血管性痴呆小鼠海马ERK2及p-ERK的表达特征

目的观察血管性痴呆（VD）小鼠海马中细胞外信号调节激酶（ERK2、p-ERK）的表达变化,探讨其在VD发病中的作用机制。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型,设立假手术组作为对照。术后第29、30天,经跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,用免疫组化方法观察各组小鼠海马CA1区ERK2及海马CA3区p-ERK的表达变化。结果VD模型小鼠学习、记忆成绩较假手术组显著下降（P〈0.05）;模型组小鼠海马CA1区ERK2的表达及海马CA3区p-ERK的表达较假手术组减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论海马神经元内ERK的表达减少可能参与了血管性痴呆的发病机制,因此应用能促进ERK表达的药物可能成为治疗VD的有效方法之一。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆模型小鼠海马神经元ERK表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)模型小鼠海马神经元中细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。将小鼠随机分为假手术组、模型组及盐酸多奈哌齐治疗组,药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。术后第29、30天,采用跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,采用免疫组化法观察各组小鼠海马神经元ERK表达的变化。结果盐酸多奈哌齐可明显改善VD模型小鼠学习、记忆成绩(P<0.05)。模型组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2表达及海马CA3区p-ERK表达较假手术组及治疗组减少(均P<0.05)。结论盐酸多奈哌齐通过增加乙酰胆碱含量,后者作用于毒蕈碱乙酰胆碱受体(M受体)激活ERK,从而有助于改善学习和记忆功能。海马神经元内ERK的表达减少可能参与了VD的发病机制。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马ERK1及ERK2表达变化的影响

目的:探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)小鼠海马中细胞外信号调节激酶(ERK1、ERK2)表达变化的影响。方法:采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型。将小鼠随机分为假手术组、模型组及药物组,药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗。术后第29、30天,经跳台试验和水迷宫试验对各组小鼠进行行为学成绩测试,用免疫组化方法观察各组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2的表达变化。结果:盐酸多奈哌齐明显改善了VD小鼠学习、记忆成绩(p<0.05)。模型组小鼠海马CA1区ERK1、ERK2表达较假手术组及治疗组减少,均有显著性差异(p<0.05)。结论:ERK1、ERK2的表达减少可能参与了血管性痴呆的发病机制,盐酸多奈哌齐通过增加乙酰胆碱含量,后者作用于毒蕈碱乙酰胆碱受体(M受体)激活ERK,有助于改善学习和记忆功能。     

血管性痴呆小鼠海马组织学改变及乙酰胆碱酯酶活性变化特征

目的:探讨血管性痴呆(VD)小鼠海马组织病理学改变及乙酰胆碱酯酶病理(AchE)活性的变化特征.方法:将50只小鼠随机分为假手术组和模型组。模型组采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注法制备VD模型,术后第29天和第30天测试学习记忆成绩,术后第30天检测海马CA1区组织学变化及AchE含量。结果:VD模型组小鼠学习记忆成绩较假手术组明显下降;海马CA1区锥体细胞数目减少,细胞核体积变小;且模型组小鼠海马AchE活性明显低于假手术组(P<0.01)。结论:小鼠海马组织内的AchE活性下降参与了VD的形成,进一步导致VD小鼠的学习和记忆障碍。     

血管性痴呆小鼠海马细胞外信号调节激酶免疫组化表达及其意义

目的探讨血管性痴呆小鼠海马CA1区锥体细胞细胞外信号调节激酶1（extracellular signal—regulated kinase 1，ERKI）的免疫组化表达及其意义。方法采用双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备血管性痴呆（VaD）小鼠模型，共设健康对照组、假手术组及VaD模型组，利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变，应用免疫组化技术观测其海马CA1区锥体细胞ERK1的表达变化，对小鼠学习成绩和记忆成绩与ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分进行相关性分析。结果VaD模型组小鼠学习、记忆成绩低于健康对照组和假手术组（P〈0．05）。VaD模型组小鼠ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分（13．38&#177;3．32）较健康对照组（21．21&#177;9．15）和假手术组（21．00&#177;7．21）明显减少（P〈0．01），而且各组小鼠海马ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分与小鼠学习、记忆的各项参数存在相关关系。结论VaD小鼠海马CA1区锥体细胞ERK1表达减少可能是VaD小鼠学习、记忆成绩下降的分子机制之一。     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的影响

目的观察盐酸多奈哌齐对脑缺血-再灌注后血管性痴呆小鼠不同时间点学习、记忆能力和海马CA1区病理变化的影响。方法雄性昆明小鼠250只,采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注的方法制备血管性痴呆(VD)模型,随机分为假手术组、模型组和多奈哌齐治疗组。应用Morris水迷宫实验、跳台实验进行行为学测试,HE染色观察海马病理表现及盐酸多奈哌齐对其的影响。结果术后4周时,模型组小鼠的学习、记忆成绩均明显劣于假手术组小鼠(P<0.05),病理改变较假手术组严重,这一变化持续至术后8周仍未恢复。盐酸多奈哌齐治疗组在术后4周和8周时,其学习、记忆能力和海马CA1区病理表现较模型组均有明显改善(P<0.05)。结论脑缺血-再灌注可导致小鼠海马CA1区神经元持续进行性损害,伴学习、记忆能力障碍;盐酸多奈哌齐对脑缺血-再灌注诱发的VD小鼠有一定治疗作用。     

血管性痴呆大鼠海马区核因子-κB、环氧合酶-2的表达变化

目的通过检测血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区核因子-κBp65(nuclear factor-κB p65,NF-κBp65)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,探讨NF-κB、COX-2对VD大鼠的损伤作用。方法28只大鼠随机分为两组,假手术(SOG)组(n=13)和模型(VD)组(n=15),采用HE染色,光镜下观察海马CA1区锥体细胞的改变,免疫组化方法检测海马CA1区NF-κBp65、COX-2蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组组海马CA1区锥体细胞损伤、丧失明显,NF-κBp65、COX-2蛋白表达高于假手术组,与假手术组相比有统计学意义(P(0.01)。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区NF-κBp65、COX-2蛋白的表达增加,NF-κBp65、COX-2蛋白的高表达可能是学习记忆障碍的原因之一。     

雌二醇对血管性痴呆大鼠海马CA1区GFAP表达的影响

目的研究17β-雌二醇对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区GFAP表达的影响,探讨雌激素对血管性痴呆大鼠中枢神经系统保护作用的机制。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备血管性痴呆动物模型,腹腔注射不同剂量17β-雌二醇60d后,应用Y迷宫检测各组VD大鼠认知功能以及免疫组化法等检测大鼠大脑海马CA1区GFAP表达的变化。结果腹腔注射17β-雌二醇60d后,大鼠认知功能显著改善;学习、记忆功能测试30次的正确次数较实验对照组明显增高(P<0.05),造模60d后的大鼠,其脑内CA1区GFAP免疫阳性细胞数较假手术组显著增高,而雌二醇组大鼠CA1区GFAP免疫阳性细胞数较实验对照组显著减少。结论雌激素补充疗法能选择性影响血管性痴呆大鼠脑内CA1区GFAP阳性细胞,并有可能影响学习和记忆能力。     

血管性痴呆小鼠海马突触后致密物95表达的研究

目的:探讨血管性痴呆(vascular dementia,VD)小鼠海马突触后致密物95(postsynaptic density95,PSD-95)表达的变化。方法:双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型,跳台试验观测其行为学改变,免疫组织化学方法观察海马齿状回PSD-95的表达。结果:模型组小鼠学习、记忆成绩下降(P<0.05),其海马齿状回(dentategyrus,DG)PSD-95免疫阳性产物较对照组明显减少(P<0.05)。结论:VD模型小鼠学习记忆能力下降可能与海马PSD-95的表达减少有关。     

血管性痴呆小鼠海马p38 MAPK mRNA表达特征的研究

目的 探讨血管性痴呆小鼠海马p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)mRNA的表达及其意义.方法 双侧颈总动脉线结反复缺血.再灌注法制备血管性痴呆小鼠模型,并设正常组、假手术组,利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,应用原位杂交技术观测其海马p38 MAPK mRNA的表达变化.结果 血管性痴呆模型组小鼠学习、记忆成绩较假手术明显降低(P＜0.05),其海马p38 MAPK mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩下降可能与其海马p38 MAPK mRNA表达水平增加有关.p38 MAPK mRNA的表达增加是血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩下降的分子学机制之一.     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马神经细胞神经元蛋白激酶C表达变化的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对血管性痴呆（Vascular dementia,VD）小鼠海马神经元蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）变化的影响。方法将3月龄雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐治疗组。采用双侧颈总动脉结扎,反复缺血-再灌注制备VD模型,药物治疗30d。术后第29、30天,分别进行跳台试验和水迷宫试验观察各组小鼠行为学改变。采用免疫组织化学法观察各组海马CA1区神经元PKC表达的变化。结果药物治疗组小鼠学习、记忆成绩较模型组明显改善（P〈0.05）。模型组PKC免疫反应阳性神经元平均光密度值为（0.2730±0.0709）,与假手术组（0.3206±0.0642）和药物组（0.3036±0.0688）相比均显著降低（P〈0.05）,而药物组与假手术组间无明显差别（P〉0.05）。结论反复缺血-再灌注导致VD小鼠海马神经元PKC表达减少;多奈哌齐通过抑制中枢神经系统中乙酰胆碱的降解,可增加VD小鼠海马神经元PKC表达,从而改善VD小鼠学习、记忆能力,推测此也是该药物改善VD小鼠学习、记忆障碍的一个重要环节。     

黄芩苷对海人酸致痫小鼠海马x染色体连锁凋亡抑制蛋白表达的影响

目的探讨黄芩苷对海人酸诱导的小鼠癫痫持续状态后海马组织x染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。方法将90只ICR雄性小鼠随机分为对照组、癫痫持续状态（sE）组、黄芩苷治疗组,每组30只;采用侧脑室注入海人酸建立小鼠癫痫持续状态模型。通过苏木素一伊红（HE）染色观察黄芩苷对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的形态学改变;应用免疫组化和Westernblot方法检测小鼠海马组织中XIAP的表达量。结果黄芩苷明显改善sE后小鼠海马组织的病理形态学,海马CA3区XIAP在sE后6h起逐渐增加,12h达高峰,24h有所下降;与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。黄芩苷治疗组海马XIAP蛋白表达在6h、12h和24h均高于sE组（P〈0．05）。结论黄芩苷对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的保护作用,可能与其促进XIAP的表达有关。     

尼莫地平对杏仁核点燃鼠模型脑内谷氨酸及P-糖蛋白表达的影响

目的：观察尼莫地平对杏仁核癫痫点燃鼠模型脑内谷氨酸（Glu）及P-糖蛋白（P-gP）表达的影响。方法：选择健康雄性Wistar大鼠30只制作癫痫模型,造模成功后随机分为未点燃正常组、癫痫模型组和尼莫地平组。1周后分别取鼠脑组织,采用免疫组化检测大鼠脑内Glu和P-gp表达,比较各组表达的变化。结果：①癫痫模型组中杏仁核、海马和颞叶P-gp阳性细胞计数（分别为14．05±10．95、10．05±8．23和7．64±5．89）较未点燃正常组（4．32±6．69、3．96±3．04和2．15±1．40）和尼莫地平组（6．88±9．18、4．48±6．50和2．68±1．37）明显增多（P〈0．05）;尼莫地乎组P-gp阳性细胞数与未点燃正常组比差异无统计学意义。②癫痫模型组中杏仁核、海马和颞叶Glu的平均透光率（％）（分别为18．51±3．19、19．21±2．56和20．50±2．84）与未点燃正常组（23．03±7．29、24．88±5．55和26．11±7．17）Lh有明显降低（P〈0．05）,而尼莫地平组（19．60±4．84、20．71±6．04和21．44±5．52）与癫痫模型组比差异无统计学意义（P〉0．05）。③Glu和P．gp的表达均以杏仁核最强,其次为海马和颞叶,特别是在癫痫模型组中。结论：①尼莫地平在杏仁核电刺激点燃模型中可明显抑制杏仁核、海马、颞叶的P-gp表达,但不能抑制Glu的表达;②Glu和P-gp在杏仁核、海马和颞叶中的表达程度不同,以杏仁核表达最强。     

ERK1／2在左旋多巴诱导的异动症发生机制中的作用

目的研究细胞外调节激酶（ERK1／2）在左旋多巴诱导的异动症（LID）发生机制中的作用。方法将SD大鼠分为5组：正常对照组、帕金森病（PD）组、LID组、LID＋SCH23390组和非LID组，分别观察各组行为学变化，并用免疫组化方法测定大鼠纹状体区ERK1／2及其活化形式p—ERK1／2表达水平。结果多巴胺D1受体阻断剂SCH23390可以减轻LID大鼠行为学异常；LID组和非LID组ERK1／2的表达无显著性差异，而LID组p-ERK1／2的表达较非LID组和PD组明显增加，SCH23390使其表达下降。结论ERKI／2是LID大鼠纹状体内直接输出通路上的重要信号分子，其活化参与了异动症的发生。     

低频重复经颅磁刺激的抗作用及其对癫大鼠海马CA3区膜连蛋白A7表达的影响

目的:观察低频重复经颅磁刺激(rTMS)对大鼠性发作行为及海马CA3区膜连蛋白A7表达的影响。方法:取85只健康雄性SD大鼠,按预处理方式将其分成rTMS组(rTMS刺激+毛果芸香碱致)、对照组(假刺激+毛果芸香碱致)及生理盐水对照组(假刺激+生理盐水)。各组大鼠经相应处理后,rTMS组和对照组(各n=30)大鼠制作氯化锂-毛果芸香碱癫持续状态(SE)模型;生理盐水对照组(n=25)则腹腔注射生理盐水。观察各组大鼠行为表现及SE潜伏期,应用免疫组化法观察膜连蛋白A7表达的动态变化(6 h、24 h、1周、3周、6周)。结果:①rTMS组SE潜伏期为(41.37±5.45)min,与对照组(23.86±4.42)min比较明显延长(P<0.01);②海马CA3区膜连蛋白A7阳性细胞数在各时间点均为对照组最多,rTMS组次之,生理盐水对照组最少(均P<0.05)。但是膜连蛋白A7的表达随时间变化的趋势rTMS组与对照组明显不同。结论:低频rTMS有一定抗作用;低频rTMS可影响大鼠海马CA3区膜连蛋白A7表达并呈现独特的动态变化特点。     

巴豆生物碱通过ERK1/2通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响

目的 探讨巴豆生物碱(Croton alkaloids,CA)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2)通路对脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤及自噬的影响。方法 50只大鼠建立大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,造模成功大鼠(48只),并随机分为模型组(12只)、CA低剂量组(12只)、CA中剂量组(12只)和CA高剂量组(12只),其余10只为对照组; CA低、中和高剂量组分别注射0.6、1.2、2.4 mg/kg的CA注射液,连续注射7 d; 对照组及模型组给予等量生理盐水注射; 应用神经功能评分法评定大鼠神经功能缺损和改善情况; 苏木精-伊红染色法(Hematoxylin eosin staining,HE)检测大鼠脑组织海马神经元的形态及数量; 原位末端转移酶标记法(Terminal uridine nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡; 实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马ERK1/2、哺乳动物同源蛋白(Mammalian homologous protein,Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,CA低、中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA低剂量组比较,CA中、高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05); 与CA中剂量组比较,CA高剂量组神经功能评分、p-ERK1/2蛋白表达水平提高,神经细胞凋亡率、Beclin-1,LC3-Ⅱ mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 CA可降低MCAO大鼠神经细胞凋亡率,在一定程度上修复MCAO大鼠神经功能,发挥神经保护作用,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。