV均无显著差异(分别为3 h和6 h,Z=-0.958,P=0.338,3 h比9 h,Z=-1.147,P=0.251).延迟溶栓后成活率高(24 h死亡13只;48 h死亡1只,溶栓后8 d和12 d各死亡1只).结论 改良后的大鼠脑血栓模型是可靠的可重复性的类似于人类大脑中动脉分支栓塞的脑血栓模型,适用于研究延迟溶栓治疗的大鼠脑血栓模型.     

醋酸精氨酸对创烧伤患者预后的影响及安全性分析——86例多中心、随机、双盲、安慰剂对照试验

目的观察服用醋酸精氨酸对创烧伤患者预后的影响及可能出现的不良反应。方法采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照的研究方法,将96例创烧伤患者(实际完成86例)随机分为治疗组和对照组,治疗组41例,服用醋酸精氨酸0．4 g·kg-1·d-1;对照组45例,服用安慰剂酪氨酸,剂量同前,均连用7 d。两组患者采用等氮、等热量的营养支持疗法。比较患者创面(切口)愈合时间、住院时间及不良反应发生情况。结果创伤患者治疗组(29例)创面(切口)愈合时间和住院时间分别为(11．1±2．8)、(19±6)d,明显短于对照组(13．2±5．5)、(22±6)d(33例,P< 0．05);烧伤患者治疗组(12例)创面愈合时间和住院时间各为(20±5)、(28±6)d,与对照组(22±8)、(29±8)d(12例)比较,差异无统计学意义(P>0．05)。在整个试验过程中,患者出现的不良反应为恶心、腹泻,其中治疗组1例占2．44％,对照组1例占2．22％,两组比较差异无统计学意义(P= 1．000)。以上不良反应停药后消失。结论服用醋酸精氨酸能显著促进创伤患者创面(切口)愈合,缩短住院时间,且无明显不良反应,但对烧伤患者的预后无明显改善,这可能与病例数较少有关,其确切疗效有待于通过大样本的临床试验予以确定。     

5173例儿童静脉滴注抗感染药物现状调查及护理对策

目的了解儿科门诊静脉滴注抗感染药物的应用情况,探讨护理对策。方法回顾性调查2004年10月~2005年4月儿科门诊静脉滴注的所有患儿,对其使用抗感染药物的情况进行整理分析。结果2~7岁是使用抗感染药物的高峰年龄组,抗感染药物应用占同期输液患儿的98·2%,抗感染药物使用频率高低顺位依次是:第三代头孢类、抗病毒类、青霉素类、第一代头孢、中药、第二代头孢和氨基甙类。抗菌药物与抗病毒药物同用占56·14%,抗菌药物二联用药占9·51%,抗菌药物三联用药占0·19%。结论加强护理管理,是促进抗感染药物合理应用的有效途径,包括正确给药、细致观察、合理用药、健康教育。     

巯基化合物对内毒素诱导大鼠枯否细胞NF—kB活性和肿瘤坏死因子释放的影响

目的 观察巯基化合物对内毒素诱导大鼠枯否细胞（KC）NF-kB活性和肿瘤坏死因子-a（TNF-a）释放的影响。方法采用胶原酶灌注和percoll密度梯度离心法分离得到高纯度大鼠KC，在过夜培养后冲洗两遍（不含血清），加入内毒素（LPS）10ng／ml刺激原代培养的KC，观察不同浓度谷胱甘肽乙基酯（GSHEE）及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对大鼠KCTNF-a释放和KC内谷胱甘肽（GSH）及NF-kB活性的影响。并观察使用谷胱甘肽合成抑制剂BSO后，对NAC抑制炎症因子的影响，采用凝胶滞留电泳法测NF-kB活性，采用高效液相色谱分析法测GSH水平。结果 LPS诱导KC中GSH水平无变化；GSHEE和NAC可提高KC中GSH水平（P〈0．05），降低NF-kB活性和TNF-a释放（P〈0．05）。NAC与BSO合用时KC中GSH水平无变化，TNF-a释放降低（P〈0．05）。结论 NAC通过抑制KC中NF-kB的激活和TNF-a的释放调节KC功能，但这种抑制作用并非通过增加GSH介导。     

《灵枢·官针》刺痹法研究

《灵枢·官针》是关于中医古典针法的经典文献,其中所论刺痹法,内容丰富,手法多样,至今对临床仍有重要指导意义.刺痹法共有九种,毛刺法刺皮肤治浮痹,合谷刺刺肌肉治肌痹,恢刺与关刺刺筋腱治筋痹,输刺与短刺刺骨治疗骨痹.特殊操作类又有多针、多向刺法的齐刺、傍针刺和烧针刺法的焠刺,以治疗各种经久不愈的痹痛.研究这些古刺法,对于提高痹证的治疗效果,具有一定的指导意义.     

咪达唑仑在肠镜检查中的应用

目的　研究咪达唑仑在肠镜检查中的清醒镇静作用。方法　行肠镜检查的门诊或住院病人 10 0例 ,随机分为药物组与对照组 ,每组 5 0例 ;药物组肠镜检查前缓慢推注咪达唑仑 5 μg kg ,2min后开始检查 ,术中根据情况一次追加 1～ 2 μg kg ,但总量不超过 8μg kg ;对照组为常规检查。观察两组病人检查过程中心率、血氧饱和度、血压及呼吸的变化。治疗结束后询问病人对检查过程的记忆丧失程度、感受及满意情况 ;记录检查时间与是否完成检查 ,同时操作者及助手评价病人的配合情况。结果　药物组大部分病人 ( 90 % )肠镜置入及检查过程中听从医生的指令、无焦虑 ,配合肠镜检查 ,其他的病人略有不适但都能配合检查 ,无一例不能耐受检查 ;对照组只有 5 8%的病人能配合检查 ,且有 2例因无法耐受导致检查失败 ;药物组病人对检查过程 74%完全无记忆 ,部分记忆和完全记忆的 2 6% ;而对照组部分记忆和完全记忆为 10 0 % ;药物组 90 %以上的病人对检查过程满意 ,无不满意 ,对照组满意率不到 10 % ;药物组的HR、MAP、SpO2 基本平稳 ;对照组的病人在检查过程的血压明显上升但心率下降。结论　小剂量的咪达唑仑 ( <8μg kg)能很好地应用于肠镜检查 ,具有明显的记忆缺失、减少痛苦、提高满意率和检查率 ,稳定血液动力学的作