脑力智宝对乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的影响

目的:从细胞学角度研究脑力智宝在维持神经元存活和促进神经突起生长方面的保护作用。方法:将SD大鼠分为脑力智宝提取物高剂量组(0.63g/L)、低剂量组(0.04g/L)和对照组,连续给药7次后眼球取血制备含药血清,用MTT法检测脑力智宝对原代培养神经细胞生长发育的影响;用分散培养法培养PC12细胞,测定加入不同浓度脑力智宝提取物(0.63和0.04g/L)、脑力智宝含药血清(6和3g/kg)、神经生长因子后PC12细胞在24,48和72h的突起阳性细胞百分比。结果:脑力智宝对PC12细胞具有营养作用,使细胞突起增加增长,阳性细胞数增多,48h时0.63g/L脑力智宝提取物可使阳性细胞百分数从模型组的17.2%提高到38.4%(t=4.89,P<0.01),3g/kg脑力智宝含药血清可使阳性细胞百分数达到69.0%(t=9.37,P<0.01),并可促进原代培养鼠脑皮质神经细胞的生长发育,MTT法检测A值明显增加,尤以0.63g/L脑力智宝提取物(t=4.79,P<0.01)和3g/kg脑力智宝(P<0.01,t=8.81)组作用明显。0.63g/L脑力智宝提取物可显著促进PC12细胞增殖,在2,4和6d时分别可使PC12细胞数目较对照组分别增加1.56,1.85和2.96倍,差异均有显著性意义(t=2.67,5.27,3.12;P<0.05～0.01),均与对照组比较有显著性差异;6g/kg含药血清组亦显著增加。脑力智宝提取物和含药血清均可促进无血清培养神经     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和神经分化的影响

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和神经分化的影响。方法通过全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,免疫荧光检测IGFBP4在P1、P4、P6、P8和P10 BMSCs的表达。取第4代BMSC细胞,分为单纯培养基组和添加IGFBP4组,用CCK8试剂盒检测单纯培养基组和添加IGFBP 4组吸光度值A450 nm。再将BMSC细胞分为3组:neurocult组、EGF+b FGF组、EGF+b FGF+IGFBP4组,每组连续测定7 d,每天6个平行孔,诱导培养基Neuro Cult培养再分别添加EGF+b FGF和EGF+b FGF+IGFBP4,诱导其向神经祖细胞分化,免疫荧光染色检测Nestin和Sox-2表达,并观察神经球数量和细胞增殖活性。结果成功获得原代大鼠BMSCs,可见CD105、CD44和CD90表达,IGFBP4的表达随培养代数而增加,外源IGFBP4能明显抑制BMSCs的增殖(P0.05)。经诱导BMSCs形成的神经球样结构表达Nestin和Sox-2,细胞增殖活性升高(P0.05)。结论 IGFBP4能抑制BMSCs的增殖,促进其向神经祖细胞分化。     

帕金森病基因治疗的理论：VMAT2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的：获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicular monoamine transporter-2，VMAT2)基因，转染至MN9D细胞，通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法：从人胎脑中提取总RNA，RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM—Easy-T载体中，进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2，转染MN9D细胞，免疫细胞化学检测VMAT2的表达，HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果：RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的eDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达；免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)、MAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227．2&;#177;20．8)％和(302．6&;#177;15．7)％(P&;lt;0．01)，而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48．1&;#177;5．3)％和(55．7&;#177;4．9)％(P&;lt;0．05)，细胞内HVA，DOPAC分别升高至(332．1&;#177;28．2)％和(1176．8&;#177;82．5)％(P&;lt;0．01)。结论：克隆了VMAT2cDNA片断，可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促讲多巴胺的循环利用．有望用于帕余森病的基因治疗。     

基因治疗帕金森病的分子生物学研究：神经营养因子Neurturin基因克隆及其真核表达

目的：克隆中国人Neurturin基因，重组携带Neurturin基因的真核表达载体，为研究Neurturln基因治疗帕金森病提供分子生物学基础。方法：实验于2003—03／2004—05在北京市神经再生修复研究重点实验室完成。采用RT-PCR方法从人胎儿脑中获取Neurturin cDNA，将其克隆至pGEM—Easy—T载体中。测序鉴定后，重组携带Neurturin基因的反转录病毒载体pLPCX-Neurturin；通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系，用病毒上清感染NIH 3T3细胞系以检测病毒滴度。结果：RT-PCR扩增到人Neurturln cDNA片段，序列与Genebank登录的序列一致；将Neurturin基因亚克隆至反转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLPCX-Neurturin，病毒上清滴度为5&;#215;10^4CFU／mL。结论：获得人Neurturln基因cDNA序列，检测到Neurturin基因在真核细胞中表达，并得到较高滴度的病毒上清。     

大鼠苍白球炎症反应后黑质铁代谢的改变

目的:观察苍白球炎症对黑质铁代谢的影响及其对黑质多巴胺能神经元的毒性作用,探讨帕金森病与炎症反应的关系。方法:实验于2004-12/2006-05在首都医科大学北京神经科学研究所完成。选择健康SD雄性大鼠20只,随机数字表法分为生理盐水组和脂多糖组,每组10只。①脑立体定位注射生理盐水或脂多糖入大鼠双侧苍白球,分别于术前、术后7,14,21,28d观察大鼠行为学改变,采用动物行为轨迹分析软件计算平均运动速度及30min内运动距离。②用药4周后麻醉后处死大鼠(n=10,每组各5只),用免疫组织化学染色、Perl’s铁染色观察黑质游离铁及铁蛋白表达以及酪氨酸羟化酶阳性神经元、小胶质细胞变化。③另10只大鼠于用药后4周断头提取蛋白,采用高效液相色谱法定量统计分析纹状体多巴胺含量变化。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①两组大鼠行为学观察:脂多糖组大鼠术后7,14,21,28d的平均运动速度、30min内运动距离较术前呈进行性减少,生理盐水组大鼠运动指标无明显变化。脂多糖组动物术后14,21,28d平均运动速度和30min内运动距离低于生理盐水组,差异均有显著性意义[分别为(0.95±0.1),(1.65±0.10)cm/min;(0.75±0.08),(1.60±0.09)cm/min;(0.45±0.07),(1.73±0.07)cm/min;(1710±180),(2970±180)cm;(1350±144),(2880±156)cm;(1170±126),(3314±140)cm,P<0.05,0.01]。②脂多糖组大鼠苍白球、黑质小胶质细胞增生且呈现异常激活状态。黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元低于生理盐水组[分别为(3002.0±362.1),(6079.0±510.2)个,P<0.01]。③脂多糖组大鼠黑质内铁蛋白及游离铁水平较生理盐水组明显增加。④大鼠纹状体多巴胺含量:脂多糖组纹状体多巴胺含量低于生理盐水组,差异有显著性意义[分别为(16.49±1.79),(22.79±1.56)nmol/g,P<0.05]。结论:苍白球的炎症导致黑质多巴胺能神经元的变性,黑质中游离铁和铁代谢相关蛋白的改变可能在这一过程中发挥重要作用。     

胶质细胞系源性神经营养因子在神经元发育中的生物学功能

目的:考察胶质细胞系源性神经营养因子及其信号传导通路在神经元发育过程中的生物学功能,以及其中的分子机制。资料来源:应用计算机检索Medline1993-01/2005-10期间与胶质细胞系源性神经营养因子及其信号通路在神经元发育中的功能有关的文章,检索词“gliacellline-derivedneurotrophicfactor(GDNF)”分别和“neuralsurvival,neuraldifferentiation,neuralmigration,cellprogrammeddeath(apoptosis),RET,NCAM,mechanism”组合检索,并限定文章语言种类为English。资料选择:就检索到的700余篇文献进行筛选,以胶质细胞系源性神经营养因子及其信号通路在神经元发育中的生物学功能为主要内容的文献350多篇。其中研究内容与神经元存活,分化,迁移密切相关,以近5年且发表在较权威杂志者优先。资料提炼:最终选定105篇相关的文献,其中72篇检索到全文,而将其中观点相似的进行比较,以19篇近期发表的,叙述详尽的入选以进行综述。资料综合:胶质细胞系源性神经营养因子受体有GFRα和RET两类亚基,通过胶质细胞系源性神经营养因子/GFRα1信号传导通路能够促进神经元的存活、分化及正确迁移,除RET外神经系统内还存在新型的跨膜受体及复杂的胞内信号转导通路。结论:胶质细胞系源性神经营养因子对各种原因造成损伤后的神经细胞有保护和修复作用,在正常的神经元发育过程中也起到重要的作用。在神经系统发育中胶质细胞系源性神经营养因子存在多种相互关联的信号传导通路,能够促进发育中神经元的存活、分化及正确迁移。     

代谢型谷氨酸受体在基底神经节功能中的作用

代谢型谷氨酸受体 (m etabotropic glutamate receptors,m Glu Rs)是与 G蛋白耦联的受体 ,目前已克隆出 8种不同编码的基因 [1 - 5 ] 。根据它们氨基酸序列的同源性、信号转导的机制以及对激动剂的选择性 ,可将其分为 G- 、 G- 和 G- 三组。 G - 组包括 m Glu R1 和 m Glu R5 ;G - 组包括m Glu R2 和 m Glu R3;G- 组包括 m Glu R4、m Glu R6 、m Glu R7和 m Glu R8。目前研究表明 ,代谢型谷氨酸受体与神经突触传递的调控、突触发育的可塑性、长时程增强效应 (L TP)、长时程抑制效应 (L TD)、学习记忆、神经元退化和保护等…     

腰以下节段脊髓小脑束神经元侧支投射的研究

<正> 本研究采用新的荧光示踪剂——Rhodamine labe led latex microspheres、Fluoro-Gold 和 Fast Blue,来追踪猫腰以下各脊髓小脑束神经元群向小脑前、后叶的侧支投射及其向周围神经的侧支投射.用不同荧光示踪剂注入猫小脑前叶、旁     

应用溃变法对大鼠皮质脊髓束在脊髓内投射的研究

本研究为在单侧损毁大脑皮质的不同部位后,用铜银法、Fink-HeimerⅡ法和 Fink-HeimerⅡ后漂白复染法顺行追踪大鼠皮质脊髓束的投射。溃变纤维见于对侧脊髓后索的腹侧部和同侧脊髓前索的内侧部。位于后索的溃变纤维一直延伸到骶段,位于前索的仅限于颈段。溃变终末广布于脊髓的Ⅰ～Ⅶ层,并存在定位关系:来自运动区的纤维投射到脊髓的Ⅳ—Ⅶ层,来自体感区的纤维投射到脊髓的Ⅰ—Ⅴ层。对结果的讨论提示,动物皮质脊髓束的走行反映了某种种系进化关系;而该束在动物中枢神经系的运动和感觉机能调节中起重要作用。