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1.
肾综合征出血热疫苗后备毒株的分离和生物学特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的从肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺中分离汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行型别鉴定和生物学特性研究,为HFRS疫苗后备毒种库的建立打下基础。方法疫区阳性鼠肺研磨液接种长爪沙鼠分离病毒,并将分离到的HV经乳沙鼠脑内连续传代,采用直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验,检查毒株的型别,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度和抗原滴度。结果从疫区32份阳性鼠肺中分离到9株HV,经单克隆直接荧光血清检查6株为汉滩病毒株,3株为汉城病毒株,经乳沙鼠脑内连续传代,其中4株毒株的病毒滴度和抗原滴度较高,汉滩和汉城毒株的病毒和抗原滴度最高分别达106.50、106.00和1∶5120、1∶5120。结论4株毒株的病毒滴度和抗原滴度均较高,可作为HFRS疫苗后备毒种的筛选毒株。 相似文献
2.
目的 为了对2004年浙江省报告的输入性疑似登革热病例查明病因,从分子水平分析流行毒株的生物学特征,追踪传染源,为疾病的预防控制提供实验室依据。方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、IFA和荧光RT—PCR方法分别检测登革病毒IgM、IgG抗体和病毒核酸,并用C6/36和BHK-21细胞分离登革病毒。采用RT—PCR方法扩增病毒E基因和NS1基因后分别进行序列测定,并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性和进化树分析。结果 从患者血清中检测到登革病毒IgM、IgG抗体和登革2型病毒核酸,并分离到登革2型病毒;浙江省登革2型病毒分离株(ZJ/01/04)与登革2型国际标准株Jamaica、国内Fujian/10/99株和Saudi/92株在E基因上氨基酸的同源性分别为97.1%、99.2%和99.6%,而与登革1、3、4型毒株相同区域氨基酸同源性分别为68.7%、66.9%和63.6%。基因进化树显示ZJ/OI/04分离株与Saudi/92株亲缘关系最近,在进化树的同一分支上。结论 从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该输入病例是由登革2型病毒引起,该毒株最有可能来源于沙特阿拉伯。 相似文献
3.
TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测登革1、2型病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立特异、灵敏、快速的荧光定量RT—PCR方法用于检测登革1、2型病毒核酸,并初步应用于登革热的临床标本检测。方法 根据GenBank登录的登革热毒株序列。应用生物学软件进行序列比对,分别在登革病毒1型的NS5基因和2型的C基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针。对荧光定量RT—PCR反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度和稳定性。同时对疑似登革热病例血清标本进行检测。结果 该方法对登革1、2型病毒的检测有高度的特异性,与登革病毒的4个血清型之间以及流行性乙型脑炎病毒、肾综合征出血热病毒等均无交叉反应,检测的灵敏度均达0.1TCID50,可从疑似登革热病例血清标本中直接检测登革病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论 本研究建立的TaqMan荧光定量RT—PCR是一种快速检测登革1、2型病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断。 相似文献
4.
目的克隆并表达汉坦病毒(HV)Z10株(HV—Z10)N蛋白(NP)编码基因,建立基于辣根过氧化酶(HRP)标记重组NP(rNP)的rNP—IgM直接捕捉ELISA,检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清并评价其检测效果。方法PCR扩增HV—Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因原核表达系统pET28a—Z10N—E.coli BL21DE3。SDS-PAGE了解rNP表达情况,离子交换法和Ni—NTA亲和层析法提纯rNP。Western blot检测rNP的特异性免疫反应性。建立HRP标记rNP—IgM直接捕捉ELISA检测HFRS患者血清样品,并与常规HV—IgM间接捕捉ELISA进行比较。结果pET28a—Z10N—E.coli BL21DE3高效表达rNP。提纯rNPSDS-PAGE显示单一蛋白条带,HV-IgG能有效识别rNP并与之结合。94.73%(90/95)HFRS患者血清样品rNP—IgM直接捕捉ELISA检测结果阳性,HV—IgM间接捕捉ELISA阳性率为92.63%(88/95)。两种IgM捕捉ELISAs检测的HFRS患者血清样品A450值分布及对多份不同稀释度血清检测的A450,均值变化均相似。结论成功构建了HV—Z10株NP编码基因高效原核表达系统。所建立的rNP—IgM直接捕捉ELISA可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。 相似文献
5.
目的:从临床确诊的肾综合征出血热(HFRS)患者血清中分离出汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行分型鉴定,填补了辽宁省从人体血液中分离HFRS病毒的空白。方法:采集发病在一周内临床确诊为EHF患者的血液(急性期血)直接用VERO-E6细胞分离病毒,并用间接免疫荧光(IFAT)及RT-PCR方法对分离到的毒株进行确定和分型鉴定。结果:从2005年至2006年度全省共收集符合做病毒分离的急性期血液样本40份,其中随机选择20份样本先接种长爪沙鼠,另外20份采用VERO-E6细胞直接分离。从接种动物肺脏中未分离出病毒,直接细胞分离分出病毒株1株。结论:对于急性期病人血分离肾综合征出血热病毒采用细胞分离比动物分离的方法似乎更安全、更经济且有利于提高分离率。 相似文献
6.
肾综合征出血热(HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的急性传染病。在HFRS病毒和疫苗的研究工作中,常采用间接免疫荧光抗体(IFA)技术和直接荧光抗体(FA)技术。利用高效价兔抗HFRS病毒免疫血清制备的荧光血清在检测HFRS病毒抗原:亡作中,具有特异、快速的优点忙,而荧光血清的质量与免疫血清的效价有直接关系,不同生物学特性的HFRS毒株免疫敏感动物家兔后,其免疫血清的效价有一定的差异。因此,能产生高效价免疫血清的毒株筛选是制备高质量荧光血清的关键。 相似文献
7.
1995至1996年浙江省肾综合征出血热监测分析 总被引:1,自引:1,他引:0
1995至1996年浙江省肾综合征出血热监测分析赵芝雅龚震宇翁景清傅桂明姜理平为了掌握全省肾综合征出血热(HFRS)流行规律,控制本病暴发流行,根据《浙江省肾综合征出血热预防和控制计划》和《浙江省肾综合征出血热监测计划》,开展了监测工作。现将1995... 相似文献
8.
9.
10.
李兰娟 王志刚 卢亦愚 程苏云 吴南屏 翁景清 张严峻 严菊英 梅玲玲 王晓萌 朱函坪 李敏红 姚军 陆群英 姚苹苹 史雯 汤鋆 葛琼 龚黎明 沃健尔 包其郁 余迎朴 俞鸿 王建斌 庄树林 张兵 张晓峰 苏志熙 曾燕舞 彭春龙 蒋琰 陈欢 李金宏 叶杰华 田薇 胡松年 陈苏红 张敏丽 伯晓晨 丁丽 樊玉伟 孙偶军 李鲁 王升启 《浙江预防医学》2003,15(8):3-5
目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序,并在GenBank数据库登录。记录号:AY297028,版本号:gi:30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点,分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基,和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较,除第l、2、4和5突变位点(C:G:C:C/T1 T1 T2 T)之外,发现在21712位点(第3个)A/G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念,即C:G:A:C:C与T:T:G:T:T两型,简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型.在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析,广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远;比较而言,和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近,其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C:G:A:C:C/T:T:G:T:T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中,分别是A/G和C/T突变,由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp/Gly(天门冬氨酸/甘氨酸)和Thr/Ile(苏氨酸/异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。 相似文献