β-淀粉蛋白脑室内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型

目的　观察β淀粉样蛋白(Aβ)脑室内注射建立阿尔茨海默病(AD)大鼠模型及其对大鼠行为、胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性、细胞凋亡、神经生长因子(NGF)水平等影响。方法　将Aβ1 -42注射入大鼠侧脑室,于第1周、2周、4周观察Morris水迷宫逃避潜伏期、测定脑内ChAT活性、进行原位末端标记凋亡染色及NGF免疫组化染色。结果　Aβ1- 42注射后第2周大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期延长,4周时更明显。2周后海马、皮层ChAT活性下降,4周后脑内ChAT活性广泛下降,以海马最为显著。2周后基底前脑Meynert核区凋亡细胞较其他脑区增多,NGF阳性细胞明显减少。结论　Aβ脑室内注射可以模拟AD行为改变,使脑内ChAT活性降低,基底前脑NGF含量减少,胆碱能神经元凋亡,可以作为AD研究模型。     

去卵巢大鼠胆碱能神经系统改变及雌激素保护作用机制的研究

目的观察去卵巢大鼠胆碱能神经系统的改变及雌激素对其影响。方法利用免疫组织化学染色结合图像分析方法观察去卵巢大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶(ChAT)的变化;利用RT—PCR方法检测去卵巢大鼠基底前脑神经生长因子(NGF)mRNA表达的变化。结果去卵巢大鼠海马CA1区ChAT的积分光密度(OD)值降低,基底前脑NGFmRNA平均表达水平明显降低,补充雌激素后以上各项指标均明显提高。结论(1)去卵巢大鼠海马CA1区胆碱能神经元ChAT活性下降,基底前脑胆碱能神经元NGFmRNA表达水平降低。(2)雌激素能够上调去卵巢大鼠NGFmRNA表达．而NGF能够增强ChAT的活性。促进乙酰胆碱(Ach)的合成和释放,改善学习记忆能力。     

Aβ1～42对不同年龄组大鼠ChAT和AchE活性变化的实验研究

目的 观察大鼠海马注射Aβ1～42后行为学习记忆和ChAT、AchE活性的变化情况。方法 采用Y迷宫测试行为学习记忆情况和比色法测定ChAT、AchE活性变化。结果 成年、老年模型组出现了行为学习记忆障碍，同时基底前脑ChAT活性降低（P〈0．05），而海马AchE活性变化不明显（P〉0．05）。幼年模型组基底前脑ChAT活性变化不明显（P〉0．05），但海马区AchE活性降低（P〈0．05）。结论 ChAT活性的变化在Aβ机制中起重要作用，提高ChAT活性是治疗AD的靶点之一。     

神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植的影响

目的:研究神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植后行为和形态学变化。方法:24.只AD模型鼠随机分成4组:单纯胚基底前脑细胞悬液移植组(ST组)、含NGF或BDNF胚基底前脑细胞悬液移植组(NGF组)、(BD-NF组)和模型对照组(M组),移植后3月进行行为测试并比较移植区AchE细胞数和纤维密度,运用方差分析和SNK检验进行组间比较。结果:行为测试移植3组明显优于模型M组,含因子组又较ST组效果好(P<0.01),两因子组间差异无显著性(P>0.05);因子组存活细胞数均高于ST组,NGF组细胞数多于BDNF组(P<0.05),纤维密度两组相似(P>0.05)。结论:海马内存活胆碱能神经元能代偿受损胆碱能神经元的功能,改善动物的学习记忆功能;NGF、BDNF均能促进胆碱能神经元存活,增加AchE细胞数目和突起,但BDNF促进神经元突起延伸作用较好,而NGF则对神经元保护作用较强。     

乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠隔斜角带核胆碱能神经元损害的研究

目的研究乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)IgG对大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元的损害作用。方法大鼠一侧隔斜角带核区注入重症肌无力(MG)患者AChRAbIgG或等量健康人IgG,14d后应用免疫组化方法测定隔斜角带核A、B、C3区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元数目。结果大鼠内侧隔斜角带核区ChAT阳性细胞数实验组注射侧明显少于非注射侧(P<0.01),实验组注射侧明显少于对照组注射侧(P<0.001),实验组非注射侧明显少于对照组非注射侧(P<0.05);实验组注射侧与非注射侧ChAT阳性细胞比率明显少于对照组注射侧与非注射侧的比率(P<0.01)。结论内侧隔斜角带核区定向注射AChRAbIgG可损害该处胆碱能神经元,使其明显减少,且其毒性效力存在一定的距离效应。表明AChRAb可被动转移损伤大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元。     

NGF预防大鼠额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性

目的：为了观察神经生长因子（NGF）对大鼠额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性的预防效果。方法：24只SD大鼠,随机平均分为3组：（1）实验组（NGF）,（2）对照组（等容量的生理盐水）,（3）正常组（假手术）,用外科手术造成双侧额叶皮质局限性损伤,动物的学习,记忆机能及基底前脑含乙酰胆碱酯酶（AChE)活性神经元则分别用Y型迷宫和组织化学方法进行检测。结果：额叶皮质损伤4周后,动物的学习,记忆机能明显下降（P＜0．01）,基底前脑含AChE活性神经元明显减少（P＜0．01）,NGI治疗可有效地防止额叶皮质损伤大鼠学习,记忆障碍的发生及基底前脑含AChE活性神经元的减少（P＜0．05）。结论：NGF对双侧额叶皮质损伤大鼠的学习,记忆机能障碍及基底前脑胆碱能神经元变性有预防效果。     

神经干细胞移植对AD鼠基底前脑NOS阳性神经元的影响

目的 探讨神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的影响.方法 切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞（fimbria-fornix,FF）,于基底前脑行神经干细胞移植,4周后行组织化学染色结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数量和形态学参数的变化. 结果 损伤后大约1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核（MS）和斜角带垂直支（VDB）内可观察到NOS阳性神经元明显减少,分别为正常组的35.5%和55.8%,（与正常组相比P＜0.01）;移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的74.7%和95.7%,（与损伤组相比P＜0.01）.细胞形态学参数提示移植组NOS阳性神经元中含部分中等大小的未成熟细胞.结论 神经干细胞移植治疗,对AD模型鼠基底前脑MS、VDB的NOS阳性神经元有明显的补充和保护作用。     

脑低灌注对大鼠海马胆碱能神经功能指标的变化

目的探讨脑低灌注大鼠海马胆碱能神经功能状态及细胞凋亡的变化。方法SD大鼠40只,随机分为2VO模型组和假手术组,每组20只;永久性阻断双侧颈总动脉制作2VO模型,造成脑部持续性低灌注状态。观察大鼠术后学习记忆能力的改变、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和促凋亡指标Bax在海马的表达,以及海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化。结果大鼠2VO术后14d和21d表现出学习记忆障碍,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);2VO模型组海马ChAT表达和海马AChE活性均较假手术组明显降低(P<0.01),而海马Bax的阳性细胞数较假手术组明显增加(P<0.01)。结论脑低灌注破坏海马胆碱能神经功能,学习记忆能力下降。细胞凋亡可能是胆碱能神经功能障碍的主要原因。     

额叶皮质损伤对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

本实验探讨了前额叶皮质局限性损伤对大鼠学习、记忆功能及基底前脑胆碱能神经元的影响。用外科手术造成大鼠一侧前额叶皮质局限性损伤后不同时间、用Ｙ型迷宫检测学习、记忆功能、用组织化学技术检测基底前脑含乙酰胆碱酸酶（ＡChE)活性神经元。实验观察到前额叶皮质损伤后１周,动物学习,记忆功能有所障碍,损伤同侧的基底前脑胆碱能神经元有所减少,但均无统计学意义,损伤后２,３,４周,动物学习、记忆障碍明显,损伤同侧基底前脑胆碱能神经元明显减少（Ｐ＜0.05),且两者变化相平行。结果表明单侧前额叶皮质局限性损伤不仅可引起动物学习、记忆功能障碍,且可引起同侧基底前脑胆碱能神经元丢失,且两者发展相平行,提示基底前脑胆碱能神经元逆行性变性在动物额叶皮质损伤引起的学习、记忆障碍中起作用。     

BDNF和神经干细胞联用对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元数及其形态学的影响

目的研究神经干细胞（NSC）和脑源性神经营养因子（BDNF）联合治疗对穹隆海马伞切割鼠基底前脑p75^NGFR阳性神经元厦其形态学的影响。方法切断SD大鼠左侧穹隆海马伞模拟AD大鼠模型，利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSC。基底前脑注射NSC，同时侧脑室注射BDNF,4周后行免疫组化结合图象分析技术观察各组大鼠基底前脑p75^NGFR阳性神经元厦其形态学变化。结果损伤组大鼠p75^NGFR阳性神经元数在内侧隔核（MS）和斜角带（VDB）较正常组明显下降（P〈0．01）；移植组细胞数较损伤组有改善（P〈0．05）；与正常组相比较，联合组免疫阳性神经元数无显著下降（P〉0．05）。形态学参数测试结果显示，p75^NGFR阳性神经元的面积、周长在4组中的改变类似p75^NGFR阳性神经元数。结论NSC和BDNF联用较单独使用BDNF或NSC更好地增加p75^NGFR阳性神经元数及其形态学参数。     

神经干细胞移植对192-IgG-saporin阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75NGFR阳性神经元和行为学的影响

神经干细胞能够在体外持续扩增,具有较强的增殖能力和较强的可塑性,能够在成年宿主中枢神经系统中存活、迁移、分化以及与宿主组织整合较好。 目的：分析神经干细胞移植对侧脑室注射192-IgG-saporin 老年性阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75NGFR阳性神经元和行为学的影响。 方法：24只SD大鼠随机数字表法均分为3组：对照组、模型组、移植组。10只新生SD鼠(<24 h)用于神经干细胞分离培养。模型组及移植组192-IgG-saporin侧脑室注射SD大鼠建立阿尔茨海默病模型。造模后,移植组行基底前脑神经干细胞移植。4周后行Y迷宫检测,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元数目和形态学参数的变化。 结果与结论：注射192-IgG-saporin 1个月,模型组损伤侧基底前脑内侧隔核和斜角带垂直支p75NGFR阳性神经元数明显减少(P < 0.01),移植组分别恢复到对照组的74.85%和71.66%,与模型组损伤侧相比较,差异显著(P < 0.01)。Y迷宫测试结果显示,移植组大鼠的空间学习能力和记忆能力有改善(P < 0.05),基底前脑p75NGFR阳性神经元细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关。提示,神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致阿尔茨海默病鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。     

神经生长因子缓释微球植入后阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的变化

背景：已有研究表明,神经营养因子对中枢和周围神经损伤后的存活修复有促进作用。然而,神经生长因子是大分子蛋白类物质,生物半衰期很短,很难透过血脑屏障,寻找有效的神经营养因子投递系统至关重要。 目的：观察了神经生长因子微球对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的保护作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-11/2006-07在广州医学院神经生物学实验室完成。 材料：采用双乳化技术制备神经生长因子缓释微球。28只SD大鼠,随机分为3组：正常对照组8只,模型对照组8只,神经生长因子缓释微球植入组12只。 方法：模型对照组和神经生长因子缓释微球植入组左侧穹隆海马伞切断制备阿尔茨海默病模型,正常对照组不做任何处理。神经生长因子缓释微球植入组切断后即刻行基底前脑注射神经生长因子缓释微球。正常对照组和模型对照组注射等量生理盐水。 主要观察指标：注射4周后,利用免疫组化法观察各组大鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元变化。 结果：28只大鼠均进入结果分析。模型对照组损伤侧的内侧隔核和斜角带核的神经生长因子受体阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和54.4%;神经生长因子缓释微球植入组损伤侧的内侧隔核和斜角带核细胞数分别减少17.9%和19.8%,明显高于模型对照组损伤侧的神经生长因子受体阳性神经元存活数（P < 0.05）。 结论：神经生长因子缓释微球植入对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元有明显的保护作用。     

孕烯醇酮对老年大鼠胆碱能系统的影响

目的 通过试剂盒检测ChAT、AchE和PREG的表达,探讨PREG与老年大鼠胆碱能系统的关系及其机制.方法 24月龄雄性SD大鼠40只随机分为4组,空白对照组,溶剂对照组(隔日腹腔注射等体积DMSO),小剂量组(按照0.5 mg/kg隔日腹腔注射PREG).大剂量组(按照2.0 mg/kg隔日腹腔注射PREG).采用试剂盒检测大鼠额叶、颞叶、海马组织ChAT、AchE活性以及血象PREG含量,然后运用Stata软件处理检测结果.结果 大剂量PREG明显增加老年大鼠ChAT、PREG表达,降低AchE的表达(P＜0.05),而小剂量PREG仅仅提高了血浆PREG含量.结论 大剂量PREG能提高胆碱能系统的表达,可能提高记忆功能.     

碱性成纤维细胞生长因子对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响

目的皮下注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)于血管性痴呆大鼠,研究用药前后大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作血管性痴呆(VD)大鼠模型,随机取用VD大鼠模型12只,分治疗组6只,痴呆组6只。另外,取假手术组6只。皮下注射bFGF于治疗组中血管性痴呆大鼠。治疗5周后,以Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验来检测大鼠的学习记忆能力,乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫组织化学染色观察海马CA1区胆碱能神经元数目的变化。结果治疗组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目较痴呆组明显增多。结论皮下注射bFGF后能迁移至海马,诱导海马产生具有ChAT活性神经元,所产生的ChAT活性神经元可能就是胆碱能神经元。     

骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆大鼠海马胆碱能系统的影响

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马胆碱能系统的影响.方法 体外分离、扩增大鼠BMSCs,并用BrdU标记.采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将大鼠随机分为3组:A组(BMSCs移植组):于双侧颈总动脉结扎后4周经尾静脉注射BMSCs;B组(对照组):注射同等剂量PBS;C组(假手术组):暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.BMSCs注射后4周,采用免疫荧光染色观察大鼠海马BrdU标记细胞;测定海马结构内乙酰胆碱酯酶(ACHE)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性.结果 BMSCs移植后4周A组大鼠海马结构可见荧光标记的BMSCs;A、B组AChE和ChAT活性均较C组降低(P＜0.05),且A组较B组显著增强(P＜0.05).结论 静脉移植BMSCs可增强VaD大鼠海马胆碱能系统活性.     

天智颗粒对血管性痴呆大鼠行为学及脑内AchE、ChAT活性的影响

目的观察天智颗粒对血管性痴呆大鼠行为学习记忆能力和乙酰胆碱代谢酶活性的影响,从而探讨天智颗粒改善记忆的机制.方法采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆模型,治疗组用天智颗粒(5 g/kg)灌胃,模型组和假手术组用同体积的蒸馏水代替灌胃,1次/天,对照组未做任何处理.30 d后,采用三等分Y型电迷宫和比色法分别测定皮质、海马区乙酰胆碱脂酶(AchE)活性和基底前脑区胆碱乙酰转移酶(ChaT)活性.观察、比较各组大鼠行为学和乙酰胆碱代谢酶的变化规律和差异.结果治疗30d后,治疗组与模型组相比,学习记忆能力和基底前脑ChaT活性明显提高(P＜0.05),但皮质和海马区AchE活性变化无统计学意义.结论天智颗粒能明显促进血管性痴呆大鼠学习记忆能力和基底前脑区ChaT活性,其药理机制可能和改变乙酰胆碱代谢酶活性有关.     

酸性肽对AD大鼠学习记忆功能及NGF和NMDAR1表达的影响

目的 研究酸性肽对AD大鼠脑中NGF、NMDAR1表达的影响.方法 采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,建立AD动物摸型,用不同剂量的AP对AD大鼠进行治疗.通过测定与学习记忆有关的行为学指标及脑内与AD相关的NGF、AB水平的变化,并与正常组、模型组、生理盐水组结果 比较,对数据进行统计处理.结果 模型组与正常组比较,学习记忆成绩明显下降(P＜0.01);各治疗组与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P＜0.01);模型组与空白组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加,各治疗组分别与模型组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加(P＜0.01).结论 AP可能通过上调AD基底前脑中NGF的水平并降低NMDAR1水平来发挥对AD的治疗作用.     

海人藻酸致痫大鼠海马Caspase-3酶活性变化

目的：检测KA致痫后鼠海马Caspase-3酶活性动态变化。方法：运用FIENA法特异性体外检测Caspase-3的活性，结果：KA致痫后6h，鼠海马即有Caspase-3活性显增高，一周内保持高水平，10天开始下降，而正常鼠海马几乎无活性Caspase-3检出。结论：Caspase-3参与癫痫后神经细胞的凋亡损害，特异性Caspase-3酶抑制剂能预防癫痫后凋亡的发生。     

神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元和 学习记忆能力的影响*☆

目的：基底前脑是老年性痴呆患者脑皮质下神经元丢失最严重的区域，实验拟验证经神经干细胞移植治疗后老年痴呆鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化以及对其空间学习记忆能力方面的影响。 方法：实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物：清洁级SD雄性大鼠28只，随机数字表法分为3组：正常对照组8只、模型对照组8只、细胞移植组12只。另取10只新生SD鼠用于神经干细胞的分离培养。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：模型对照组、细胞移植组大鼠切断左侧穹隆海马伞，建立老年性痴呆动物模型。利用无血清培养技术获得鼠基底前脑神经干细胞，吸取2.5×1010 L－1细胞悬液4 μL，术后即刻细胞移植组损伤侧行细胞移植，坐标为前囟+0.6 mm，外侧+0.6 mm插入，腹侧-5.5 mm。③实验评估：移植后4周，采用Y型迷宫对各组动物进行学习记忆能力检测。麻醉后取脑制备组织切片，ABC法免疫组化染色结合图像分析观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化。 结果：①对空间学习记忆能力的影响：细胞移植组空间学习能力、记忆能力均显著高于模型对照组（P < 0.05或P < 0.01），基本达到正常水平（P > 0.05）。②对小白蛋白阳性神经元的影响：与正常对照组比较，模型对照组损伤侧内侧隔核和斜角带核的小白蛋白阳性神经元数目分别减少62.5%和30.4%；细胞移植组降低幅度明显小于模型对照组（P < 0.01）。与正常对照组比较，模型对照组损伤侧内侧隔核、斜角带核小白蛋白阳性神经元的面积、周长、灰度均显著降低（P < 0.05或0.01）；细胞移植组上述指标较模型对照组均显著增加（P < 0.05或0.01）。③相关性分析：小白蛋白阳性神经元数目与大鼠在Y型迷宫中的学习次数呈显著负相关（r =-0.76~-0.79，P < 0.01），与记忆能力呈显著正相关（r = 0.78~0.84，P < 0.01）。 结论：神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑退变的小白蛋白阳性神经元具有补充和保护作用，并能够明显改善其学习记忆能力，二者呈正性相关。     

β—淀粉样蛋白31～35对体外培养的隔区胆碱能神经元的作用

β－淀粉样蛋白是老年斑的主要成分。为探讨其在老年性痴呆患者基底前脑胆碱能神经元选择性溃变中的作用，运用ＭＴＴ自动比色微量分析法、胆碱酯酶组织化学染色及细胞形态学分析方法，研究“老化”的淀粉样蛋白片段３１～３５对体外培养的海马和隔区神经元的作用。结果表明：培养４８ｈ，淀粉样蛋白对海马神经元有毒性作用，减少神经元的存活，呈剂量依赖关系。培养１４ｄ，淀粉样蛋白减少了胆碱能神经元的存活率，抑制突起的延伸，促使神经元胞体和近侧突起的分支增加。表明淀粉样蛋白对隔区胆碱能神经元具有减少存活、抑制突起延伸和促进突起不正常生长的毒性作用。