四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景：由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究。选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题。 目的：比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法。 方法：取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增。 结果与结论：改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P < 0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P > 0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法。     

藏药七十味珍珠丸对阿尔茨海默病小鼠模型脑组织Aβ表达的影响

目的 观察藏药七十味珍珠丸(ratanasampil,RNSP)对阿尔茨海默病(AD)转基因鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ1-40和Aβ1-42)生成和改善认知功能的作用.方法 利用Y-迷宫明暗分辨学习和旷场实验来观察23只13～14月龄雌性阿尔茨海默病转基因鼠(Tg2576)和同龄雌性BL6×SJL非转基因鼠(NTg)的学习记忆功能和焦虑水平.治疗组选取6只Tg2576鼠和5只NTg鼠给予七十味珍珠丸用针管灌胃1 μl(0.14 mg/d),每天1次,连续用药8周;对照组选取7只Tg2576鼠和5只NTg鼠用蒸馏水和芝麻油各0.5 μl混匀后用针管灌胃1 μl,每天1次,连续用药8周.用蛋白印迹法和酶标免疫吸附测试法联合测定鼠脑组织β淀粉样蛋白(Aβ1-40和Aβ1-42)以及人鼠嵌合型跨膜蛋白淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的蛋白含量,采用免疫组织化学法观察Aβ在鼠脑海马和大脑皮质的表达.结果 通过Y-迷宫明暗分辨学习测试,Tg2576鼠治疗组达标所需要的训练时间(34.23±9.65)s,比Tg2576鼠对照组(52.35±12.50)s显著降低;t=5.871,P＜0.01.与Tg2576鼠对照组比较,旷场实验测定结果显示Tg2576鼠治疗组在中央格停留时间明显减低[(4.70±3.56)s和(12.91±9.02)s;t=3.465,P＜0.01],跨格次数和站立次数增加[(85.33±17.64)次和(56.25±13.86)次;(57.67±17.08)次和(20.63±17.39)次;t=8.200,3.093,P＜0.01,P＜0.05],粪便排泄次数也明显减少[(1.17±0.56)次和(3.38±0.86)次;t=2.231,P＜0.05].两对照组比较,Tg2576鼠达标所需要的训练时间延长[(52.35±12.25)s和(37.03±8.98)s;t=3.131,P＜0.05],在中央格停留时间NTg较长,跨格次数和站立次数减少[(12.91±9.02)s和(5.24±5.88)s;(56.25±13.86)次和(82.75±22.54)次;(20.63±17.39)次和(53.50±13.94)次;P均＜0.05].上述训练项目NTg鼠在治疗组和对照组之间差异均无统计学意义.蛋白印迹法和酶标免疫吸附测试法联合结果显示Tg2576治疗组的脑组织内Aβ1-40和Aβ1-42含量均较对照组显著减低;通过RNSP治疗8周后Aβ42/Aβ40比率低于对照组(P＜0.05);但对Tg2576脑APP的表达未能减低.RNSP能够明显减少大脑皮质和海马周围老年淀粉样斑块的数目和面积.结论 藏药七十味珍珠丸可能通过减少Tg2576转基因鼠脑内Aβ1-40和Aβ1-42水平抑制老年斑的形成来改善转基因鼠学习空间记忆和探索运动能力,减少焦虑行为的发生.     

Characterization of hippocampal Cajal-Retzius cells during development in a mouse model of Alzheimer＇s disease （Tg2576）

Cajal-Retzius cells are reelin-secreting neurons in the marginal zone of the neocortex and hippocampus. The aim of this study was to investigate Cajal-Retzius cells in Alzheimer＇s disease pathology. Results revealed that the number of Cajal-Retzius cells markedly reduced with age in both wild type and in mice over-expressing the Swedish double mutant form of amyloid precursor protein 695 （transgenic （Tg） 2576 mice）. Numerous reelin-positive neurons were positive for activated caspase 3 in Tg2576 mice, suggesting that Cajal-Retzius neuronal loss occurred via apoptosis in this Alzheimer＇s disease model. Compared with wild type, the number of Cajal-Retzius cells was significantly lower in Tg2576 mice. Western blot analysis confirmed that reelin levels were markedly lower in Tg2576 mice than in wild-type mice. The decline in Cajal-Retzius cells in Tg2576 mice was found to occur concomitantly with the onset of Alzheimer＇s disease amyloid pathology and related behavioral deficits. Overall, these data indicated that Cajal-Retzius cell loss occurred with the onset and development of Alzheimer＇s disease.     

Ratanasampil reduced levels of Aβ1-40 and Aβ1-42 and Aβ42/Aβ40 ratio in brains of Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease

Objective To investigate the effect of ratanasampil (RNSP) which is traditional Chinese Tibet-Medicines on the β-amyloid peptide as a therapeutic target in Alzheimer's disease.Methods Thirteen female mice of 13-14 months old with Tg2576 transgene and ten BL6 × SJL mice as control were used in drug test All mice sacrificed after 8 weeks of RNSP treatment at 15-16 months of age.Open field activity and Y-maze tests were performed for animal behavioral change and memory ability.The β-amyloid peptides (Aβ1-40 and Aβ1-42) and β-amyloid precursor protein (APP) in Tg2576 mice brain were measured with western blot and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Immunostaining with 1 E8 ( 1: 25 ) was carried out on brain sections of RNSP and vehicle-treated mice.Results The training times of Y-maze test decreased in RNSP-treated Tg2576 mice (P ＜0.01 ).After 2 months of RNSP treatment, a decrease in open field behavior was seen in Tg2576 mice ( P ＜ 0.05 ).The level of Aβ1-40 and Aβ1-42 in the brain was significantly decreased after RNSP treatment ( P ＜ 0.05 ).The Aβ42/Aβ40 ratio was significantly decreased after RNSP treatment as compared to vehicle-treated mice ( P ＜ 0.05 ) .But levels of APP in brain unchanged.Preliminary plaque counting of the sections showed reduced plaque numbers in the drug-treated mice in brain.Conclusions These results suggest that ratanasampil may reduce β-amyloid peptide production in brain to improve the learning and memory ability of Tg2576 mice of Alzheimer's disease.     

Ratanasampil reduced levels of Aβ1-40 and Aβ1-42 and Aβ42/Aβ40 ratio in brains of Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease

Objective To investigate the effect of ratanasampil (RNSP) which is traditional Chinese Tibet-Medicines on the β-amyloid peptide as a therapeutic target in Alzheimer's disease.Methods Thirteen female mice of 13-14 months old with Tg2576 transgene and ten BL6 × SJL mice as control were used in drug test All mice sacrificed after 8 weeks of RNSP treatment at 15-16 months of age.Open field activity and Y-maze tests were performed for animal behavioral change and memory ability.The β-amyloid peptides (Aβ1-40 and Aβ1-42) and β-amyloid precursor protein (APP) in Tg2576 mice brain were measured with western blot and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Immunostaining with 1 E8 ( 1: 25 ) was carried out on brain sections of RNSP and vehicle-treated mice.Results The training times of Y-maze test decreased in RNSP-treated Tg2576 mice (P ＜0.01 ).After 2 months of RNSP treatment, a decrease in open field behavior was seen in Tg2576 mice ( P ＜ 0.05 ).The level of Aβ1-40 and Aβ1-42 in the brain was significantly decreased after RNSP treatment ( P ＜ 0.05 ).The Aβ42/Aβ40 ratio was significantly decreased after RNSP treatment as compared to vehicle-treated mice ( P ＜ 0.05 ) .But levels of APP in brain unchanged.Preliminary plaque counting of the sections showed reduced plaque numbers in the drug-treated mice in brain.Conclusions These results suggest that ratanasampil may reduce β-amyloid peptide production in brain to improve the learning and memory ability of Tg2576 mice of Alzheimer's disease.     

SOD1-G93A转基因小鼠的鉴定方法比较

目的建立一种简便、节省和准确的肌萎缩侧索硬化(ALS)hSOD1-G93A转基因小鼠DNA提取及基因鉴定方法。方法以B6SJL-BTg(SOD1-G93A)1Gur/J半合子雄鼠与B6SJLF1雌鼠交配产仔,剪尾尖约1mm,提取组织DNA,PCR扩增hSOD1基因片断,电泳后观察结果并对PCR产物进行纯化、测序及BLAST验证。同时留取鼠尾血50～100μl,提取血DNA并PCR扩增作为对照,比较两者之间的符合率。结果hSOD1-G93A阳性鼠约占54%,基本符合孟德尔遗传规律。鼠尾组织及血DNA鉴定结果符合率为100%。结论鼠尾尖组织DNA提取及鉴定是一种简便易行、节省经费并且准确可靠的方法。     

PCR技术在检测sp3基因表达和ApoE基因型中的应用

目的　应用多聚酶链式反应 (PCR)技术检测多发性硬化 (MS)和老年性痴呆 (AD)的相关基因 sp3和Apo E。方法　分离 MS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,提取 RNA,反转录合成 c DNA第 1链 ,PCR扩增 sp3基因片段 ,应用反转录 -PCR(RT-PCR)技术在 RNA水平上检测 sp3基因在 MS患者 PBMC的表达情况 ;取 AD患者外周血 ,用低渗溶血法提取白细胞 ,酚 /氯仿法提取 DNA,应用 PCR-限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)分析技术检测 Apo Eε基因的多态性。结果　MS组 sp3阴性表达率 (4 5 % )明显高于对照组 (P <0 .0 1 )。AD患者的 Apo Eε2、ε3、ε4基因频率依次为 0 .0 67、 0 .70 0、 0 .2 3 3 ,AD患者的 Apo Eε4基因频率明显高于正常人。结论　汉族人 MS患者存在 sp3基因表达缺陷 ;Apo Eε4与 AD密切相关 ;PCR相关技术可作为基因研究的有力工具。     

凝血因子Ⅻ基因Val 34 Leu突变与脑梗死关系的研究

目的观察中国陕西汉族人群中凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)基因Val 34 Leu的变异,并探讨其与脑梗死发病的关系.方法收集65例陕西地区汉族脑梗死患者和65名健康体检者的外周静脉血;采用酚-氯仿抽提技术提取基因组DNA,聚合酶链反应-单链构象多态性分析与随机测序的方法检测基因的突变.结果脑梗死组与健康对照组均不存在FⅩⅢVal 34 Leu的突变.结论(1)中国陕西地区乃至中国的汉族人群中FⅩⅢVal 34 Leu的突变频率很低;(2)FⅩⅢVal 34 Leu的突变可能不是中国人突变的热点部位.     

hTERT Promoter/HSV-tk靶向性胶质瘤基因治疗系统的构建

目的　构建hTERTPromoter/HSV tk靶向性胶质瘤基因治疗系统。方法　采用TSS法在大肠杆菌JM 10 9中扩增 pGL2 hTERTPromoter和STK质粒。DNA提取纯化试剂盒提取细菌中生长的质粒 ,经电泳 ,紫外分光光度计检验后用HindⅢ ,ClaⅠ核酸内切酶对这两个质粒同时进行双酶酶切。琼脂糖电泳凝胶分离酶切片段 ,切取其中 8.5 ,1.7kbp两个片段长度的凝胶。凝胶DNA提取试剂盒提取其中所含DNA片断 ,T4DNA连接酶连接这两个片段 ,琼脂糖凝胶电泳检测连续结果。结果　通过连接反应获得 10 .2kbp的重组DNA片段。结论　成功构建hTERTPromoter/HSV tk重组表达单位。     

高效快速提取股骨头中总RNA的方法***

背景：从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想。 目的：探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法。 方法：取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4 ℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA。另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照。紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率。甲醛变性胶电泳观察RNA的28 S,18 S条带是否清晰,有无降解和DNA污染。 结果与结论：实验方法提取的总RNA浓度在0.80~0.90 g/L,A260/A280在1.90~2.00之间,A260/A230在1.4~1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染。甲醛变性胶电泳可清晰显示28 S,18 S两条带,大体观察其比例大约为1∶1,证实RNA提取完整,没有降解。由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究。     

病原真菌DNA提取方法及简单重复序列聚合酶链反应体系的优化

背景：真菌DNA的提取在真菌基因工程以及分子生物学研究中占有重要地位。DNA的提取效率,尤其是DNA的质量严重影响实验结果。 目的：建立提取病原真菌基因组DNA的方法,探讨简单重复序列-PCR反应体系中各成分的最佳组合。 设计、时间及地点：DNA提取方法对照分析及正交实验,于2004-06/2006-12在吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室真菌学研究室进行。 材料：将接种临床标本的马铃薯葡萄糖液体培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、酵母蛋白胨液体培养基28 ℃培养3~7 d后,选取可疑菌落进行分离、纯化。 方法：比较玻璃珠-盐析法、CTAB法、Gene TLETM抽提法3种不同DNA提取方法对菌体DNA质量的影响;利用正交设计,选择Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物 4个因素,在3个水平上根据L9(34)正交表进行试验,对真菌简单重复序列-PCR(SSR-PCR)体系进行优化分析;并通过PCR选择适宜的退火温度及循环次数。 主要观察指标：根据扩增获得带型的多态性和特异性,确定最佳反应体系。 结果：Gene TLETM抽提法全部在相应的PCR体系中扩增出目的片段,且带型清楚度、明亮度优于其余两种方法。SSR-PCR反应体系正交试验结果显示,根据R值大小确定因素显著性顺序为模板DNA(2.67)>Taq DNA聚合酶(2.00)>dNTP(0.67)>引物(0.33);根据ki值大小确定各因素优化水平组合为：模板DNA 30 mg/L,Taq DNA聚合酶1 U,dNTP150 μmol/L,引物0.5 μmol/L。但由于引物作为影响因素的R值小,是非显著因素,因此引物取A水平即0.25 μmol/L。反应条件以53 ℃退火温度、35个循环次数为最佳。 结论：Gene TLETM提取法提取DNA的效率更高、操作步骤快速简单。根据正交试验的优化结果,SSR-PCR最佳反应体系为模板DNA 30 mg/L,Taq DNA聚合酶1 U,dNTP 150 μmol/L,引物0.25 μmol/L。反应条件以53 ℃退火温度、35个循环次数为最佳。     

透析浓缩法提取与纯化重组腺病毒DNA

从重组腺病毒转染人胚肾细胞的培养液中提取及纯化病毒ＤＮＡ。将培养液装入透析袋,袋外用聚乙二醇包埋以吸附培养液中的水分直到袋内液体浓缩至所需量。取出浓缩液,用裂解液裂解病毒,然后进行酚／氯仿抽提,透析去杂质及乙醇沉淀。结果表明,从大量培养液中提出的重组腺病毒ＤＮＡ浓度高（４１．３６ μｇ／μｌ±１．６７ μｇ／μｌ）、纯度高（紫外吸收比值２６０ ｎｍ ／２８０ ｎｍ ＝ １．８）,可直接用于酶切反应及ＤＮＡ 探针制备等实验     

同基因背景小鼠核蛋白诱导狼疮鼠模型

背景：自发性狼疮鼠模型不能对基因以外其他的致病因素进行研究。 目的：以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫小鼠后诱导狼疮鼠模型。 方法：选取4~6周SPF级Balb/c小鼠30只,等分为3组。V1组肌肉注射提取的同系Balb/c小鼠核蛋白,间隔3周免疫1次,共免疫4次;V2组注射等体积PBS;V3组为正常对照。检测小鼠末次免疫后3周的24 h尿蛋白、血清抗核抗体、抗双链DNA抗体、小鼠肾脏直接免疫荧光。 结果与结论：V1组小鼠24 h尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、抗核抗体均明显高于V2组、V3组,且V1组小鼠肾小球有免疫球蛋白G免疫复合物沉积,可见肾小球轮廓,V2组、V3组未见肾小球轮廓,只见非特异性的微弱荧光。说明以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫Balb/c小鼠能够成功诱导狼疮鼠模型。     

凝血因子Ⅷ基因Val 34 Leu突变与脑梗死关系的研究

目的　观察中国陕西汉族人群中凝血因子 (F )基因Val34Leu的变异 ,并探讨其与脑梗死发病的关系。方法　收集 6 5例陕西地区汉族脑梗死患者和 6 5名健康体检者的外周静脉血 ;采用酚 氯仿抽提技术提取基因组DNA ,聚合酶链反应 单链构象多态性分析与随机测序的方法检测基因的突变。结果　脑梗死组与健康对照组均不存在FVal34Leu的突变。结论　 (1)中国陕西地区乃至中国的汉族人群中FVal34Leu的突变频率很低 ;(2 )FVal34Leu的突变可能不是中国人突变的热点部位     

实时荧光定量聚合酶链反应诊断面肩肱型肌营养不良

目的 建立面肩肱型肌营养不良(FSHD)的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法.方法 常规酚-氯仿法抽提基囡组DNA,通过EcoR Ⅰ酶切及琼脂糖凝胶电泳,回收38 kb以下DNA作为模板,根据4号染色体上D424序列设计特异的引物和探针,对115例研究对象进行FQ-PCR检测,根据荧光曲线与阳性对照的比较判断结果.结果 16例已知EcoR Ⅰ片段大小的FSHD患者FQ-PCR检测结果为13例阳性,78名健康人检测结果除3例阳性外其余均为阴性,16例经临床诊断的新FSHD患者和5名高危者中分别有15例和3例检测结果为阳性.统计学分析FQ-PCR方法与传统印迹杂交方法(κ=0.765,P=0.002)及临床诊断(κ=0.844,P=0.000)之间的一致性,结果有统计学意义.结论 我们创建了以FQ-PCR技术对FSHD进行基因诊断的新方法.该方法能克服印迹杂交方法费时费力、有放射性污染的缺点,且能较好解决由于4q-10q易位及p13E-11探针结合部位缺失造成传统杂交基因诊断方法欠准确的问题,具有较好的临床应用价值.     

视神经脊髓炎转基因(2D2)鼠的繁殖和鉴定

目的建立视神经脊髓炎转基因(2D2)小鼠的繁育方法,并对其子代鼠进行基因鉴定。方法将雌雄2D2转基因小鼠各1只与C57BL/6野生型小鼠(1∶1)进行交配,由鼠尾血提取基因组DNA,应用PCR技术扩增,电泳后观察2D2转基因传代小鼠的基因表型。结果共繁育产生56只子代小鼠,其中36只子代小鼠基因组DNA扩增出657bp的2D2条带,阳性率为64.3%。结论成功利用杂交方式有效繁殖2D2转基因鼠和应用PCR技术进行基因鉴定,为后续视神经脊髓炎的实验研究奠定了基础。     

可卡因对胎鼠脑细胞DNA含量的影响

目的　探讨不同剂量可卡因对胎鼠脑细胞DNA含量的影响。方法　实验组每日分别给妊娠Wistar大鼠皮下注射不同剂量的盐酸可卡因 15天。对照组每日给相同剂量的普通生理盐水 15天。在可卡因使用的第 15天分别取胎鼠大脑组织。用流式细胞技术检测脑细胞DNA含量及细胞凋亡。结果　在使用可卡因 15mg/kg和 2 5mg/kg组出现脑细胞凋亡 ,且脑细胞DNA含量减少 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而 1 5mg/kg组未出现脑细胞凋亡。结论　使用大剂量可卡因可以诱导胎鼠脑细胞凋亡 ,导致胎鼠脑细胞DNA含量减少。     

Clock基因T3111C和T257G多态性与湖南地区汉族人群睡眠癫痫的相关性

目的 探讨Clock基因T3111C和T257G多态性与湖南地区汉族人群睡眠癫痫的相关性.方法 选取311例癫痫患者(分为睡眠癫痫组112例、觉醒癫痫组95例、不定期癫痫组104例)及300名性别、年龄相匹配的健康对照者为研究对象.酚-氯仿法提取外周血基因组DNA,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测受试者Clock基因T3111C和T257G位点的多态性,并进行对比分析.结果 (1)湖南汉族人群Clock T3111C存在TT和TC基因型,在总人群中频率分布分别为86.09％(526/611)、13.91％ (85/611),等位基因T和C频率分别为93.04％(1137/1222)和6.96％(85/1222).各基因型及等位基因频率的分布在睡眠癫痫组、觉醒癫痫组、不定期癫痫组、健康对照组之间比较差异无统计学意义.(2)湖南汉族人群Clock T257G存在TT和TG基因型,在总人群中频率分布分别为85.92％(525/611)、14.08％( 86/611),等位基因T和G频率分别为92.96％(1136/1222)和7.04％(86/1222).各基因型及等位基因频率的分布在睡眠癫痫组、觉醒癫痫组、不定期癫痫组、健康对照组之间比较差异无统计学意义.(3)湖南汉族人群Clock T3111C和T257G近呈完全连锁不平衡.结论 Clock基因T3111C和T257G多态性与湖南地区汉族人群睡眠癫痫无相关性.     

香芹酚通过抑制脑水肿与氧化应激反应保护大鼠 颅脑损伤

目的 探讨香芹酚对大鼠颅脑损伤（TBI）的保护作用及其机制。方法 SD大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、低剂量香芹酚（10 mg/kg）组、中剂量香芹酚（20 mg/kg）组、高剂量香芹酚（40 mg/kg）组,每组10只。Feeney氏自由落体法制备TBI模型,造模后1、3、7 d采用改良神经功能损害程度评分（mNSS）评估神经功能,干湿法测定脑组织含水量;ELISA法检测氧化应激因子丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）以及化学定量法检测一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 香芹酚能显著改善大鼠TBI后神经功能,显著减轻TBI后脑水肿,显著降低损伤脑组织MDA、NO和NOS含量,显著增加损伤脑组织SOD、CAT和GSH含量。结论 香芹酚可通过减轻大鼠TBI后脑水肿、抑制氧化应激从而发挥神经保护作用。     

OX40L在C57BL/6与BALB/c小鼠组织的差异性表达及分析

背景：有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感。OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异？ 目的：分析OX40L在BALB/c和C57BL/6小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织的表达差异。 方法：取C57BL/6和BALB/c小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织,以Trizol提取总RNA, RIPA Buffer提取组织总蛋白。采用RT-PCR和Western Blot方法检测两种品系小鼠心脏、脑、肾脏、脾脏和骨骼肌的OX40L mRNA和蛋白的表达。OX40L在两种品系小鼠不同器官间的表达差异。 结果与结论：RT-PCR结果显示,C57BL/6小鼠心脏OX40L mRNA表达显著高于BALB/c小鼠(P < 0.05),脾脏OX40L mRNA表达明显低于BALB/c小鼠(P < 0.05),两种品系小鼠大脑、肾脏及骨骼肌OX40LmRNA表达差异无显著性意义;Western Blot结果显示,两种品系小鼠OX40L的蛋白表达均在心脏最高;C57BL/6小鼠心、脑及肾OX40L蛋白表达均显著高于BALB/c小鼠(P < 0.05),两种品系小鼠骨骼肌和脾脏OX40L蛋白表达差异无显著性意义。两个品系小鼠OX40L mRNA的表达水平与蛋白表达水平不完全一致。C57BL/6小鼠心脏中OX40L mRNA转录水平较BALB/c高,但在脾脏中表达量较后者低;C57BL/6小鼠心脏、大脑和肾脏OX40L蛋白水平均较BALB/c小鼠高;两种品系小鼠之间的表达差异提示OX40L可能与C57BL/6小鼠易感动脉粥样硬化有关。