6-硫代鸟嘌呤对鼠纤维肉瘤的辐射增敏作用

为探索6-硫代鸟嘌呤(6-TG)在体内较易达到的浓度时能否增加肿瘤抑制率,作者利用甲基胆蒽诱导BALB/c(H-2_d)雄鼠产生的纤维肉瘤(Meth-A瘤)及辐射诱导C3H/He雄性小鼠的纤维肉瘤(RIF瘤)来研究6-TG的辐射增敏作用.用PBS(磷酸缓冲液)洗涤从供体小鼠腹水中获得的单细胞悬液,离心,重悬浮,10~6个细胞予以鼠股部肌肉转种.当肿瘤平均直径达8mm即可实验,随后每周二次测量其大小,实验后90天肿瘤未被触及者视为局部肿瘤抑制.将6-TG悬于PBS液,并配成3mg/ml腹腔注射,对照组给予PBS液.     

烟酰胺和苯酰胺类似物对肿瘤放射增敏作用的结构-活性关系

此项研究合成29个烟酰胺和苯酰胺的类似物,并试验他们对小鼠肿瘤的放射增敏作用以及对小鼠的毒性.药物溶于生理盐水,剂量为2mmol/kg,腹腔给药前配制.用标准方法测定敏化作用能力.实验用三个月的BALB/C雌鼠,于其背部骶骨区植入EMT6瘤2×10~5细胞,当瘤重100～300mg时进行治疗.小鼠全身照射X射线20Gy,照后24小时摘除     

V.硝基咪唑和其它硝基咪唑化合物的细胞毒性和化学增敏的机制

这一章包括的论文着重报道以下三个问题:<1>硝基咪唑(Miso)对乏氧细胞的优先毒性。<2>用Miso 预先处理乏氧细胞可使其在离体对化疗药物的敏感性增高(“预先孵育效应”)。<3>Miso 可使整体内的肿瘤细胞对化疗药物增敏。一、对乏氧细胞的毒性细胞存活曲线的形状:Miso〔1-(2-硝基咪唑-1-Yp)-3-甲氧基丙烷-2-01〕对乏氧细胞的优先细胞毒性首先被Hall 和Roijin-Towle 以及Moore 等人报道,Miso 对有氧细胞也有毒性,但需作用较长时间,或者相同作用时间但药物浓度增加15～50倍。学者们观察到Miso 有相同的细胞存活曲线:在5mM Miso 不同时间作用下乏氧细胞的存活曲     

利用CRISPR/Cas9系统构建Slc35c1敲除细胞株及其抗蓖麻毒素效应研究

目的 构建稳定敲除小鼠Slc35c1基因的单克隆细胞株,为研究Slc35c1基因抗蓖麻毒素毒性效应奠定实验基础.方法 根据Slc35c1基因序列设计2对sgRNA插入载体lentiCRISPRv2中,构建lentiCRISPRv2-sgRNA质粒;慢病毒包装并感染NIH/3T3细胞,加入嘌呤霉素筛选阳性细胞;T7E1酶切鉴定sgRNA切割效率;利用有限稀释法筛选单克隆细胞并进行RT-qPCR检测及基因组PCR产物测序,确认Slc35c1敲除成功的细胞株;最后通过CCK-8试剂检测蓖麻毒素对野生型和Slc35c1敲除细胞对的抗毒效应差异.结果 测序结果显示sgRNA成功插入载体质粒中,T7E1酶切结果表明两对sgRNA均可高效切割基因组DNA.RT-qPCR及基因组PCR产物测序鉴定出Slc35c1敲除的纯合子细胞株.CCK-8实验结果显示,与野生型细胞相比,敲除Slc35c1使毒素作用NIH/3T3细胞24 h的IC50值由0.45×10-10 mol/L升至2.1×10-10 mol/L.结论 利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除了NIH/3T3细胞中的Slc35c1基因并筛选获得纯合子细胞株,该细胞株可用于抗蓖麻毒素效应的研究.     

三氧化二砷对鼻咽癌BALB/c小鼠移植瘤的放射增敏作用

目的通过动物移植瘤模型探讨三氧化二砷对鼻咽癌的放射增敏作用。方法将荷SCNE-1鼻咽癌的BALB／c小鼠随机分为对照组和综合组，对照组给予单纯放射治疗，不给予药物处理，下设空白对照、2、4和6Gy4个不同的放射剂量亚组；综合组所有动物均行药物治疗，下设药物对照组(单纯用药，不照射)、2、4和6Gy4个不同的放射剂量亚组，综合组于肿瘤成活后连续6d经腹腔注射三氧化二砷，药物剂量为4mg/kg鼠重；第7天移植瘤局部给予140kV深部x射线一次性照射。每组(或亚组)各4只小鼠。结果对照组中2、4和6Gy亚组移植瘤体积达到照射前4倍的时间(TCT4)较空白对照组分别延长了1．7、7．8和11．8d；综合组移植瘤TCT4较药物对照组分别延迟了2．2、13．2和24．2d。生长延迟4、8和10d时的肿瘤生长延迟增敏比分别为1．55、1．71和1．77。结论三氧化二砷在BALB／c小鼠体内对鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用。     

N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠的制备、乏氧增敏与体内分布研究

目的：在硝基吲唑母核上引入酪氨酸并成盐,制备N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠并考察其乏氧增敏活性和体内分布情况。方法用缩合剂法合成N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠,通过小鼠移植瘤模型评价其乏氧增敏活性,通过放射性碘标记法考察其在荷瘤小鼠体内的分布情况。结果合成了目标化合物并对结构进行了确证。移植瘤模型增敏实验表明其对H22移植瘤具有一定的乏氧增敏活性,平均放射增敏比为1．5。体内分布实验中其在肿瘤部位与脑和肌肉部位的分布比值均大于5,表明其具有较好的体内分布特性。结论 N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠具有良好的乏氧增敏活性和体内分布特性,具有进一步开发价值。     

乏氧细胞辐射增敏剂KU-2285的研究

KU-2285是N~1取代基为CH_2CF_2CONHCH_2CH_2OH的2-硝基咪唑衍生物,目前被认为是最有希望的乏氧细胞辐射增敏剂.研究通过与无-CF_2取代基的etanidazole比较,观察KU-2285体内辐射增敏效应和急性毒性反应,以估计其临床实用性.实验采用8～9周龄雌性C3H/He小鼠,接种SCCⅦ肿瘤或移植乳癌,照射采用10MVX射线,剂量率为5.6Gy/分.KU-2285和etanidazole在辛醇/水分配系数分别为0.250和0.040,还原电势〔E_(1/2)〕各为-0.96V和-1.05V.     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0-Ag骨髓瘤细胞融和,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。经多次传代,结果稳定。接种Balb/c小鼠腹腔后,腹水均为抗前S(2)阳性,效阶达8万。免疫球蛋白为鼠IgG1型。用其初步纯化的IgG酶标记物,以双抗体夹心法检测了乙肝病人血清中前S(2)蛋白,结果较满意,认为可在临床上推广使用。     

静注辐射增敏剂并全身辐照对骨髓的毒性

人骨髓内乏氧细胞群落的存在有可能使辐射增敏剂增加放射治疗对骨髓造血系统的毒性.为验证这一点,本文研究了辐射增敏剂对低剂量全身辐照的相加效应.实验用7.0～19.5公斤的小猎兔狗.在辐照前30分钟,3只狗静脉注射SR-2508(1g/kg),3只狗静脉注射Miso(0.35g/kg),然后均给以2.0Gy的~(60)Coγ射线全身辐照(剂量率为0.1Gy/min).两个对照组仅分别给以2.0Gy和3.0Gy的全身辐照(剂量率为0.1Gy/min).辐照后一直到骨髓功能完全恢复,所有的狗都给以抗生素,以防感染.在辐照前和辐照后的一定时期进行白细胞和血小板计数.     

~(99)Tc~m-annexinV细胞凋亡显像

目的 :用 99Tcm 标记的人体内蛋白 annexin V进行凋亡细胞的体外检测和体内显像。方法 :1Jurkat T原始淋巴细胞采用无血清培养基培养0～ 4天 ( n=10 )、阿霉素 0～ 2 0 0 ng/ml孵育 48小时 ( n=10 )和 CHll Fas抗体 0～ 2 5 ng/ml孵育 2 4小时 ( n=8)等方法处理 (诱导细胞凋亡 ) ,用 6 0℃加热 10和 30分钟 ( n=4) (引起细胞坏死 ) ;Balb/c小鼠 ( n=3)腹膜内注射地塞米松 10 mg/kg(诱导胸腺细胞凋亡 ) ,8小时后处死并制备胸腺单细胞悬液。在各组细胞 ( 10 6 个 )中分别加入 99Tcm-肼基烟酰胺( HYNIC) - annexin V 370～ 740 k Bq( 10…     

辐射防护药降低骨髓氧分压

本研究利用氚标记辐射增敏剂Miso与骨髓细胞结合数和其氧分压成反比的特性,来测定几种防护药引起骨髓氧分压下降的程度.方法:将6～12周C57/Bl 10J雌性小鼠,处死后用冰冷的含10%胎牛血清的F_(12)营养液冲出骨髓细胞,先后将2×10~6个/ml×1ml细胞和~3H-Miso置于培养皿中,将其放入带通气管并抽空的铝室内,通入含氧0.01～18%的空气,当达到所需氧浓度后,把铝室放在37℃水浴震动器上2～4小时.用氧极普电极在特制的抽样室内进行检测.最后,打开铝室,测定~3H-Miso与酸性沉淀细胞部分的结合量.     

安吖啶的抗癌效价

体外实验中观察了本院合成的安吖啶对3株肿瘤细胞的抗癌作用.结果表明,安吖啶对L_(1210)细胞及2株人肿瘤细胞HEP及HCE均具有较强的抗癌效果.对L_(1210)细胞的杀伤效果最强,杀死1或2个log(即杀死90%和99%)瘤细胞的浓度依次为0.08及0.25μg/ml,对HCE和HEP细胞杀死1个log细胞的浓度分别为0.98及1.25μg/ml.体内实验证明本药对小鼠实体瘤S_(180)及腹水瘤L_(1210)均具有较好疗效.1～3mg/kg每天腹腔注射1次连续6天,可使荷腹水型L_(1210)瘤小鼠的活存时间较对照组延长193～214%,对S_(180)实体瘤生长的抑制率可达47～85%.与美国国立肿瘤研究所赠送的标准品NSC-249992作了比较,证明二者的抗癌效价相似.     

β-榄香烯对人肺腺癌裸鼠移植瘤照射增敏机制的研究

目的 通过人肺腺癌A549细胞株裸鼠移植瘤模型,研究β-榄香烯对移植瘤的照射增敏效应,寻找最佳增敏剂量,并探讨照射增敏机制是否与抑制survivin表达有关。方法 采用细胞悬液接种法建立裸鼠移植瘤模型;将达到0.8～1.0 cm³瘤体积的裸鼠随机分为空白对照组、药物组(25、45和100 mg/kg)和药物+照射组,每组5只。治疗后瘤体积倍增时观测结束,获得各组的生长曲线。计算2、4、6和8 d各药物组的平均抑瘤率并对体积变化进行比较。通过计算增敏系数,获得最佳增敏剂量。采用增敏剂量的β-榄香烯,应用免疫组织化学染色检测各组survivin的表达。结果 成功建立裸鼠移植瘤模型,根据体积变化获得各组的生长曲线。在2～8 d之间,25、45和100 mg/kg组的平均抑瘤率变化趋势与体积变化规律相一致,β-榄香烯的抗肿瘤作用具有剂量依赖性。EF值分别为0.84(25 mg/kg)、1.24(45 mg/kg)、2.04(100 mg/kg),最佳增敏剂量为45 mg/kg。药物组对survivin表达影响不大,照射组survivin表达明显增强,联合组survivin表达明显减弱。结论 β-榄香烯有明确的放疗增敏作用,可能通过抑制survivin的表达,达到放疗增敏的作用。     

Misonidazole(MISO)与马来酸二乙酯(DEM)合并用药对小鼠乳腺瘤的放射增敏作用

非蛋白巯基(NPSH)的抑制剂马来酸二乙酯(DEM)与放射增敏剂MISO合并用药对C3H/He小鼠乳瘤的辐射增敏作用超过单独用MISO的任何剂量,并且二者的差别在小剂量MISO时特别显著。合并给MISO 100mg/kg,DEM 760mg/kg,增敏率为2.06;而单独给MISO 100mg/kg时,增敏率ER为1.44。肿瘤细胞内NPSH的含量影响细胞的增敏。肿瘤细胞内NPSH不受MISO的影响,而DEM显著降低肿瘤的NPSH含量,因此提出肿瘤细胞内的NPSH与亲电性放射增放剂之间存在着竞争。将C3H/He小鼠的自发瘤取出捣碎作成悬液,皮     

粉防己碱对放射线的增敏作用与机理研究

目的探讨粉防己碱(Tet)在结肠癌中对X射线的增敏作用及机理。方法采用克隆形成测定法、流式细胞术、Western Blotting与分裂指数法检测Tet在体外对X射线的增敏作用与机理。使用肿瘤生长延缓实验检测Tet在体内对X射线的增敏作用。结果结肠癌HT-29细胞在受到X射线照射后，明显阻滞于G2／M期；Tet可以清除这种阻滞，并起到显著的增敏作用，其增敏比为1．63。进一步研究显示，HT-29细胞在受到x射线照射后，其chkl蛋白表达水平升高，Cyclin Bl表达水平明显降低，分裂指数也明显降低；在用Tet处理后，chkl蛋白表达水平降低，Cyclin Bl的表达水平明显增高，分裂指数也增高。体内实验结果表明，Tet明显引起受照射小鼠结肠癌C26生长延缓。Tet与X射线联合使用组的肿瘤生长延缓天数是单用X射线组的1．63倍，对照组的2．82倍。结论Tet是一种细胞周期关卡清除剂．体外和体内对X射线都有明显的增敏作用．     

新型稀土纳米双模态显像剂合成及其对胰腺癌放疗增敏体外实验研究

目的探讨NaHoF₄@CeO₂纳米颗粒(nanoparticles,NPs)CT、MRI双模态显像的可行性及其对胰腺癌细胞(Panc-1)的体外放疗增敏效果。方法合成并表征NaHoF₄@CeO₂纳米颗粒,并测定其粒径大小及主要元素物质含量。分别用MTT及动物实验测定NPs在体内外的毒性作用,CT及MRI成像仪评估NPs体外CT及MRI成像效果,MTT及细胞克隆实验验证单纯NPs组,单纯放疗(radiation therapy,RI)组及RI+NPs组对Panc-1放疗增敏效果。结果成功制备出粒径大小均匀、化学成分稳定的纳米复合材料NaHoF₄@CeO₂。NPs在体外无明显的细胞毒性作用,体外实验表明NPs具有良好的CT及MRI双模态成像作用。此外,体外放疗MTT实验及细胞克隆实验表明该材料对胰腺癌细胞有放疗增敏效果。结论NaHoF₄@CeO₂ NPs可同时进行CT、MRI双模态显像,通过体外细胞学实验表明,该纳米粒子具有对Panc-1细胞放疗增敏效果。     

Etanidazole(SR-2508)和Pimonidazole(Ro03~-8799)合并用药对人肿瘤异种移植的辐射增敏作用

目前两个第二代增敏剂对人都有着不同剂量限制的毒性,SR-2508引起外周神经毒,而Ro03-8799产生急性中枢神经毒,实验观察了两种增敏剂单独及合并用药的增敏作用.HRT18瘤取自人直肠腺癌,Na11+取自人黑色素瘤,3×10~6细胞分别注射于8～12周雌性裸鼠两侧腹部.为增加肿瘤接种率,实验前5Gy~(137)Csγ射线全身照射,剂量率2.88Gy/min,Na11+瘤直径9～10mm,HRT18瘤直径7～9mm,SR-2508和Ro03-8799溶于Dulbecco's磷酸缓冲液(PBS),眼眶静脉窦注射,对照组注射PBS.照后立即杀死     

N-甲基卟啉辐射增敏效应的实验研究

N 甲基卟啉 (N CH3PPH2 )是上世纪 90年代的新产品 ,在理论上具有抗癌作用强及副作用小的特点 ,笔者通过第 2代血卟啉衍生物 (YHPD)与N 甲基卟啉对食管鳞癌上皮细胞系(Ec 10 9)辐射增敏作用的比较 ,探讨了N 甲基卟啉的辐射增敏作用。一、材料和方法1 试剂与分组 :(1)试剂 :YHPD :C =1 34mg ml、N 甲基卟啉 :C =2 18mg ml由吉林大学化学系提供。Ec 10 9购自中国科学院细胞所细胞库。 (2 )分组 :实验分 3组 :①单纯放疗 (A组 ) ;②放疗十YHPD(B组 ) ;③放疗 +N -甲基卟啉 (C组 )。每组中根据所给剂量不同又分为 5组 ,吸收剂量分…     

CMX001抗单纯疱疹病毒初步药效学研究

目的 观察西多福韦磷脂衍生物CMX001在体内外实验模型中的抗疱疹病毒药效.方法 利用中性红染色法测定CMX001在Vero细胞培养条件下对单纯疱疹病毒(HSV)-1和HSV-2的抗病毒作用;在BALB/c小鼠阴道疱疹病毒感染模型中观察ACV乳膏和CMX001凝胶制剂在体内对HSV-2感染的治疗效果.结果 CMX001在Vero细胞上对HSV-1和HSV-2的半数抑制浓度(IC50)的平均值分别为0.073和0.070 μmol/L;在体内实验当中,CMX001凝胶制剂对小鼠阴道HSV-2感染疗效较好,优于阳性对照组(阿昔洛韦乳膏).结论 CMX001在体内外均对HSV有较强的抑制作用.     

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 研究小鼠节律基因Period2（Per2）对小鼠乳腺癌细胞（EMT6）的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3．1（＋）-Per2转导入EMT6细胞内，同时设立转染空质粒pcDNA3．1（＋）入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达；采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用；通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖，诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期，并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。