大鼠乳鼠和成鼠雪旺细胞提取纯化的对照研究*

背景：许旺细胞是神经创伤修复的种子细胞,获取大量高纯度、高活性许旺细胞是研究的关键。 目的：比较乳鼠和成年鼠许旺细胞的体外培养、纯化和形态学的差别,探讨简单可行的、可以获得高纯度许旺细胞的培养方法。 方法：出生1~3 d SD大鼠20只和成年大鼠10只(体质量150~200 g),实验按细胞的来源分为新生组和成年组。双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞;倒置显微镜观察细胞形态、贴壁速度;细胞计数,纯度计算;MTT法检测细胞增殖能力,绘制两组许旺细胞的增殖曲线,判定增殖速度;S-100免疫化学法鉴定细胞。 结果与结论：乳鼠的许旺细胞贴壁速度快于成纤维细胞,成鼠的许旺细胞贴壁速度慢于成纤维细胞,两组许旺细胞纯度均达96%以上;MTT法检测两组许旺细胞增殖均活跃,由增殖曲线显示乳鼠许旺细胞增殖更快(P < 0.05);S-100免疫化学反应均呈阳性。提示双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞,可以获取纯度高、活性良好的许旺细胞;乳鼠许旺细胞的增殖、贴壁能力更强。     

体外纯化乳鼠雪旺氏细胞的三种方法比较

背景：许旺细胞是外周神经系统中修复神经损伤及神经疾病的主要种子细胞之一。但是,许旺细胞的来源有限,且由于成纤维细胞的污染,使许旺细胞的纯度受到影响。有学者提出了其他的纯化方法,但每种方法都存在其不足之处而不能很好的满足临床应用的需要。 目的：比较差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法4种体外纯化乳鼠许旺细胞方法的差异。 方法：取SD大鼠坐骨神经得到所需神经组织。分别用差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法纯化许旺细胞。比较4种方法获得细胞的活力,免疫组织化学法鉴定许旺细胞并计算纯度。 结果与结论：差速贴壁消化法所得到的细胞纯度稍低,活力尚可;冷喷注法获得的细胞纯度和活力均较高;磁珠分选法获得的细胞纯度和冷喷注法相当,但是活力稍差;G418筛选法活力差,纯度高。     

人正常神经组织许旺细胞的体外培养*

背景：周围神经组织工程所需要的许旺细胞数量巨大。在以往的研究中,由于正常人神经组织的缺乏,常选用大鼠、兔等动物神经组织分离许旺细胞进行培养,而作为异种细胞在临床的应用相对受限。 目的：体外培养人正常周围神经的许旺细胞,寻找一种最佳的获取、培养、纯化的方法。 方法：切取脑瘫患者周围神经缩窄术中的正常周围神经,以消化培养法为主,结合差速贴壁法纯化培养许旺细胞。将神经组织剪成碎块,接种于含胎牛血清、胶原酶、Dispase酶的培养液中消化培养,离心,将组织块加入培养基中,吹打成单细胞悬液,再移入有多聚赖氨酸的DMEM培养皿中,加入碱性成纤维细胞生长因子培养,当贴壁细胞覆盖培养皿达85%~90%即可开始传代培养。锥虫蓝染色对培养后的第 2,3,4,5,6,7,8,9,10天不同时间许旺细胞进行计数,并经S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定计算细胞纯度。 结果与结论：4 d后镜下可见基本为纯净的许旺细胞,密度在0.5×108 L-1以上。传3代后,许旺细胞计数可达到9×108 L-1以上;许旺细胞纯度达85 %以上。结果表明,以消化培养法结合差速贴壁方法培养许旺细胞所需时间短,可获得较高纯度的人许旺细胞,能够为进一步的神经组织工程提供细胞来源。     

以差速贴壁与化学药物并胰酶限时消化法纯化新生大鼠嗅鞘细胞：优于单一差速贴壁和化学药物法吗？★

背景：目前国内外对嗅鞘细胞培养条件的报道各不相同，个别方法重复性较差，不利于实际应用。 目的：观察差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞的效果，并与化学药物法、差速贴壁法培养结果进行比较。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2007-06/2008-06在福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系实验室完成。 材料：新生2 d的SD大鼠8只，由福建医科大学试验动物中心提供。 方法：无菌条件下完整取出大鼠双侧嗅球，剥除嗅球表面的软脑膜及毛细血管网，剪成0.5 mm3的小块进行胰蛋白酶消化，过筛后按4.0×108 L-1密度种植于包被多聚左旋赖氨酸的培养瓶中进行原代培养。设立4组：①未经纯化的常规对照组。②化学药物组加入5 μmol/L阿糖胞苷抑制成纤维细胞分裂。③差速贴壁组采用Nash差速贴壁法纯化嗅鞘细胞。④差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组首先采用Nash差速贴壁法去除大部分成纤维细胞，而后对于少量残留的成纤维细胞加入阿糖胞苷处理，培养6 d贴壁细胞大部分融合后，加入1.25 g/L胰蛋白酶消化1 min，显微镜下见突起回缩、细胞变圆、少量细胞浮起时终止消化。 主要观察指标：嗅鞘细胞的形态，NGFR p75免疫细胞荧光染色结果。 结果：体外培养的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞，其突起细长；未经纯化的常规对照组培养7 d时视野内成纤维细胞已达60%以上，至14 d成纤维细胞完全长满；经过纯化处理的另外3组始终以嗅鞘细胞居多，嗅鞘细胞的形态与原代基本相同。存活的双极和3极嗅鞘细胞呈NGFRp75阳性反应，但化学药物组、差速贴壁组嗅鞘细胞纯度偏低，仅为75%；差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组嗅鞘细胞纯化效率明显增高，达85%以上。 结论：实验结果证实了差速贴壁+化学药物＋胰酶限时消化法的三合一操作技术，是一种高效率的纯化培养嗅球嗅鞘细胞的方法。     

Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞提取与纯化的体外研究

目的建立简便易行的Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞体外提取并纯化方法,以获取能够满足实验需求的Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞,提高原代培养成功率。方法采集6例Ⅱ型神经纤维瘤病患者肿瘤组织标本作为实验材料,Ⅰ型胶原酶消化培养法提取肿瘤性许旺细胞,低浓度酶快速消化法、差数贴壁法和克隆筛选技术纯化肿瘤性许旺细胞。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学染色检测纯化细胞S-100蛋白表达水平,结合细胞形态鉴定经体外培养并纯化的细胞为肿瘤性许旺细胞。结果自3例肿瘤组织标本培养液中成功获得肿瘤性许旺细胞。肿瘤细胞原代培养至第3天,可见大量双极梭形或三角形细胞,以低浓度酶快速消化法和差数贴壁法纯化细胞;培养至第3代,倒置相差显微镜观察可见4～5个克隆细胞,免疫细胞化学染色S-100蛋白表达阳性,肿瘤性许旺细胞纯度>95%,活力良好,可以稳定传代培养。结论应用体外原代培养方法结合低浓度酶快速消化法、差数贴壁法和克隆筛选技术能够有效剔除纤维母细胞,获得纯度高、活力良好的肿瘤性许旺细胞,可用于Ⅱ型神经纤维瘤病发病机制及治疗研究。     

Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞提取与纯化的体外研究

目的建立简便易行的Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞体外提取并纯化方法,以获取能够满足实验需求的Ⅱ型神经纤维瘤病肿瘤性许旺细胞,提高原代培养成功率。方法采集6例Ⅱ型神经纤维瘤病患者肿瘤组织标本作为实验材料,Ⅰ型胶原酶消化培养法提取肿瘤性许旺细胞,低浓度酶快速消化法、差数贴壁法和克隆筛选技术纯化肿瘤性许旺细胞。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学染色榆测纯化细胞S-100蛋白表达水平,结合细胞形态鉴定经体外培养并纯化的细胞为肿瘤性许旺细胞。结果自3例肿瘤组织标本培养液中成功获得肿瘤性许旺细胞。肿瘤细胞原代培养至第3天,可见大量双极梭形或三角彤细胞,以低浓度酶快速消化法和差数贴壁法纯化细胞;培养至第3代,倒置相差显微镜观察可见4～5个克隆细胞,免疫细胞化学染色S-100蛋白表达阳性,肿瘤性许旺细胞纯度〉95％,活力良好,可以稳定传代培养。结论应用体外原代培养方法结合低浓度酶快速消化法、差数贴壁法和克隆筛选技术能够有效剔除纤维母细胞,获得纯度高、活力良好的肿瘤性许旺细胞,可用于Ⅱ型神经纤维瘤病发病机制及治疗研究。     

分离、培养及纯化嗅鞘细胞的简便方法

目的：建立一种免胰酶消化的剪切分散法提取嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）并优化其纯化培养方法。方法：从成年SD大鼠解剖分离嗅球,显微镜下剥离软脑膜、剔除中央白质,将灰质成分置于含10%胎牛血清的DMEM/F12全培养基,眼科剪剪切至组织成糜状,吸管吹打15-20次, 混悬液免胰酶消化直接接种培养,每三天半量换液。原代培养至细胞大部分融合后,依次以低浓度胰酶（0.05%）有限消化法、30min短时差速贴壁法、抗有丝分裂法三步顺序纯化细胞,每步纯化结果作免疫荧光染色鉴定。结果: 原代培养中嗅鞘细胞快速贴壁成为优势细胞、生长旺盛,三步顺序纯化过程细胞纯度逐步提高,最终纯度可达95%以上并长时间维持。结论:剪切分散法提取OECs及其三步顺序法纯化培养经济实用、易重复,细胞培养周期短,能收获大量可控纯度的嗅鞘细胞供进一步移植实验及基础研究。     

碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架上黏附及增殖的影响*☆◆

摘要 背景：许旺细胞复合小肠黏膜下层是构建人工神经的可行方法,碱性成纤维细胞生长因子有促进许旺细胞增殖的作用。 目的：验证碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架材料表面的细胞增殖及黏附状态的影响。 方法：将体外分离培养的2代SD乳鼠许旺细胞接种于小肠黏膜下层支架材料上并加入50 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子复合培养为实验组,以单纯的许旺细胞复合小肠黏膜下层作为对照组,分别用MTT法测定细胞增殖能力,细胞黏附率检测细胞在支架上的黏附情况,用流式细胞仪测定细胞分裂周期,并用苏木精-伊红染色及描电镜观察细胞形态及与材料的贴附情况。 结果与结论：MTT显示实验组的细胞增殖吸光度值明显高于对照组(P < 0.05),实验组的细胞黏附率为(69.47±3.17)%,对照组为(44.58±1.76)%(P < 0. 05),细胞周期显示实验组比对照组的G2/M+S期细胞百分含量高(P < 0.05),培养7 d后的苏木精-伊红染色及扫描电镜显示实验组比对照组材料上聚集的细胞数量多,细胞形态伸展更明显,细胞贴附力更好。因此碱性成纤维细胞生长因子可明显地改善许旺细胞在小肠黏膜下层上的增殖及黏附能力,能促进许旺细胞与小肠黏膜下层支架的复合而构建人工神经导管。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子;许旺细胞;小肠黏膜下层;增殖;黏附 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.007     

牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin影响嗅鞘细胞增殖的量效关系

背景：生长因子参与调节嗅鞘细胞增殖、分化及代谢功能,因此有望通过应用其合理的序贯刺激形式,达到细胞数量地大量扩增。 目的：观察牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及剂量-效应关系。 方法：采用原代培养技术,从新生大鼠的嗅球分离培养嗅鞘细胞,并用差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法纯化培养嗅鞘细胞,添加牛垂体提取物、碱性成纤维细胞生长因子及Forskolin 3种促增殖因子及其组合。MTT法检测各组嗅鞘细胞生长的情况。根据NGFRp75抗体的免疫细胞化学染色统计嗅鞘细胞的纯度和计算嗅鞘细胞的增殖率。 结果与结论：在嗅鞘细胞原代培养和纯化后,添加牛垂体提取物具有促进嗅鞘细胞增殖的效应,但未见典型的剂量-效应关系;添加碱性成纤维细胞生长因子具有促进嗅鞘细胞增殖的效应,且呈现典型的剂量-效应关系;添加Forskolin并不具有促进嗅鞘细胞增殖的效应。说明合理应用不同质量浓度的碱性成纤维细胞生长因子与Forskolin进行联合刺激,能有效促进细胞的增殖。结果表明序贯的使用合适浓度的生长因子组合,将是有效促进嗅鞘细胞增殖的合理策略,有助于解决脊髓损伤治疗中种子细胞来源不足这一问题。     

微囊化成年兔许旺细胞的体外培养*

背景：研究发现将体外培养扩增的大量许旺细胞种植到神经导管上来引导周围神经再生效果明显,而目前备受关注的微囊化免疫隔离技术,在克服免疫排斥问题上具有明显的优势与实用性。 目的：微囊包裹兔许旺细胞并进行体外培养,观察许旺细胞形态及增殖变化。 设计、时间及地点：体外细胞水平观察实验,于2005-09/2006-05在南昌大学第二附属医院分子实验室完成。 材料：健康成年家兔由南昌大学医学院动物中心提供,微囊发生器由南昌大学医学院神经生物学研究室研制。 方法：使双侧坐骨神经发生Wallerian变性,经改良后反复差速贴附法进行培养,快速分离纯化许旺细胞。海藻酸钠-氯化钡一步成囊法包裹生长良好的第3代许旺细胞。 主要观察指标：倒置显微镜下观察培养过程中微囊化许旺细胞形态变化,MTT检测不同时期微囊化许旺细胞及游离许旺细胞的增殖改变。 结果：在培养过程中可见微囊及其囊内许旺细胞形态均保持完整,微囊未见破损。微囊化后的许旺细胞总体呈现悬浮生长的趋势。培养0,1,3,5,7 d时 MTT检测微囊许旺细胞组与游离许旺细胞组吸光度值差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：微囊包裹的许旺细胞体外可存活较长时间,微囊化许旺细胞相比游离许旺细胞增殖速度有所减慢。     

The effect of age of onset of PD on risk of dementia

Background Dementia occurs in the majority of patients with Parkinson’s disease (PD). Late onset of PD has been reported to be associated with a higher risk for dementia. However, age at onset (AAO) and age at baseline assessment are often correlated. The aim of this study was to explore whether AAO of PD symptoms is a risk factor for dementia independent of the general effect of age. Methods Two community-based studies of PD in New York (n = 281) and Rogaland county, Norway (n = 227) and two population-based groups of healthy elderly from New York (n = 180) and Odense, Denmark (n = 2414) were followed prospectively for 3–4 years and assessed for dementia according to DSM-IIIR. All PD and control cases underwent neurological examination and were followed with neurological and neuropsychological assessments. We used Cox proportional hazards regression based on three different time scales to explore the effect of AAO of PD on risk of dementia, adjusting for age at baseline and other demographic and clinical variables. Findings In both PD groups and in the pooled analyses, there was a significant effect of age at baseline assessment on the time to develop dementia, but there was no effect of AAO independent of age itself. Consistent with these results, there was no increased relative effect of age on the time to develop dementia in PD cases compared with controls. Interpretation This study shows that it is the general effect of age, rather than AAO that is associated with incident dementia in subjects with PD. Received in revised form: 22 December 2005     

Effects of prevention of afferentation of the development of the chick optic lobe

BONDY, S. C., M. E. HARRINGTON AND C. L. ANDERSON. Effects of prevention of afferentation on the developmentof the chick optic lobe. BRAIN RES. BULL. 3(5) 411–413, 1978.—The effects of unilateral extirpation of the right optic cup of the three-day incubated chick embryo upon the rate of synthesis and the stability of DNA in the non-innervated optic lobe, have been studied. This surgical procedure prevents innervation of the optic lobe contralateral to the removed eye, while the other optic lobe is normally innervated by retinal ganglion cells of the remaining eye. At the 20th day of incubation, the DNA content of the non-innervated lobe was below that of the paired lobe receiving normal innervation. This deficiency of cell number was caused by two events; death of an excess number of neurons formed early in embryogenesis and a reduced rate of glial proliferation in the later stages of incubation.     

帕金森病运动症状进展分析

目的分析帕金森病(PD)患者运动症状进展特点。方法采用PD统一评分量表(UPDRS)Ⅲ对912例PD患者进行评估。结果与病程1年的患者比较,除病程1~2年的患者外,其他病程患者的UPDRSⅢ评分、强直分、姿势或步态异常分、轴性症状总分、言语分、步态分显著升高(均P0.05),病程5~6年及14年患者的震颤分,病程5~6年、7~8年、9~13年、14年患者的运动迟缓分、姿势分显著升高(P0.05~0.01)。轴性症状进展速度高于UPDRSⅢ评分。结论 PD患者病程早期UPDRSⅢ评分进展快,震颤症状进展独立于其他症状,轴性症状评分较UPDRSⅢ更敏感地反映疾病加重趋势。     

Frequency of accumulation of filaments in adaxonal cytoplasm of Schwann cells of myelinated fibers of rat spinal roots

Summary The frequency of accumulation of 6-nm filaments in the adaxonal cytoplasm of Schwann cells in the 6th lumbar dorsal and ventral roots was evaluated in 4-, 8-, 26- and 45-week-old Sprague-Dawley rats. The frequency was higher in 4- and 8-week-old (growing) rats than in 26- and 45-week old (mature) rats, and also higher in ventral than in dorsal roots in 4-, 8- and 26-week old rats. There were no clusters on certain groups of myelinated fibers according to the size of transverse axonal area, in both the ventral and dorsal roots. Therefore, this accumulation may reflect certain functions of the adaxonal cytoplasm of Schwann cell during natural growth and maturation of the axon and myelin sheath.     

Function of circle of Willis

Nearly 400 years ago, Thomas Willis described the arterial ring at the base of the brain (the circle of Willis, CW) and recognized it as a compensatory system in the case of arterial occlusion. This theory is still accepted. We present several arguments that via negativa should discard the compensatory theory. (1) Current theory is anthropocentric; it ignores other species and their analog structures. (2) Arterial pathologies are diseases of old age, appearing after gene propagation. (3) According to the current theory, evolution has foresight. (4) Its commonness among animals indicates that it is probably a convergent evolutionary structure. (5) It was observed that communicating arteries are too small for effective blood flow, and (6) missing or hypoplastic in the majority of the population. We infer that CW, under physiologic conditions, serves as a passive pressure dissipating system; without considerable blood flow, pressure is transferred from the high to low pressure end, the latter being another arterial component of CW. Pressure gradient exists because pulse wave and blood flow arrive into the skull through different cerebral arteries asynchronously, due to arterial tree asymmetry. Therefore, CW and its communicating arteries protect cerebral artery and blood–brain barrier from hemodynamic stress.     

广西农村壮族妇女精神分裂症患者生活质量状况调查

目的研究农村壮族妇女精神分裂症患者的生活质量及影响因素。方法前瞻性的队列研究。采用随机分层抽样法分为农村壮族妇女精神分裂症组、农村汉族妇女精神分裂症组、农村正常妇女对照组,应用“世界卫生组织生存质量测定报告”(WHOQOL-100)及PANSS量表调查其生活质量和疾病的严重程度。结果农村壮族妇女精神分裂症患者生活质量明显低于农村汉族妇女精神分裂症患者,影响其生活质量的相关因素是生活环境及精神支柱/个人信仰。结论经济贫困、环境条件、缺乏有效的医疗服务和社会保障是农村壮族妇女精神分裂症患者生活质量低的关键。因此,建立农村壮族社区精神卫生服务网络势在必行。     

《绵阳市社会心理服务工作管理办法》解读

2018年,国家卫生健康委员会等10部委联合发布《关于印发全国社会心理服务体系建设试点工作方案的通知》,四川省绵阳市被列为全国第一批试点地区。绵阳市人民政府依据《中华人民共和国精神卫生法》等相关法律法规和文件精神,结合前期调查研究和社会心理服务工作的试点实际,编制出台了《绵阳市社会心理服务工作管理办法》,并于2021年12月25日起施行。本文围绕社会心理服务的相关概念、办法总则、重点内容、保障措施等方面进行解读,以期为社会心理服务工作的规范、持续和有效开展提供参考。     

Impact of our understanding of the genetic aetiology of epilepsy

A genetic contribution to aetiology is estimated to be present in up to 40% of patients with epilepsy. It is useful to categorise genetic epilepsies according to the mechanisms of inheritance into Mendelian disorders, non-mendelian or ‘complex’ disorders, and chromosomal disorders. Over 200 Mendelian diseases include epilepsy as part of the phenotype, and the genes for a number of these have been identified recently. These include autosomal recessive progressive myoclonic epilepsies such as Unverricht-Lundborg disease, Lafora disease and the neuronal ceroid lipofuscinoses, and three autosomal dominant idiopathic epilepsies. The last named have been shown to arise from mutations in ion channel genes. Autosomal dominant nocturnal frontal lobe epilepsy is caused by mutations in CHRNA4, benign familial neonatal convulsions by mutations in KCNQ2 and KCNQ3, and generalised epilepsy with febrile seizures plus by mutations in SCN1B. ‘Complex’, familial epilepsies are more difficult to analyse, but evidence has been obtained for loci predisposing to juvenile myoclonic epilepsy on chromosome 6p and 15q. Lastly, the genes underlying several spike-wave epilepsies in mice have been cloned, and three of these encode sub-units of voltage-gated calcium channels. Received: 29 September 1999/Accepted: 7 December 1999     

他汀类药物的使用和颅内动脉瘤破裂相关性分析

目的 探讨他汀类药物对颅内动脉瘤破裂的影响。方法 2010年3月至2014年3月收治颅内囊状动脉瘤67例,其中破裂者32例,未破裂者35例。采用多变量Logistic回归评估他汀类药物的使用和颅内动脉瘤破裂的关系。结果 破裂组术前使用他汀类药物4例（12.5%,4/32）,未破裂组16例（45.7%,16/35）。破裂组服用他汀类药物的百分比显著低于未破裂组（P<0.01）。纠正潜在的混杂干扰后（or值: 0.30,95%可信空间:0.12~="" 0.64）显示,颅内动脉瘤破裂与他汀类药物的使用呈显著负相关,也与高血清总胆固醇浓度有关。结论 本结果提示他汀类药物对颅内动脉瘤破裂有一定的预防效果。