趋化因子CCL2对小鼠血小板活化影响研究

目的探讨趋化因子CCL2对小鼠血小板聚集、颗粒分泌及信号通路分子的影响。方法选取8～10周龄野生型C57雄性小鼠和CCL2~(-/-)雄性小鼠各10只为研究对象。经不同浓度二磷酸腺苷(ADP)及胶原刺激后,采用光比浊法检测小鼠血小板聚集率的差异;酶联免疫吸附法检测小鼠血小板颗粒分泌的白细胞分化抗原40配体(CD40L)及血小板第四因子(PF4)的差异;采用Western Blot检测ADP刺激后小鼠血小板内P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和热休克蛋白27(HSP27)表达。结果不同浓度ADP及胶原体外刺激后,CCL2~(-/-)组小鼠血小板聚集率、CD40L及PF4均显著低于野生型C57组小鼠,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。经ADP刺激的野生型C57组小鼠P38MAPK(T180/Y182)、HSP27(S78/S82)的磷酸化表达水平较刺激前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经ADP体外刺激的CCL2~(-/-)组小鼠血小板内P38MAPK(T180/Y182)、HSP27(S78/S82)的磷酸化表达明显低于野生型C57组小鼠,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论趋化因子CCL2可以作为一种崭新的调控因子参与小鼠血小板聚集、颗粒分泌及信号通路分子P38MAPK(T180/Y182)、HSP27(S78/S82)的活化。     

ALK3基因在心肌细胞凋亡中的作用研究

目的 研究心脏特异性骨形态形成蛋白受体IA(BMPR1 A,又名ALK3)基因敲除小鼠心肌组织中的细胞凋亡情况,探讨ALK3基因在心肌细胞凋亡过程中的作用及细胞凋亡与室间隔缺损的关系. 方法 实验分为纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-),杂合子小鼠(α-MHCCre+/-,ALK3 F/+)和野生型小鼠(C57)3组,每组取5只.20只雌性α-MHCCre+/-,ALK3+/-小鼠和20只雄性ALK3 F/F小鼠交配获得心脏特异性ALK3基因敲除的纯合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-)和杂合子小鼠(α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+);雌性和雄性C57小鼠各10只交配获得子代野生型小鼠;均取13.5d胚胎.提取胎膜DNA,PCR鉴定基因型.光镜下HE染色显示心脏组织形态,透射电镜观察心肌细胞的超微结构和凋亡情况,并以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率. 结果 光镜显示α-MHC Cre+/-,ALKS F/-小鼠存在室问隔缺损现象,α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠心脏形态正常;透射电镜和TUNEL提示α-MHC Cre+/-,ALK3 F/-小鼠心肌细胞凋亡现象较α-MHC Cre+/-,ALK3 F/+小鼠和C57小鼠严重. 结论 ALK3基因在调控心脏发育和心肌细胞凋亡过程中起重要作用.心脏特异性ALK3基因敲除小鼠中,室间隔缺损可部分归因于心肌细胞的过度凋亡.     

ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成特点及磁共振成像的实验研究

目的 建立载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠颈动脉粥样硬化模型,并应用7.0T MRI对动脉粥样硬化斑块进行评价.方法 通过高脂饲养以及在左侧颈总动脉外置套管的方法 建立实验组ApoE-/-小鼠和对照组野生型C57小鼠颈动脉粥样硬化模型(n=6),8周后对2组小鼠行MR扫描.扫描完成后取血测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL),并取损伤侧颈动脉行HE染色观察病理学变化,并对有斑块形成的血管行Oil Red O染色观察斑块内脂质成分的分布.结果 实验组小鼠在建模8周后MRI表现为损伤侧血管壁信号增高、管腔不规则狭窄,相应的组织病理学检查显示损伤侧动脉管腔狭窄,其内可见粥样斑块形成;而对照组小鼠在建模8周后MRI表现仅见2例血管壁信号增高、管腔狭窄,相应的组织病理学检查显示损伤侧动脉管壁增厚,未见粥样斑块形成.实验组小鼠血清TC和LDL值明显升高(t值分别为9.99和9.12,P值均＜0.01),TG和HDL值无明显变化(t值分别为-1.71和-1.05,P值＞0.05).结论 高脂饲养结合颈总动脉外置套管的方法 可以快速建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,应用7.0T MRI可成功对动脉粥样硬化斑块进行评价.     

X射线胸部照射对小鼠精子发生的影响

目的:探讨X射线胸部照射对雄性成年小鼠精子发生的影响。方法:将24只健康雄性成年C57BL/6小鼠(6~8周龄)按照随机数表法分为X射线照射组(Radiation)和假照射组(Sham),每组12只。胸部照射面积为1.5 cm × 2 cm,剂量率3.04 Gy/min,8 Gy/d,连续照射3 d,总剂量24 Gy,...     

不同剂量137Cs γ射线照射对小鼠造血系统的影响

目的 探讨不同剂量γ射线照射对不同品系小鼠造血功能的影响。 方法 用137Cs γ射线分别对IRM-2、ICR、615品系小鼠进行一次性全身4.0 Gy γ射线照射,在照后不同时间检测小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞（BMNC）的变化。对IRM-2小鼠、C57BL/6小鼠进行6.0 Gy γ射线照射,照后第45日,检测小鼠外周血象的变化。 结果 IRM-2、ICR、615品系小鼠经4.0 Gy照射后第2日,白细胞和BMNC数量降至最低值。第9日,IRM-2小鼠的BMNC计数与ICR、615小鼠相比,差异有统计学意义（t=3.725,P＜0.01;t＝8.487,P＜0.001）。第12日,IRM-2小鼠白细胞计数与ICR、615小鼠相比,差异有统计学意义（t=4.811和4.302,P均＜0.001）。第21日,IRM-2、ICR、615小鼠白细胞计数分别恢复到正常值的52.0%、60.7%、50.8%;BMNC计数分别恢复到正常值的90.8%、82.1%、75.4%。IRM-2、C57BL/6小鼠经6.0 Gy γ射线照射后第45日,IRM-2小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白（Hgb）、红细胞压积（Hct）计数均明显高于C57BL/6小鼠（t=5.629、7.788、4.929和6.064,P均 < 0.001）;IRM-2小鼠白细胞、红细胞、Hgb、Hct数量分别恢复至正常值的75.00%、98.95%、98.78%、97.55%;C57BL/6小鼠白细胞、红细胞、Hgb、Hct数量分别恢复至正常值的40.60%、93.88%、93.31%、93.84%。 结论 IRM-2、ICR、615、C57BL/6小鼠受照后造血功能的恢复趋势相同,但IRM-2小鼠在辐射损伤后其造血功能的恢复较快于ICR、615、C57BL/6小鼠。     

Mxi1基因敲除小鼠遗传背景的转换研究

目的 对FVB/N品系Mxi1基因敲除(knock out,KO)(Mxi1-/-)小鼠进行遗传背景转换,为研究疾病发病机制提供更多种类的基因修饰小鼠.方法 将FVB/N品系杂合子小鼠(Mxi1+/-)与异性C57BL/6品系野生型(wild type,WT)小鼠(Mxi1+/+)杂交,获得杂合子F1代后将其与C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交,再选择F2杂合子与C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交,依此再回交8次后,子代互交.利用鼠尾DNA进行基因型鉴定及微卫星DNA(msDNA)检测,组织信使RNA(mRNA)和组织蛋白检测背景转换效率.结果 基因型鉴定为Mxi1-/-的互交子代小鼠msDNA检测结果与WT型C57BL/6小鼠一致,与FVB/N小鼠不同.PCR和Western印迹结果显示,随机选取的任意自交子代纯合子小鼠体内不表达Mxi1的mRNA和蛋白质,成功获得C57BL/6品系Mxi1-/-小鼠.结论 通过杂交-回交的方式成功获得的新品系Mxi1-/-小鼠能稳定地将突变基因传递给子代.这一成果为疾病动物模型的建立提供了更多的选择.     

NF-κB及MMP-9在1型糖尿病模型INS2AKITA小鼠颈动脉中的表达及意义

目的 探讨细胞核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在1型糖尿病模型INS2AKTTA小鼠颈动脉中的表达及意义.方法 取INS2AKTTA雄性小鼠和同窝出生的野生型C57BL/6雄性小鼠各10只,分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组.在两组小鼠第16周龄时麻醉处死,处死前检测空腹血糖、测量体重.处...     

基于代谢组学分析Opg基因敲除小鼠骨骼肌萎缩的初步机制

目的 基于代谢组学分析O p g基因敲除导致小鼠骨骼肌萎缩的初步机制。方法 3月龄雄性野生型C57BL/6小鼠和Opg基因敲除小鼠各5只,分别设为野生型组与基因敲除组,取左侧股骨和腓肠肌,采用显微CT扫描评价骨微结构,HE染色观察腓肠肌形态学变化,免疫荧光染色检测腓肠肌中亚精胺含量。另取3月龄雄性野生型小鼠、18月龄雄性野生型小鼠和3月龄雄性Opg敲除小鼠各10只,分别设为年轻野生型(WT-Y)组、老年野生型(WT-O)组和年轻基因敲除(OPG-Y)组,取腓肠肌进行代谢组学分析。结果 与野生型组比较,基因敲除组小鼠骨小梁数目减少,骨密度降低,皮质骨结构破坏,腓肠肌重量降低,腓肠肌纤维横截面积减小(P<0.05)。代谢组学分析发现,与WT-Y组比较,WT-O组小鼠中参与葡萄糖代谢、磷脂代谢和氨基酸代谢等通路的葡萄糖-1-磷酸、D-葡萄糖-1,6-二磷酸、多种氨基酸、胆碱、肉碱等代谢物含量明显上调,而γ-氨基丁酸、亚精胺、泛酸等代谢物含量明显下调。与WT-Y组比较,OPG-Y组小鼠中胆碱、β-甘油磷酸、壬二酸等代谢物含量明显上调,而亚精胺、泛酸、N6,N6,N6-三甲基-亮氨酸等代谢...     

动脉粥样硬化斑块MRI和近红外分子影像的实验研究

目的 探讨7.0 T MRI和近红外荧光成像(NIRF)检测动脉粥样硬化(AS)斑块的可行性.方法 对14周龄ApoE-/-小鼠按高脂饮食喂养20周,建立AS模型,以正常C57BL/6小鼠作为对照.MRI实验中,5只ApoE-/-小鼠及5只C57小鼠经尾静脉注入超微超顺磁性氧化铁颗粒(USPIO)前及36 h后分别行7.0 T MRI.NIRF实验中,10只ApoE-/-小鼠和4只C57小鼠经尾静脉注入抗氧化修饰的低密度脂蛋白(oxLDL)抗体-NIR 797(抗-oxLDL-抗体-NIR 797)近红外探针,4只ApoE-/-小鼠经尾静脉注入非特异性IgG-NIR 797,另4只ApoE-/-小鼠注入PBS,24h后分别行NIRF.用SPSS17.0软件对计量数据行独立样本t检验和单因素方差分析.结果 ApoE-/-小鼠注入USPIO 36 h后,在T2WI上腹主动脉斑块信号较注射前减低,相对信号强度分别为0.70±0.04和1.28±0.06,差异有统计学意义(t =3.376,P＜O.05),信号改变率达(-56.58±4.25)％;普鲁士蓝染色证实斑块内有铁沉积.注入抗-oxLDL-抗体-NIR 797 24 h后,ApoE-/-小鼠主动脉离体NIRF示强荧光信号(SNR为42.51 ±5.24)聚集于主动脉根、主动脉弓及降主动脉起始段,而非特异性IgG-NIR 797组(19.58±3.06)、PBS组(4.19±0.82)及对照C57小鼠(2.29±1.11)仅见较弱荧光信号,与靶向探针组比较差异有统计学意义(F =25.104,P＜0.05).斑块油红O染色与NIRF阳性面积分别为(41.69 ±5.29)％和(39.45±5.35)％,两者呈线性相关(r=0.738,P＜0.05,n=8),免疫荧光证实斑块内oxLDL的表达与巨噬细胞共区域.结论 应用新型分子影像探针在7.0 T MRI和NIRF上可有效检测AS斑块,有助于鉴别高危斑块,可为AS多模式成像提供依据.     

异丙酚对脑缺血再灌注迟发性神经元损伤的保护作用

1材料与方法1·1动物模型与分组健康雄性Wistar大鼠57只,体重250~300g,随机分为3组:假手术组(A组,n=15)、缺血再灌注组(B组,n=21)、异丙酚预处理组(C组,n=21)。其中B、C组按缺血后再灌注时间随机分为3个亚组:12、48、72h,每亚组7只。A组仅暴露双侧翼小孔和双侧颈总动脉,不行阻闭。B组和C组采用Pulsinelli-Brierley的方法建立急性全脑缺血再灌注模型,C组在椎动脉闭塞22h时经尾静脉注入异丙酚50mg/kg后,用微量泵以1mg/(kg·min)持续静注异丙酚2h。手术24h时,B组、C组用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉造成全脑缺血,缺血15min后,松开动脉夹恢…