乳腺干细胞的体外培养及免疫磁珠法分离*☆

目的：乳腺干细胞可以从正常乳腺腺体、良性或恶性乳腺肿瘤的瘤旁组织以及乳汁分离的乳腺上皮细胞中获得。实验选取乳腺癌旁正常组织，体外培养并利用免疫磁珠法分离出具有干细胞特性的乳腺细胞，拟进一步验证在成人乳腺组织中含有可为组织工程所用的种子细胞。 方法：实验于2007-03/10在吉林大学公共卫生学院放射生物学教研室完成。①细胞来源：标本取材于吉林大学第一医院乳腺外科同期收治的20例女性乳腺癌患者手术切除的癌旁组织（> 3 cm），经病理证实为正常乳腺腺体，患者对治疗及实验均知情同意。②实验方法：去除乳腺腺体周围脂肪组织及毛细血管，剪碎成约为0.3 cm3的组织块，离心，去上清，I型胶原酶消化，加入含10%胎牛血清的DMEM/F12基础培养基进行原代培养。2周后待细胞接近铺满整个培养瓶底部时，用胰蛋白酶 + D-HANKS液将贴壁细胞消化分离，按1∶2 或1∶3传代。利用免疫磁珠系统分离筛选乳腺成体干细胞。③实验评估：观察原代与传代培养的乳腺细胞生长特点，以及免疫磁珠分选后的乳腺干细胞形态、生长特性。采用免疫组化法对分选结果进行鉴定。 结果：①体外培养的乳腺细胞生长特点：原代培养72 h后可见乳腺细胞贴壁，5 d后细胞呈纺锤形、多角形生长，10 d后细胞生长旺盛且排列紧密，随着培养时间的延长梭形细胞逐渐占据优势。传代后细胞增殖速度加快，细胞更加均匀有序的生长。②乳腺干细胞的形态特点及生长特性：分离出的人乳腺成体干细胞生长状态良好，呈类圆形，培养3 d后呈多角形分化生长。③分选结果免疫组化鉴定：免疫磁珠分选出的乳腺干细胞均表达上皮特异性抗原，而不表达唾液黏蛋白1。 结论：成人乳腺组织中存在唾液黏蛋白1-上皮特异性抗原+且具有干细胞特性的乳腺细胞，利用免疫磁珠技术可成功地将其从人乳腺癌旁正常组织中分离出来。     

大鼠胎脑皮质神经干细胞体外培养及诱导分化的实验研究

目的 从孕龄15d SD胚胎鼠脑皮质中分离并培养神经干细胞（neural stem cells。NSCs），观察其生长、增殖及分化。方法 采用包含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮细胞生长因子（EGF）的无血清培养及单细胞克隆技术，对胚胎鼠脑皮质神经干细胞进行原代、传代培养及诱导其分化。用Nestin染色鉴定神经干细胞特性，用免疫组化方法（β-Ⅲ-tubulin、GFAP染色）检测神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞状况。结果 从孕龄15dSD胚胎鼠脑皮质中分离的组织，经原代及传代培养均可形成细胞克隆．切具有增殖能力。原代及传代培养细胞呈Nestin（神经上皮干细胞蛋白）表达阳性．诱导分化后的细胞表达神经元细胞、星形胶质细胞的特异性抗原。结论 本实验分离、培养的孕龄15dSD胚胎鼠脑皮质细胞Nestin表达阳性．分化后表达神经元和星形胶质细胞的标记物，是大鼠的神经干细胞，并具有多向分化潜能。     

胎鼠海马神经干细胞生物学特性的研究

目的研究胎鼠脑组织中海马神经干细胞的自我繁殖特性及多向分化潜能.方法在碱性成纤维生长因子(FGF-2)作用下从胎鼠脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化,然后采用间接免疫荧光和免疫组化技术研究神经干细胞的特性.结果由胎鼠海马中分离出的神经干细胞在体外分裂增殖形成干细胞团,分化产生神经元和胶质细胞,它们分别对神经上皮干细胞蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等抗原标记呈现阳性.结论胎鼠脑海马中存在神经干细胞,其具有自我增殖特性和多向分化潜能,在FGF-2的作用下分裂增殖,并分化成神经元、胶质细胞.     

离体培养的成年小鼠嗅上皮干细胞的增殖和自我更新

用离体培养法观察bFGF对成年小鼠嗅上皮中的具有多种潜能的未分化细胞的作用。实验显示bFGF能导致这些细胞在数量上不断增加，形成能自我更新的未分化细胞群；离开未分化细胞群的一些细胞则分化成神经元和胶质细胞，免疫组化反应显示这些未分化细胞表达nestin-存在神经上皮干细胞的一种中丝蛋白（一种神经元标记物），由此证明，具有多种潜能并有干细胞特征的未分化细胞存在于成年小鼠嗅上皮中，用免疫印迹技术，硫酸锌原位创伤能使嗅上皮中神经元特有微管蛋白（neuron-specific tubulin,NST)和神经元特异醇化酶（neuron-specific enolase,NSE)表达增加，硫酸锌创伤又是离体培养嗅上皮得以成功的主要因素。结果表明，许多因素导致了成年小鼠嗅上皮中干细胞离体培养时增殖和自我更新。     

4002/大鼠海马中83KD蛋白诱导神经干细胞向AChE阳性神经元定向分化的作用（英文）

背景：神经干细胞的临床应用还尚待时日,现阶段需要解决如何诱导神经干细胞分化为特定表型的神经元以替代丢失、变性的神经元细胞。 目的：探讨大鼠海马组织83 ku蛋白对神经干细胞向乙酰胆碱酯酶阳性神经元分化的作用。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2003-10/2008-04在南通大学医学院完成。 材料：清洁级SD大鼠12只,17 d龄SD胎鼠多只,均由南通大学实验动物中心提供。 方法：取6只正常大鼠及6只切割海马伞后14 d大鼠的海马组织制成匀浆,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据染色结果切取含有83 ku差异蛋白条带进行电洗脱,定量后调整蛋白浓度为300 mg/L。取胎鼠前脑组织,体外分离培养神经干细胞,设立3组：空白对照组加入单纯DMEM/F12无血清培养基;83 ku蛋白正常组、83 ku蛋白切割组分别加入含10 mg/L来自正常/割海马伞大鼠海马组织83 ku蛋白的DMEM/F12无血清培养基,诱导12 d。 主要观察指标：用乙酰胆碱酯酶组织化学染色检测神经干细胞分化为乙酰胆碱酯酶阳性神经元的情况。 结果：诱导12 d后,83 ku蛋白切割组乙酰胆碱酯酶阳性神经元较多,胞体大且分化较好,突起粗且长;83 ku蛋白正常组乙酰胆碱酯酶阳性神经元较少,胞体小,突起短;空白对照组仅见少量乙酰胆碱酯酶阳性神经元。组间乙酰胆碱酯酶阳性神经元数比较差异有显著性意义(P < 0.05),83 ku蛋白切割组>83 ku蛋白正常组>空白对照组。 结论：大鼠海马组织中83 ku蛋白可成功诱导神经干细胞定向分化为乙酰胆碱酯酶阳性神经元。     

β-淀粉样蛋白致胚胎鼠大脑神经干细胞凋亡作用的研究

目的 探讨β-淀粉样蛋白（amyloid-β protein，Aβ）对胚胎鼠神经干细胞凋亡作用的影响。方法 体外培养7d的胚胎鼠神经干细胞．分为正常对照组和实验组，实验组根据Aβ1-40作用终浓度的不同，又分为0．1，1．0，5．0．10．0和20．0μmol／L等5个亚组，分别培养12h、24h、48h及72h。然后经四唑盐实验筛选Aβ1-40致神经干细胞发生凋亡的最佳浓度，再与神经干细胞共同培养。通过Annexin-V磷脂酰丝氨酸荧光标记染色法规察神经干细胞早期凋亡情况；用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行染色，观察神经干细胞中晚期凋亡情况。结果（1）经四唑盐筛选实验确定，以终浓度为5．0μmol／L的Aβ1-40。作为β-淀粉样蛋白致神经干细胞发生凋亡的最佳诱导剂量。（2）神经干细胞与Aβ1-40（5.0μmol／L）共同培养至6h时，神经下细胞发生早期凋亡，细胞内出现大量绿色荧光标记物，而对照组则未见绿色荧光标记物。（3）神经干细胞与Aβ1-40（5．0μmol／L）共同培养24h时，神经于细胞发生中晚期凋亡，细胞内可见绿色荧光标记物。结论β-淀粉样蛋白可导致胚胎鼠大脑神经干细胞发生凋亡。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨*☆

背景：前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。 目的：进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。 方法：分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Western blot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达。 结果与结论：神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5 mRNA的表达上调作用。Western blot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

骨髓间充质干细胞在糖尿病创面中向皮肤腺上皮的分化***

背景：骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,目前已证实其在急性创面中能够向皮肤组织细胞转化,但在糖尿病创面中的分化报道甚少。 目的：观察糖尿病创面皮肤微环境中的骨髓间充质干细胞分化为皮肤附属器细胞的可行性。 方法：全骨髓法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,传至第三四代细胞行5-BrdU标记。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,2周后在模型鼠背部制作圆形创面,取密度为1×109 L-1 5-BrdU标记的骨髓间充质干细胞悬液1 mL注射于创面边缘,分别于细胞移植后2,3周切取创面中央再生组织制备切片,行BrdU和角蛋白免疫组织化学染色。 结果与结论：BrdU阳性细胞出现在表皮、真皮及皮下组织各层,部分阳性细胞位于皮脂腺及腺导管上皮中;连续切片中BrdU阳性细胞同时也表达角蛋白,以腺导管上皮多见。提示在糖尿病溃疡创面愈合过程中,骨髓间充质干细胞具有向皮肤附属器细胞分化的潜能。     

膀胱小细胞神经内分泌癌临床病理分析

目的探讨膀胱小细胞神经内分泌癌的临床病理特征和生物学行为。方法回顾分析膀胱小细胞神经内分泌癌1例并复习有关文献予以讨论。结果患者中术前未得到明确的病理诊断,术后2周恢复良好,痊愈出院。病理检查:肿瘤细胞表达神经内分泌标记物神经原特异性烯醇酶、嗜铬粒蛋白A和突触素。结论膀胱小细胞神经内分泌癌是一种比较少见的高度恶性肿瘤,有独特的病理形态,早期即可发生转移,预后凶险,活检容易漏诊。     

25例恶性胶质瘤中肿瘤干细胞的分离与检测

目的 从不同病理级别胶质瘤组织标本中分离、培养并鉴定胶质瘤干细胞.方法 取25例(23例原发胶质瘤,2例复发胶质瘤)新鲜人脑胶质细胞瘤标本,分离脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清达尔伯克(氏)必需基本培养基/F-12(DMEM/F-12)培养基中培养至细胞形成干细胞球,免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞CD133、Nestin的表达情况,干细胞球诱导分化后检测细胞表面分化标记物β微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况.结果 被检测的23例原发胶质瘤标本中,随着胶质瘤级别的增高,形成神经球的时间缩短,数量增多.2例复发胶质瘤组织分离得到的细胞形成的神经球较原发胶质瘤快而多.免疫荧光方法检测神经球CD133、巢蛋白(Nestin)表达阳性.神经球细胞经诱导分化后β-TubulinⅢ、GFAP表达阳性.结论 胶质瘤组织中存在肿瘤干细胞,不同级别胶质瘤中BTSC数量及增殖能力不同.     

MDR-1和GFAP蛋白在难治性癫痫脑组织的表达

目的：观察不同病因的难治性癫痫手术切除脑组织中多药耐药基因蛋白（MDR-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。方法：在对22例难治性癫痫临床病理资料分析的基础上，应用免疫组化和免疫组化双标技术观察脑组织中MDR-1和GFAP蛋白的表达情况。结果：反应性胶质细胞增生是难治性癫痫共同的病理学特征。MDR-1蛋白的表达主要在一些增生性星形胶质细胞和毛细血管壁周围结构，而寡突胶质细胞、小胶质细胞及正常的神经元内无MDR-1蛋白的表达；增生性星形胶质细胞内MDR-1与GFAP具有共存现象。结论：在难治性癫痫的反应必脑胶质细胞内同时具有GFAP和MDR-1蛋白的高表达和共存。     

体外神经干细胞培养特性观察

目的 探讨神经干细胞(NSCs)体外分离培养和增殖的特性.方法 从新生24h内的SD大鼠脑组织分离NSCs,采用无血清悬浮培养法进行NSCs体外扩增培养.倒置相差显微镜观察细胞形态,通过绘制细胞生长曲线观察NSCs的自我更新和增殖能力,采用免疫细胞化学法检测NSCs标志物神经上皮干细胞蛋白(Nestin)的表达及分化后细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和2,3-环核甘酸磷酸二脂酶(CNP)的表达.结果 从新生SD大鼠脑组织分离的细胞在无血清的培养基中形成悬浮的神经球.神经球具有自我更新和表达Nestin的能力,分化后的细胞能表达神经元、星型胶质细胞及少突胶质细胞的特异性抗原.结论 从新生大鼠的脑组织中成功分离出NSCs,其具有在体外自我更新和增殖、多向分化潜能及表达Nestin的能力.     

血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞

背景：细胞周期分析已证实,90%以上的干细胞处于G0静止状态,因此采用不含任何生长因子和其他相关营养添加剂的血清剥夺培养基更适合筛选分离肿瘤干细胞。 目的：应用血清剥夺法培养胶质瘤U87细胞,并筛选鉴定该细胞系中的胶质瘤干细胞。 方法：将U87细胞培养在只含有DMEM和L-谷氨酰胺的培养基中培养6 d,筛选出胶质瘤干细胞,接着更换为神经干细胞培养基,观察细胞肿瘤球的形成过程;将肿瘤球接种于血清培养基,观察其在体外的分化特点;免疫荧光鉴定血清剥夺后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞。 结果与结论：应用血清剥夺的方法成功地筛选出了表达CD133的肿瘤干细胞,并能增殖形成肿瘤球;肿瘤球可多向分化,子代细胞表达胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶。说明U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞。     

原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的分析***

背景：近年来,有观点认为原发性肝癌的发生机制可能为肝干细胞分化不全或分化异常所致。目前,肝干细胞研究正处于起步阶段,对人原发性肝癌的“干细胞起源”学说尚需进一步验证。 目的：观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征。 设计：观察对比实验。 单位：解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心。 对象： 实验于2003-09/2004-07在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心完成,选用94例肝细胞癌和12例肝内胆管细胞癌和10例混合型肝癌石蜡包埋组织,同时选用5例肝硬化和4例正常肝组织作为实验对照,均取自病理科存档资料。肝癌组织均为患者首次肝癌切除手术时采取,包括肿瘤组织和癌旁组织,患者均无化疗和放射治疗史,并对受检项目知情同意。实验主要抗体均购自Santa Cruz公司。 方法： 采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学SP方法（检测的免疫标志有鼠抗人细胞角蛋白19单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白8&18单克隆抗体、鼠抗人c-kit单克隆抗体、鼠抗人Thy-1单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体）观察各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。 主要观察指标：各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。 结果：在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达,均可观察到肝干细胞向肝癌细胞的转化,以混合型肝细胞癌中肝干细胞免疫表型表达率最高(P < 0.05)。正常组和肝硬化组干细胞免疫表型特征为阴性。　 结论：不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞。     

携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞的有效性**☆

背景：细胞移植前,将目的基因转染干细胞可增强细胞治疗效果。但要实现目的基因的高效转移并适度表达,载体系统的选择是关键。 目的：将携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞,检测病毒感染效率及感染后的细胞活力。 方法：利用脂质体转染法获取慢病毒原液。设定不同感染复数(1,5,10,15,20),将带有增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体感染人脂肪源性干细胞。荧光显微镜下观察病毒转染后人脂肪源性干细胞内增强绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪测定病毒感染效率。茜素红染色及油红O染色鉴定病毒转染后人脂肪源性干细胞的多向分化潜能。MTT法检测转染后人脂肪源性干细胞的增殖情况。 结果与结论：随病毒感染时间及感染复数值的增加,人脂肪源性干细胞内绿色荧光表达明显增强,感染后第3天,感染复数为20时人脂肪源性干细胞内可见明显绿色荧光表达,病毒感染效率为60%;第5~7天,病毒感染效率可达90%~95%。转染后人脂肪源性干细胞经成骨及成脂诱导液培养后,茜素红染色及油红O染色阳性,表明病毒感染未影响人脂肪源性干细胞的多向分化能力。病毒感染后,人脂肪源性干细胞的增殖能力未受明显影响。说明携带增强绿色荧光蛋白的慢病毒载体可以有效感染人脂肪源性干细胞。     

胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植β-淀粉样蛋白损伤大鼠海马后的靶向迁移与分化(英文)

目的观察小鼠胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植β-淀粉样蛋白(amyloidβpeptide,Aβ)损伤大鼠海马后的靶向迁移及在体分化。方法采用无血清培养法将表达绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,移植至Aβ_(1-40)、单侧损伤的大鼠海马;免疫荧光观察移植细胞的迁移距离、迁移方向与分化情况:对移植细胞的平均迁移距离与平均分化率作相关性分析。结果胚胎干细胞经改良的无血.清培养法生长可分化为nestin阳性神经前体细胞。移植后第16周,神经前体细胞平均迁移距离比第4周增长了约5倍。移植细胞中,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞的平均分化率从(30.41±1.45)%增长到(49.25±1_23)%;神经丝蛋白200(neurofilament 200,NF200)细胞的平均分化率从(16.68±0.95)%增长到(27.94±1.21)%;靶向迁移至Aβ斑块同侧的GFAP阳性细胞的比例从60.2%增长到81.3%,靶向迁移至Aβ斑块的NF200阳性细胞的比例从61.3%增至84.1%。相关性分析结果显示平均迁移距离与神经元分化率之间存在显著线性相关(r=0.991),与胶质细胞分化率之间也存在显著线性相关(r=0.953)。结论胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植Aβ损伤模型大鼠海马后能够靶向迁移至Aβ损伤区并分化为胶质细胞和神经元。     

骨形成蛋白2在神经干细胞诱导分化中的作用

神经干细胞的多向分化潜能 ,使其成为替代治疗的内源性和外源性潜在细胞源 ,为治疗神经系统退行性疾病和中枢神经系统损伤带来了希望。神经干细胞的定向诱导分化 ,是当前神经干细胞研究领域的难点和热点。生长因子TGF beta超家族成员BMP2在骨发育形成中的重要作用已为许多研究所证实。近年来国内外对BMP2在神经系统发育中的作用进行了广泛研究 ,证实BMP2在诱导神经干细胞分化中发挥重要的作用 ,表现为一种多效性神经诱导因子。本文对近年来国际上关于BMP2诱导神经干细胞分化的研究做一综述     

脑转移性混合性腺神经内分泌癌

目的报告首例脑转移性混合性腺神经内分泌癌的临床病理学特征,探讨诊断与鉴别诊断要点和预后影响因素。方法与结果男性患者,35岁。临床表现为头痛、呕吐,CT显示右侧颞叶占位性病变。术中可见肿瘤直径约3 cm,边界欠清晰,质地软韧,血供丰富。肿瘤由大小较一致的小圆形细胞构成,局部肿瘤细胞围绕小血管形成"菊形团"样或乳头样结构,核分裂象活跃,与周围脑组织界限不清;肿瘤细胞弥漫性表达突触素和CD56,不表达胶质纤维酸性蛋白、广谱细胞角蛋白、CD3、CD20、波形蛋白、白细胞共同抗原、甲状腺转录因子-1、S-100蛋白、神经微丝蛋白、巢蛋白、细胞角蛋白(CK)5/6、CK8/18和CD99,Ki-67抗原标记指数约为62%。外院行乙状结肠肠镜检查发现肿物,组织学呈明显双相性,由大小一致的小圆形细胞和低至中度分化的腺癌细胞构成,二者界限清晰,无移行。小圆形肿瘤细胞弥漫性表达突触素和CD56,不表达广谱细胞角蛋白;腺癌细胞弥漫性表达广谱细胞角蛋白,不表达突触素和CD56。结论混合性腺神经内分泌癌为2010年世界卫生组织命名和定义的肿瘤,发生脑转移者尚未见诸报道,明确诊断需依靠临床病史、组织形态学特征和免疫组织化学表型。     

干细胞中的骨形态发生蛋白信号转导机制★

学术背景：骨形态发生蛋白属于TGF-β超家族的一类多功能分泌型信号分子，通过信号级联传导调节胚胎形态特征、组织器官的发育以及生殖细胞的分化；还能促进干细胞沿不同的方向分化与凋亡。骨形态发生蛋白在不同类型的干细胞中，其信号转导途径呈多样化；目前原因还不十分明确，但研究表明可能与受体或其细胞中多重信号的整合作用有关。 目的：综述骨形态发生蛋白信号转导途径在几种类型干细胞中所发挥的作用及其转导机制。 检索策略：由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库 2007-04/07的相关文献，检索词“bone morphogenetic protein，the differentiation and proliferation of stem cell”，并限定文章语言种类为English。共检索到45篇文献，对资料进行初审，纳入标准：①文章所述内容应与骨形态发生蛋白信号转导途径相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 文献评价：文献的来源主要是通过对骨形态发生蛋白信号转导途径方面内容进行汇总分析。所选用的31篇文献中，2篇为综述，其余均为临床或基础实验研究。 资料综合：①骨形态发生蛋白信号属于激酶转导系统，可通过Smads或p38 MAPK通路传递信号，在转导过程中受多种细胞内外因素的调节。②骨形态发生蛋白信号强弱、时间以及下游信号通路均对早期胚胎干细胞的增殖和分化产生重要影响，可能与Wnts信号通路等多重级联交互作用有关。③骨形态发生蛋白信号可促进神经干细胞向神经元和神经胶质细胞分化，抑制胰脏祖细胞的分化。骨形态发生蛋白4通过抑制分化作用和阻止其前体细胞的增殖这两方面来调节毛细胞数量，还能促进眼胚胎细胞的增殖与凋亡。骨形态发生蛋白和Nodal信号能通过与膜受体竞争性结合调节中胚层祖细胞的发育、增殖与分化。 结论：骨形态发生蛋白信号通路受细胞内外多种因素调控，能调控各种来源干细胞的分化与增殖，调节靶基因的转录。但其只是干细胞特性的调节因子，不是干细胞增殖与分化的标记物。目前，骨形态发生蛋白信号转导与整合作用的细胞学机制、信号转导作用的时间与空间位置等问题还有待进一步研究。     

兔骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞诱导分化：缝隙连接蛋白43的

背景：骨髓间充质干细胞经过诱导因素刺激后,能够分化为心肌细胞,同时表达缝隙连接蛋白43,移植后可改善心功能或修复受损的心脏起搏传导系统。而缝隙连接蛋白43在维持心脏正常功能中发挥着重要作用。 目的：观察兔骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞过程中缝隙连接蛋白43的表达变化,及诱导后骨髓间充质干细胞间隙连接通讯功能的改变。 方法：采用Percoll非密度梯度离心法与贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞,正常组不进行任何干预,诱导组加入5-氮胞苷向心肌样细胞诱导,免疫荧光及流式细胞仪检验细胞诱导前后缝隙连接蛋白43的表达。将原代培养1 d的乳鼠心肌细胞分别接种于上述两组细胞爬片上,免疫荧光观察兔骨髓间充质干细胞与心肌细胞形成间隙连接的情况。划痕试验设立正常组、诱导组以及添加甘草次酸的阻滞剂组,观察兔骨髓间充质干细胞诱导前后细胞间隙连接的功能变化。 结果与结论：正常组骨髓间充质干细胞缝隙连接蛋白43呈弱表达,5-氮胞苷诱导2,4周后缝隙连接蛋白43的表达均显著增加(P < 0.01),细胞间隙连接通讯功能明显增强(P < 0.001),且随诱导时间的延长呈依赖性增强(P < 0.05)。骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养后,诱导组缝隙连接蛋白43明显呈线状表达在两个相邻细胞的接触面。与诱导4周时比较,阻滞剂组细胞间隙连接通讯功能明显受到抑制(P < 0.001)。提示骨髓间充质干细胞能够自发表达缝隙连接蛋白43,在移植后早期能与心肌细胞形成间隙连接,从而有利于移植后心肌电传导,并发挥骨髓间充质干细胞的旁分泌效应。 关键词：缝隙连接蛋白43;间隙连接;5-氮胞苷;诱导;心肌细胞;骨髓间充质干细胞