妥泰对海人酸致癎大鼠海马神经元线粒体损伤的保护作用

目的观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）、大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及妥泰（TPM）的保护作用。方法用TPM干预。用KA诱导大鼠SE2h，并于癫痫终止后3h制作脑切片，用光镜观察神经元的大体损伤，并用电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果KA组和TPM组大鼠均出现了线粒体超微结构的损伤，TPM组大鼠的损伤明显减轻。结论KA诱导的SE可导致海马神经元线粒体损伤，妥泰对此具有保护作用。     

妥泰对海人酸致大鼠海马神经元线粒体损伤的保护作用

目的观察海人酸(KA)诱导的癫持续状态(SE)、大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及妥泰(TPM)的保护作用。方法用TPM干预。用KA诱导大鼠SE 2h,并于癫终止后3h制作脑切片,用光镜观察神经元的大体损伤,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果KA组和TPM组大鼠均出现了线粒体超微结构的损伤,TPM组大鼠的损伤明显减轻。结论KA诱导的SE可导致海马神经元线粒体损伤,妥泰对此具有保护作用。     

托吡酯对颞叶癫痫大鼠海马神经细胞粘附分子表达的影响

目的观察托吡酯对红藻氨酸(KA)诱导颞叶癫痫大鼠海马突触重建标记物神经细胞粘附分子(NCAM)表达的影响,进一步探讨托吡酯的抗痫作用机制。方法采用免疫组织化学染色观察KA诱导癫痫大鼠及托吡酯给药大鼠海马神经细胞粘附分子表达水平,并对两组NCAM表达进行比较。结果KA组NCAM表达水平各时间点平均NCAM阳性密度OD率均明显高于N S组和KA TPM组(P<0.01)。结论本研究提示托吡酯可能通过抑制突触重建的形成,减少痫性放电,从而控制癫痫发作。     

托吡酯对戊四氮诱导的癫痫大鼠海马神经元bc1-2、bax基因表达的调控

目的探讨托吡酯对戊四氮癫癎模型大鼠大脑的神经保护作用及可能的机制.方法成年雄性Wistar大鼠54只,随机分为正常对照组(6只);戊四氮组(24只);托吡酯预处理组(24只).癫癎发作后分别于6、12、48 h后处死取脑,进行HE染色和bcl-2、bax免疫组化染色.结果癎性发作后海马HE染色显示;戊四氮组CA1、CA3和DC区神经元变性及坏死较托吡酯预处理组显著.免疫组化染色显示托吡酯预处理组bcl-2 12和48 h在CA1、CA3和DC的表达强于戊四氮组,而bax在上述时段的表达则较戊四氮组弱.结论托吡酯具有一定的神经保护作用,推测可能与其增强大鼠海马神经元bcl-2基因表达,降低bax基因表达有关.     

海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及caspase-3的表达变化

目的观察海人酸(KA)诱导的癫痫持续状态(SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及caspase-3的表达变化.方法用KA诱导大鼠SE 2h.于SE终止后第3、12、24小时取海马,电镜观察线粒体的超微结构,免疫组化方法检测caspase-3的表达.腹腔内注射生理盐水的大鼠设为对照组.结果SE终止后3 h,电镜下可见线粒体肿胀及膜完整性的破裂.caspase-3的表达于SE后1 2 h较对照组增加,平均阳性细胞数及灰度值分别为10.49±0.68及45.57±2.27(P＜0.05);于SE后24 h,分别为37 36±0.57及11 5.24±1 22(P＜0.01).结论在实验性SE模型中,海马神经元线粒体超微结构的损伤早于caspase-3的表达,提示线粒体的损伤可能是SE后神经元损伤的关键环节.     

海人酸致(疒间)大鼠海马CA3区神经元线粒体与细胞核损伤及caspase-3表达的研究

目的观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）大鼠海马CA，区神经元线粒体与细胞核超微结构的损伤及caspase-3表达的变化。方法用KA诱导大鼠SE2h。分别于SE终止后第3h、12h、24h取海马CA，区制作切片，光镜下观察神经元的变化，电镜下观察线粒体和细胞核的超微结构；免疫组化方法检测相同部位caspase-3的表达变化。结果光镜下SE后24h神经元出现排列散乱、胞体皱缩、胞浆红染以及胞核固缩。电镜下SE后3h，可见线粒体嵴肿胀及膜的崩解；SE后24h细胞核染色质明显边聚。Caspase-3平均阳性细胞数及灰度值于SE后12h较正常对照组显著增加（均P〈0．05）；24h出现极显著增加（均P〈0．01）。结论SE后早期海马神经元线粒体损伤可能是神经元损伤的关键环节。     

海人酸致癎大鼠海马CA_3区神经元线粒体与细胞核损伤及caspase-3表达的研究

目的观察海人酸(KA)诱导的癫疒间持续状态(SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体与细胞核超微结构的损伤及caspase-3表达的变化。方法用KA诱导大鼠SE 2 h。分别于SE终止后第3 h、12 h、24 h取海马CA3区制作切片,光镜下观察神经元的变化,电镜下观察线粒体和细胞核的超微结构;免疫组化方法检测相同部位caspase-3的表达变化。结果光镜下SE后24 h神经元出现排列散乱、胞体皱缩、胞浆红染以及胞核固缩。电镜下SE后3 h,可见线粒体嵴肿胀及膜的崩解;SE后24 h细胞核染色质明显边聚。Caspase-3平均阳性细胞数及灰度值于SE后12 h较正常对照组显著增加(均P<0.05);24 h出现极显著增加(均P<0.01)。结论SE后早期海马神经元线粒体损伤可能是神经元损伤的关键环节。     

海人酸致癫癎持续状态大鼠海马神经元线粒体损伤及caspase-3表达

目的观察海人酸诱导的癫痫间持续状态(status ep ilepticus,SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达。方法用海人酸诱导大鼠SE 2 h;于SE终止后第3、6、24 h取海马,光镜观察神经元的变化,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构;免疫组化方法检测caspase-3的表达。结果SE终止后3h电镜下可见到线粒体嵴的肿胀和膜的崩解;SE后24 h神经元呈坏死样改变;caspase-3的表达在SE后6 h开始增加(与对照组比较,P<0.05),于第24 h明显增高(P<0.01)。结论在实验性SE模型中早期即出现线粒体超微结构的损伤,其后出现caspase-3的表达增高及神经元形态的改变,提示线粒体的损伤是SE后神经元损伤的关键环节。     

不同潜伏期致痫大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas和Bax表达

目的观察不同潜伏期致癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元线粒体超微结构损伤及Fas和Bax的表达。方法分别采用海人酸腹腔注射(A组)和尾静脉注射(B组)诱发不同潜伏期的大鼠SE。于SE终止后3、6、24、48、72点取海马,电镜观察线粒体的超微结构,半定量RTPCR检测Fas、Bax的mRNA表达。另取10只不作任何处理的大鼠作为正常对照组。结果A组潜伏期为97±11min,线粒体肿胀,神经元呈凋亡征;B组潜伏期为48±13min,线粒体肿胀且伴膜的崩解,神经元呈坏死表现。B组Fas及BaxmRNA的表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);与对照组相比A组Fas及BaxmRNA表达均于SE后6h增加(P<0.05),48h达高峰(P<0.001),并持续至72h(P<0.001)。结论不同潜伏期的SE导致了不同程度的线粒体损伤,进而决定了神经元死亡的分子机制。     

不同潜伏期致痫大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、caspase-3的表达

目的观察不同潜伏期致癫痫状态大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及Fas、Bax、cas-pase-3的表达变化。方法分别采用海人酸腹腔注射(A组)和尾静脉注射(B组)诱发不同潜伏期的大鼠癫痫持续状态(SE)。于SE终止后不同时点取海马,电镜观察线粒体的超微结构,半定量RT-PCR检测Fas、Bax的mRNA水平,免疫组化检测caspase-3蛋白的表达。结果A组潜伏期为97±11min,线粒体肿胀,神经元呈凋亡征;B组潜伏期为48±13min,线粒体肿胀且伴膜的崩解,神经元呈坏死表现。对照组及B组未检测到Fas及Bax mRNA;A组Fas及Bax的mRNA表达均于SE后6h出现,24h增加,48h达高峰,并持续至72h。两组动物均在SE后6h出现caspase-3表达增高(P<0.001),24h达顶峰(P<0.001);A组高表达持续至72h,B组在48h点急剧降低。结论不同潜伏期的SE导致了不同程度的线粒体损伤,进而决定了神经元死亡的分子机制。     

海人酸诱导颞叶癫癎大鼠海马中GAP-43和NCAM的表达变化以及托吡酯的干预作用

目的研究海人酸（KA）对大鼠海马中生长相关蛋白-43（GAP-43）和神经细胞粘附分子（NCAM）表达的影响，以及托吡酯（TPM）对其的干预作用。方法将48只大鼠随机分成生理盐水（NS）组、4mgKA组、10mgKA组和10mgKA＋TPM组（n=12），建立KA诱导颞叶癫癎大鼠模型和TPM干预模型，观察大鼠行为学改变，并通过RT-PCR和WesternBlot的方法测定各组大鼠海马中GAP-43及NCAM的mRNA和蛋白表达水平。结果大鼠建模成功；4mgKA组、10mgKA组大鼠GAP-43及NCAM的mRNA和蛋白表达水平明显高于NS组（P〈0．01），且10mgKA组高于4nagKA组（P〈0．01）；10mgKA＋TPM组大鼠的GAP-43和NCAM表达明显低于10mgKA组（P〈0．01）。结论KA能够诱导致癎大鼠海马GAP-43和NCAM表达上调，且与KA剂量有关，而TPM能够抑制KA诱导的GAP-43和NCAM的表达上调。     

电压门控钾通道Kv1.1在戊四唑致痫大鼠中的表达

目的通过检测戊四唑(PTZ)致痫大鼠钾通道Kv1.1蛋白表达,探讨钾通道Kv1.1与癫痫发病的相关性。方法40只SD大鼠分成实验组30只和正常对照组10只。实验组30只大鼠通过腹腔注射PTZ建立全身强直-阵挛发作大鼠癫痫模型,取成功致痫鼠24只均分成3组,分别于致痫后3个时间段(1h、24h、48h)取脑组织。用免疫组化法和Westernblot法检测大鼠钾通道Kv1.1蛋白。结果实验组大鼠海马区钾通道Kv1.1蛋白表达水平在致痫后3个时间段(1h、24h、48h)均明显低于对照组(P0.05),但3个时间段之间钾通道Kv1.1蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠海马区钾通道Kv1.1表达的减少与全身强直阵挛发作大鼠癫痫发病密切相关。     

托吡酯长期应用对癫痫幼鼠学习记忆及海马NMDAR1 mRNA表达的影响

目的:研究托吡酯(TPM)长期应用对癫癎幼鼠学习记忆功能的影响,并观察海马NMDAR1 mRNA表达的变化。方法:以锂-匹罗卡品制作癫癎模型,TPM灌胃,5周后使用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆功能,通过核酸原位杂交法观察海马各区NMDAR1mRNA表达的变化。结果:癫癎幼鼠的学习记忆功能较正常幼鼠明显下降;癫癎幼鼠学习记忆功能经中、小剂量TPM干预后未发生变化,而经大剂量TPM于预后则明显下降;大鼠海马各区NMDAR1 mRNA的表达在TPM干预后无明显变化。结论:癫癎持续状态(SE)后的慢性癫癎对幼鼠的视觉空间学习记忆功能造成损害,长期大剂量应用TPM可加重这一损害,该损害可能与海马CA1、CA3区NMDAR1 mRNA的表达无关。     

Age-dependent cyclooxygenase-2 induction and neuronal damage after status epilepticus in the postnatal rat hippocampus

PURPOSE: Epileptic seizures lead to age-dependent neuronal damage in the developing brain, particularly in the hippocampus, but the mechanisms involved have remained poorly elucidated. In this study, we investigated the contribution of apoptosis and inflammatory processes to neuronal damage after status epilepticus (SE) in postnatal rats. METHODS: SE was induced by an intraperitoneal injection of kainic acid (KA) in 21- and 9-day-old (P21 and P9) rats. The expression of Bax, Bcl-2 and caspase-3, markers for apoptosis, and cyclooxygenase-2 (COX-2), an indicator for activation of inflammatory processes, were studied from 6 h up to 1 week after SE by Western blotting and immunocytochemistry. Neuronal damage was verified by Fluoro-Jade B staining. RESULTS: In P21 rats, SE resulted in neuronal damage in the CA1 neurons of the hippocampus. COX-2 expression was extensively, but transiently, increased and its immunoreactivity pronouncedly enhanced in several hippocampal subregions, amygdala, and piriform cortex by 24 h after SE. The expression of Bax and caspase-3 remained unchanged, whereas the antiapoptotic factor Bcl-2 transiently decreased by 24 h. Single caspase-3 positive neurons appeared in the CA1 region of both control and KA-treated rats. In P9 rats, no neuronal death was detected, and COX-2 expression and immunoreactivity remained at the control level. DISCUSSION: Our results suggest that SE provokes age-specific effects on COX-2 expression. This together with the activation of putative inflammatory processes may contribute to neuronal cell death in the hippocampus of postnatal rats, whereas caspase-dependent apoptosis seems not to be involved in the death process.     

托吡酯对慢性癫(癎)大鼠海马碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的研究托吡酯（TPM）对慢性癫痫大鼠海马碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响。方法制作戊四氮（PTZ）慢性癫痫点燃大鼠模型，分为PTZ组、TPM组及正常对照组，每组又以5d、10d、15d3个时间点各分为3小组。免疫组化法观察各组海马CAl、CA3区及齿状回bFGF表达，HE染色观察病理形态学改变。结果（1）行为学观察：PTZ组和TPM组在癫痫发作上无明显差别。（2）bFGF表达：①各组齿状回区bFGF表达：PTZ组和TPM组各时点表达不断增高，与正常对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．01），尤以10d及15d时增高更明显，与5d时比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。②各组CAl区bFGF表达：PTZ组各时点均有明显表达，且随时间延长而表达不断增高，各时点比较差异有统计学意义（均P〈0．01），与正常对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．01）；TPM组在5d时与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而10d、15d时逐渐下降，接近正常对照组水平。③各组CA3区bFGF表达：5d时3组比较差异无统计学意义。但PTZ组和TPM组在10d时与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），PTZ组在15d时和TPM组及正常对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。（3）病理形态学改变：PTZ组和TPM组的海马CAl、CA3区尤其是CAl区可见较多神经元发生变性和坏死，PTZ组更显著。结论PTZ点燃过程中海马bF-GF表达增高，尤其在CAl区，且随时间延长有表达不断增高的趋势。TPM可能通过减少海马神经元损伤而明显下调海马CAl、CA3区bFGF的表达。     

红藻氨酸致痫大鼠海马S100B、CGRP蛋白表达及病理改变

目的 研究红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马S100B、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达及病理改变.方法 雄性SD大鼠按照完全随机数字表法分成对照组(8只)和模型组(40只),模型组再根据处死时间分为造模后6 h、12 h、24 h、72 h、1周5个亚组,每组8只.模型组采用KA建立颞叶癫痫动物模型,对照组用等体积生理盐水代替KA注射.模型组造模后6 h、12 h、24 h、72 h、1周,对照组注射后24 h取大鼠海马组织行Nissl染色、Timm染色和免疫组化染色,观察S100B、CGRP蛋白的表达情况以及海马神经元和胶质细胞的病理变化.结果 Nissl染色结果显示,模型组大鼠1周后CA3区出现大量固缩的坏死神经元,胞体萎缩,尼氏体消失.Timm染色结果显示,模型组大鼠1周后CA3区始层出现条带状分布的棕色颗粒,齿状回内分子层亦可见少量棕色颗粒.免疫组化染色结果显示,模型组大鼠海马CGRP蛋白大量表达,72 h时达到高峰,同时伴随大量神经元丧失及胶质细胞增生.结论 KA致痫大鼠出现S100B、CGRP蛋白高表达,尼氏体消失,苔藓纤维发芽等一系列病理学改变,推测S100B、CGRP蛋白参与了癫痫发生.

Abstract：

Objective To investigate the expressions of S100B and calcitonin gene related peptide (CGRP) and the pathologic alterations of the hippocampus in kainic acid (KA)-induced epileptic rats. Methods Male SD rats were randomly divided into control group (n=8) and model group (n=40).Animal models of temporal lobe epilepsy were established by intracerebroventricular injection of KA; the same volume of saline was injected into the rats in the control group. Hippocampal tissues within various phases after seizures (6, 12, 24 and 72 h, and 24 h after the success of model making) were performed Nissl staining, Timm staining and immunohistochemical staining. The expressions of S100B and CGRP were observed, and the pathologic alterations of the hippocampal neurons and glial cells were studied.Results All rat models were successfully induced with epileptic seizures. Nissl staining showed that pyknotic neuronal necrosis appeared in the CA3 area of the hippocampus in the model group with cell body atrophy and disappearance of Nissl bodies 1 week after the injection. Timm staining showed that brown particles showed stripped distribution in the CA3 area of the hippocampus and some brown particles in the molecular layer of fascia dentate. Immunohistochemical staining indicated that significant neurons lost and gliosis appeared after seizures with abundant expressions of S100B and CGRP.Conclusion KA-induced epileptic rats express abundant S100B and CGRP and appear such pathological changes as disappearance of Nissl bodies and mossy fiber sprouting, indicating that both S100B and CGRP participate in the onset of epilepsy.