盐酸多奈哌齐对拟VaD大鼠海马CA1区NR1及NR2B免疫组织化学表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对拟血管性痴呆大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位R1(NMDAR1,NR1)和R2B(NMDAR2B,NR2B)的免疫组织化学表达的影响。方法采用双侧颈总动脉反复夹闭、再通,并腹腔注射硝普钠法制备模型,用盐酸多奈哌齐溶液灌胃,Y-型迷宫试验观察其行为学改变,用免疫组织化学技术观测大鼠海马神经元NR1、NR2B的表达变化。结果盐酸多奈哌齐组大鼠海马CA1区NR1表达明显降低,与模型组比较有显著性差异(均P<0.01),与假手术组相比差异无显著性;NR2B表达较模型组明显增高(P<0.01),与假手术组比较无显著性差异。结论盐酸多奈哌齐有可能通过降低NR1的表达,提高海马NR2B的表达,从而改善拟血管性痴呆大鼠的学习、记忆成绩。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆模型小鼠海马神经元ERK表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)模型小鼠海马神经元中细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。将小鼠随机分为假手术组、模型组及盐酸多奈哌齐治疗组,药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。术后第29、30天,采用跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,采用免疫组化法观察各组小鼠海马神经元ERK表达的变化。结果盐酸多奈哌齐可明显改善VD模型小鼠学习、记忆成绩(P<0.05)。模型组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2表达及海马CA3区p-ERK表达较假手术组及治疗组减少(均P<0.05)。结论盐酸多奈哌齐通过增加乙酰胆碱含量,后者作用于毒蕈碱乙酰胆碱受体(M受体)激活ERK,从而有助于改善学习和记忆功能。海马神经元内ERK的表达减少可能参与了VD的发病机制。     

多奈哌齐对血管性痴呆大鼠海马CA_1区NF-κB及COX-2表达的影响

目的观察血管性痴呆(VD)大鼠行为学改变及海马CA1区核转录因子-κB(NF-κB)、环氧化酶-2(COX-2)表达的变化及多奈哌齐干预效果。探讨多奈哌齐对VD大鼠脑保护作用的可能机制。方法双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆大鼠动物模型,120只雄性SD大鼠随机分为:假手术4w、8w组、模型4w、8w组;多奈哌齐治疗4w、8w组。Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区NF-κB、COX-2的表达。结果多奈哌齐可以显著提高血管性痴呆大鼠的学习记忆力和反应能力;模型组和多奈哌齐治疗组NF-κB、COX-2表达均较假手术组明显增高(P0.01),但多奈哌齐治疗组两者表达较模型组明显降低(P0.01)。结论多奈哌齐可以明显改善血管性痴呆大鼠的行为学症状,可能是抑制大鼠脑组织NF-κB、COX-2的表达发挥其脑保护作用。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆模型大鼠大脑NO及iNOS的影响

目的：观察盐酸多奈哌齐（DP）对血管性痴呆模型大鼠iNOS表达的影响,探讨其抗血管性痴呆的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、实验对照组、DP治疗组,每组大鼠20只,采用双侧颈总动脉结扎法制作血管性痴呆大鼠模型。DP干预治疗后,用“Y”型迷宫检测大鼠学习记忆能力,比色法检测大鼠大脑NO及NOS的表达。结果与实验对照组比较,DP治疗后VD大鼠学习记忆能力明显提高,海马iNOS表达明显减少（P＜0.01）。结论盐酸多奈哌齐可改善学习记忆能力,其机制可能是通过下调iNOS的过度表达,减少NO的生成,抑制神经细胞损伤。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马ERK1及ERK2表达变化的影响

目的:探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)小鼠海马中细胞外信号调节激酶(ERK1、ERK2)表达变化的影响。方法:采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。将小鼠随机分为假手术组、模型组及药物组,药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。术后第29、30天,经跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,用免疫组化方法观察各组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2的表达变化。结果:盐酸多奈哌齐明显改善了VD小鼠学习、记忆成绩(p<0.05)。模型组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2表达较假手术组及治疗组减少,均有显著性差异(p<0.05)。结论:ERK1、ERK2的表达减少可能参与了血管性痴呆的发病机制,盐酸多奈哌齐通过增加乙酰胆碱含量,后者作用于毒蕈碱乙酰胆碱受体(M受体)激活ERK,有助于改善学习和记忆功能。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马CA1区长时程增强的影响

目的观察丁苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经元长时程增强(LTP)的影响,并进一步探讨其分子机制。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分成3组即对照组、VD组、VD+NBP组,每组10只。各组大鼠分别进行水迷宫实验(MWM)测试其空间认知功能。MWM后,分别记录麻醉状态下大鼠海马CA1区神经元LTP变化,比较3组大鼠海马神经元在高频刺激后的兴奋性突触后电位(EPSP)斜率变化;电生理记录后,大鼠断头取脑,制备脑冰冻切片,免疫组化测定海马CA1区NR2B受体的表达情况。结果 VD组大鼠有明显的空间认知障碍;丁苯酞治疗后,VD+NBP组大鼠的空间认知障碍得到显著改善。高频刺激后,VD组EPSP斜率增加百分比显著低于对照组大鼠(VD组vs对照组:13.9±1.6 vs 25.1±1.2,P<0.01);VD+NBP组EPSP斜率增加百分比显著高于VD组大鼠(VD+NBP组vs VD组:20.2±1.2 vs 13.9±1.6,P<0.05)。VD组NR2B受体的表达量显著低于对照组(P<0.01),VD+NBP组NR2B受体的表达量显著高于VD组(P<0.01)。结论丁苯酞可通过提高VD大鼠海马CA1区LTP而改善突触可塑性,从而改善空间认知障碍,其机制与丁苯酞上调VD大鼠海马CA1区NR2B受体的表达有关。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马神经细胞神经元蛋白激酶C表达变化的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆（Vascular dementia,VD）小鼠海马神经元蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）变化的影响。方法将3月龄雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐治疗组。采用双侧颈总动脉结扎,反复缺血-再灌注制备VD模型,药物治疗30d。术后第29、30天,分别进行跳台试验和水迷宫试验观察各组小鼠行为学改变。采用免疫组织化学法观察各组海马CA1区神经元PKC表达的变化。结果药物治疗组小鼠学习、记忆成绩较模型组明显改善（P〈0.05）。模型组PKC免疫反应阳性神经元平均光密度值为（0.2730±0.0709）,与假手术组（0.3206±0.0642）和药物组（0.3036±0.0688）相比均显著降低（P〈0.05）,而药物组与假手术组间无明显差别（P〉0.05）。结论反复缺血-再灌注导致VD小鼠海马神经元PKC表达减少;多奈哌齐通过抑制中枢神经系统中乙酰胆碱的降解,可增加VD小鼠海马神经元PKC表达,从而改善VD小鼠学习、记忆能力,推测此也是该药物改善VD小鼠学习、记忆障碍的一个重要环节。     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF及ERK表达的影响

目的 探讨盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马神经元脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只随机分为假手术组、模型组、盐酸美金刚组各16只,采用结扎双侧颈总动脉方法制备动物模型,用盐酸美金刚溶液灌胃,Y-型迷宫测试学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马神经元的形态学变化,兔疫组化染色检测BDNF及ERK的表达变化.结果 盐酸美金刚组大鼠的学习记忆成绩优于模型组,但不及假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.01);BDNF表达较模型组与假手术组均明显增高(P＜0.01) ; ERK表达较模型组明显增高,却低于假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 盐酸美金刚有可能通过增加VD大鼠脑内BDNF含量,保护海马神经元,增加ERK含量,改善学习记忆能力.     

多奈哌齐上调海马神经元β2烟碱型乙酰胆碱受体的表达

目的观察多奈哌齐对β淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导原代培养的海马神经元损伤的保护作用及神经元β2烟碱型乙酰胆碱受体(β2-nAChR)的表达。方法在不同时间及采用不同浓度多奈哌齐提前干预培养的海马神经元,之后用Aβ25-35诱导神经元损伤。采用倒置显微镜观察神经元形态学改变,以MTT法测量神经元活性变化,利用免疫荧光法观察不同浓度和不同时间多奈哌齐干预后Aβ25-35损伤神经元β2-nAChR表达情况,并用激光扫描共聚焦显微镜免疫荧光半定量法测量其平均相对荧光强度变化。结果多奈哌齐干预组可减轻Aβ25-35对神经元的损伤。多奈哌齐预处理组神经元β2-nAChR表达明显增加,其平均相对荧光强度明显高于Aβ25-35损伤组。结论多奈哌齐对Aβ25-35诱导损伤神经元的保护作用部分与β2-nAChR的上调有关。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的影响

目的观察盐酸多奈哌齐对脑缺血-再灌注后血管性痴呆小鼠不同时间点学习、记忆能力和海马CA1区病理变化的影响。方法雄性昆明小鼠250只,采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注的方法制备血管性痴呆(VD)模型,随机分为假手术组、模型组和多奈哌齐治疗组。应用Morris水迷宫实验、跳台实验进行行为学测试,HE染色观察海马病理表现及盐酸多奈哌齐对其的影响。结果术后4周时,模型组小鼠的学习、记忆成绩均明显劣于假手术组小鼠(P<0.05),病理改变较假手术组严重,这一变化持续至术后8周仍未恢复。盐酸多奈哌齐治疗组在术后4周和8周时,其学习、记忆能力和海马CA1区病理表现较模型组均有明显改善(P<0.05)。结论脑缺血-再灌注可导致小鼠海马CA1区神经元持续进行性损害,伴学习、记忆能力障碍;盐酸多奈哌齐对脑缺血-再灌注诱发的VD小鼠有一定治疗作用。     

血管性痴呆小鼠海马胆碱乙酰转移酶mRNA表达特征研究

目的探讨血管性痴呆小鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶原位杂交变化特征及其在血管性痴呆发病中的作用。方法双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备模型,利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用原位杂交技术观测小鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶mRNA的表达变化。结果模型组小鼠学习、记忆成绩较假手术明显降低(P<0.01),其海马胆碱乙酰转移酶mRNA表达也明显下降(P<0.01)。结论血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩下降可能与其海马胆碱乙酰转移酶mRNA低水平表达有关。     

双氢麦角碱对血管性痴呆小鼠海马乙酰胆碱酯酶活性变化的影响

目的探讨双氢麦角碱对血管性痴呆（VD）小鼠海马组织乙酰胆碱酯酶（AchE）活性变化的影响。方法将75只小鼠随机分为假手术纽、模型组和药物纽。药物组和模型组采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注法制备VD模型，术后第29天和第30天测试学习记忆成绩，术后第30天检测海马AchE含量，并研究双氢麦角碱对二者的影响。结果（1）模型组小鼠学习记忆成绩较假手术组明显下降（P〈0．01），治疗组小鼠学习记忆成绩明显优于模型组小鼠（P〈0．01）；（2）模型组小鼠海马AchE活性较假手术组明显降低（P〈0．01），治疗组小鼠海马AchE活性显著高于模型组小鼠（P〈0．05）。结论双氢麦角碱能改善VD小鼠的学习记忆功能，提高海马组织内的AchE活性。     

血管性痴呆小鼠海马ERK2及p-ERK的表达特征

目的观察血管性痴呆（VD）小鼠海马中细胞外信号调节激酶（ERK2、p-ERK）的表达变化,探讨其在VD发病中的作用机制。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型,设立假手术组作为对照。术后第29、30天,经跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,用免疫组化方法观察各组小鼠海马CA1区ERK2及海马CA3区p-ERK的表达变化。结果VD模型小鼠学习、记忆成绩较假手术组显著下降（P〈0.05）;模型组小鼠海马CA1区ERK2的表达及海马CA3区p-ERK的表达较假手术组减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论海马神经元内ERK的表达减少可能参与了血管性痴呆的发病机制,因此应用能促进ERK表达的药物可能成为治疗VD的有效方法之一。     

血管性痴呆小鼠海马组织学改变及乙酰胆碱酯酶活性变化特征

目的:探讨血管性痴呆(VD)小鼠海马组织病理学改变及乙酰胆碱酯酶病理(AchE)活性的变化特征.方法:将50只小鼠随机分为假手术组和模型组。模型组采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注法制备VD模型,术后第29天和第30天测试学习记忆成绩,术后第30天检测海马CA1区组织学变化及AchE含量。结果:VD模型组小鼠学习记忆成绩较假手术组明显下降;海马CA1区锥体细胞数目减少,细胞核体积变小;且模型组小鼠海马AchE活性明显低于假手术组(P<0.01)。结论:小鼠海马组织内的AchE活性下降参与了VD的形成,进一步导致VD小鼠的学习和记忆障碍。     

α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对APP/PS1小鼠海马组织中DYN-Ⅰ蛋白表达的影响

目的研究特异性激动APP/PS1转基因小鼠脑组织中α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)水平后对海马组织DYN-Ⅰ蛋白的影响;探讨α7 nAChR在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病机制中的神经保护作用机制。方法实验动物分为对照组(Control)、野生加PNU282987组(WP)、APP/PS1转基因组(APP/PS1)和APP/PS1加PNU282987组(AP)各8只,WP和AP组给予α7 nAChRs特异性激动剂PNU-282987,另两组给予生理盐水,给药方式为小鼠24 w龄时1 mg/kg腹腔注射PNU-282987,连续5 d。采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别测定小鼠海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与control组相比,APP/PS1组海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平下降(P0.05,P0.01);而特异性激动α7 nAChR水平后,与对照组相比WP组中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平升高(P0.05,P0.01);与APP/PS1组相比AP组小鼠大脑海马组织中发动蛋白Ⅰ(DYN-Ⅰ)mRNA和蛋白水平明显升高(P0.01,P0.01)。结论特异性激动APP/PS1转基因小鼠海马组织中α7 nAChR水平能够使网格蛋白内吞调节蛋白DYN-Ⅰ表达升高。这可能提示了α7 nAChR对突触有一定的保护作用,进一步说明α7 nAChR在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。     

通心络胶囊对血管性痴呆小鼠脑血管储备能力的影响

目的 观察通心络胶囊对血管性痴呆（VD）小鼠脑血管储备功能的影响。方法 用夹闭双侧颈总动脉，同时腹腔注射硝普钠制做VD小鼠模型。通心络灌胃（0.2 g·kg-1·d-1）处理小鼠，生理盐水作为对照。18只小鼠随机分为假手术组（对照组）、模型加生理盐水组（安慰剂组）、模型加通心络组（治疗组）。处理30 d后应用RT-PCR和免疫印迹方法测定小鼠海马部位血管内皮细胞生长因子（VEGF）和一氧化氮合酶（eNOS）的表达。结果 （1）RT-PCR：对照组与安慰剂组的eNOS基因mRNA表达无明显差异，而治疗组eNOS mRNA表达明显增强，与安慰剂组比较差异有统计学意义（P <0.01）。治疗组VEGF mRNA表达明显高于安慰剂组，差异有统计学意义（P <0.01）；（2）Western Blot：安慰剂组的eNOS和VEGF蛋白表达高于对照组（P <0.05），治疗组eNOS和VEGF蛋白表达明显上调，高于安慰剂组，差异有统计学意义（P <0.01）。结论 通心络能明显增强VD模型大鼠海马组织VEGF和eNOS表达，提高其脑血管储备能力,从而减轻VD模型小鼠的缺血性脑损伤。