大鼠肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体与配体的亲和力比较

目的:探讨来源于不同组织肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体(macrophagemannosereceptor,MMR)与配体的亲和力差异。方法:采用支气管肺泡灌洗和腹腔冲洗法获得肺泡和腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ),经纯化、鉴定后与异硫氰酸荧光标记的甘露糖基化牛血清白蛋白(MFITCBSA)孵育20min,分别加入D甘露糖、D半乳糖、EDTA,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测甘露糖受体(mannosereceptor,MR)与配体的结合情况。结果:Mφ上存在MR,MR与配体的结合属于Ca2 依赖性,其结合可被D甘露糖、EDTA抑制,而不受D半乳糖的抑制;腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR。结论:腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR。     

不同剂量黄芪组方的拯阳汤对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨不同剂量黄芪(47.62％、15.87％、5.29％)组方拯阳汤对小鼠免疫功能的影响。方法 建立受氢化可的松(HC)免疫抑制动物模型,采用MTT法检测腹腔巨噬细胞(Mφ)的活性、ConA诱导的脾脏T淋巴细胞转化增殖;以YAC-1为靶细胞用LDH释放改良法测定小鼠脾脏NK细胞和LAK细胞毒活性。结果 不同剂量黄芪组方的拯阳汤具有不同程度地拮抗HC对小鼠腹腔Mφ的活性的抑制,拮抗HC对小鼠脾脏T淋巴细胞转化的抑制,拮抗HC对小鼠脾脏NK细胞和LAK细胞毒活性的抑制。结论 拯阳汤具有拮抗HC对小鼠细胞免疫抑制的作用。     

叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体与肿瘤细胞结合机理的研究

目的研究叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体与肿瘤细胞的结合机理。方法采用薄膜分散法制备脂质体,采用荧光法、流式细胞仪和荧光显微镜检测脂质体与MCF-7细胞、Hela细胞的结合。结果叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体与MCF-7细胞的结合量大于Hela细胞;游离叶酸可竞争抑制叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体与MCF-7细胞的结合;荧光显微镜下,MCF-7细胞可见明亮绿色荧光,而Hela细胞中只有微弱绿色荧光。结论叶酸受体介导多西他赛长循环脂质体是通过叶酸介导的细胞内化而进入细胞。     

流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能

目的确立采用流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的实验条件,以提供一种快速、准确和敏感的方法评价保健食品对吞噬功能的影响。方法取昆明种小鼠巨噬细胞,与荧光素标记大肠杆菌于37℃避光孵育1.5h,与荧光微球于4℃,25℃及37℃避光孵育1.5h或于37℃避光孵育0.5,1.0,1.5和2h后,用流式细胞仪观察和分析腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球或荧光素标记大肠杆菌的能力。吞噬百分率(PP)表示吞噬一个或多个荧光微球的巨噬细胞占巨噬细胞总数的百分比;吞噬指数(PI)表示平均每个巨噬细胞吞噬荧光微球的数量;或吞噬荧光素标记大肠杆菌实验中,在M1处每个巨噬细胞的平均荧光强度(FI)。为验证和确定实验条件的可靠性,取昆明种小鼠每日经口分别给予蛹虫草菌丝体或灵芝孢子油30d后,取腹水巨噬细胞,分别与荧光微球或荧光素标记E.colik-12于37℃,培养1.5h后用流式仪进行吞噬功能的检测。结果25℃及37℃孵育条件时,PP分别为(28.0±1.4)%和(44.0±3.3)%,显著高于4℃的结果;1.5h及2.0h孵育时间,PP分别为(34.9±4.0)%和(39.5±11.3)%,显著高于0.5h及1.0h的结果。25~37℃孵育1.5~2.0h是合适的孵育条件。37℃孵育未加重组小鼠IFN-γ(rmIFN-γ)刺激时,PP为33.8%,PI为1.80,经rmIFN-γ处理后,PP为73.6%,PI为2.64,吞噬功能明显增强。0.15,0.30及0.90g.kg-1蛹虫草菌丝体处理组PP和0.30及0.90g.kg-1蛹虫草菌丝体处理组PI均较阴性对照组显著提高。0.33和1.00g.kg-1灵芝孢子油处理组M1处的FI显著高于阴性对照组。结论流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能是一种灵敏、简便、准确而高通量的定量评价保健食品影响吞噬功能的方法。     

猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用

目的观察猪苓多糖(PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用,并研究Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法用PPS12.5,25,50及100mg·L-1刺激C3H/HeN小鼠和TLR4缺陷的C3H/HeJ小鼠脾细胞72h或腹腔巨噬细胞24h,以[3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖反应;以Griess法测定腹腔巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;以溴化氰活化多糖的方法制备荧光胺(Flu)标记的PPS(Flu-PPS)及Flu-葡聚糖,应用流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合。结果 PPS可明显促进C3H/HeN小鼠脾细胞增殖并诱导腹腔巨噬细胞分泌NO,IL-1β和TNF-α,且具有浓度依赖性(r=0.999,P<0.01)。用抗TLR4单抗20mg·L-1与C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞预孵育1h后加入PPS50mg·L-1,与单独PPS50mg·L-1孵育比较,巨噬细胞培养上清IL-1β和TNF-α浓度分别由(0.38±0.06)μg·L-1和(0.29±0.05)μg·L-1降至(0.18±0.01)μg·L-1和(0.12±0.02)μg·L-1,降幅达52.6%和58.6%(P<0.01)。PPS对C3H/HeN小鼠的脾细胞增殖、腹腔巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α的作用明显强于C3H/HeJ小鼠:PPS12.5～100mg·L-1组脾细胞增殖分别增加了2.4,1.7,1.5和22.2倍,IL-1β增加了0.9,1.3,1.2和1.1倍,TNF-α增加了1.3,0.9,0.6和0.6倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪及激光共聚焦显微镜分析结果表明,Flu-PPS1mg·L-1与小鼠腹腔巨噬细胞结合的荧光强度显著高于Flu-葡聚糖,增加Flu-PPS浓度至5mg·L-1,荧光强度并未相应增强,表明Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合具有饱和性;未标记的PPS100mg·L-1及抗TLR4单抗200mg·L-1可明显阻断Flu-PPS与巨噬细胞的结合。结论 PPS可能通过TLR4活化小鼠腹腔巨噬细胞。     

911-FITC荧光探针与免疫细胞的结合实验

应用911-FJTC荧光探针对胸腺、脾脏淋巴细胞、巨噬细胞和内皮细胞进行了荧光染色，采用流式细胞仪及荧光显微镜对细胞的染色情况进行了评价。结果表明，911-FITC荧光探针能与淋巴细胞、巨噬细胞和内皮细胞发生特异性结合。证明911可通过与免疫细胞直接结合而起到免疫调节作用。     

合成鱼腥草素对巨噬细胞呼吸爆发、细胞内游离钙离子浓度及T细胞分泌白细胞介素-2的影响

目的为了进一步分析合成鱼腥草素的免疫调节作用机理 ,研究合成鱼腥草素对于巨噬细胞呼吸爆发、细胞内钙离子浓度以及T细胞分泌白细胞介素水平的影响。方法巨噬细胞分离自大鼠腹腔灌洗液。以 2′ ,7′ 二氯荧光素二乙酯作为荧光指示剂 ,采用流式细胞术检测巨噬细胞的呼吸爆发。以fura 2作为钙离子荧光指示剂采用荧光分光光度法测定细胞内钙离子浓度。利用淋巴细胞分离液采用密度梯度离心法分离外周血T细胞 ,并用尼龙毛柱加以纯化。用ELISA法测定在亚适剂量ConA、白细胞介素 1α(IL 1α)以及白细胞介素 1β(IL 1β)存在的条件下合成鱼腥草素对白细胞介素 2 (IL 2 )分泌的影响。结果合成鱼腥草素可以刺激巨噬细胞呼吸爆发 ,提高细胞内钙离子浓度水平 ,促进T细胞分泌IL 2。结论合成鱼腥草素可能具有激活巨噬细胞和T淋巴细胞的作用 ,从而部分解释合成鱼腥草素的佐剂作用以及治疗感染性疾病的作用机理。     

L-选择素与小鼠肝癌细胞Hepa1-6淋巴道转移的关系

目的研究L-选择素(L-selectin)与其配体甘露糖受体(mannose receptor,MR)间相互作用与小鼠肝癌细胞Hepa1-6淋巴道转移潜能相关性。方法构建含有L-selectin的重组载体pcDNA3.1,转染小鼠肝癌细胞Hepa1-6,筛选稳定表达L-selectin的细胞株。采用免疫组化、RT-PCR、流式细胞、体外黏附试验技术研究小鼠肝癌细胞Hepa1-6中L-selectin的表达及其与肿瘤细胞淋巴道转移潜能的相关性。结果 1重组质粒为目的基因L-selectin。2 Hepa1-6细胞表面有L-selectin表达,阳性率20.2%。3流式细胞仪检测结果表明Hepa1-6细胞表达L-selectin为19.9%。4体外黏附试验结果表明,不具有转移特性的Hepa1-6表达L-selectin后可发生淋巴道转移,L-selectin能与MR结合(P0.001),介导Hepa1-6的淋巴道转移。结论 Hepa1-6表达目的基因L-selectin后具有淋巴道转移潜能,并能与MR在体外结合,介导肿瘤细胞的淋巴道转移。     

白头翁有效成分通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化干预肿瘤发生发展的机制

目的对白头翁成分进行筛选,探讨白头翁有效成分对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响及其抗肿瘤免疫机制。方法 CCK-8法检测白头翁各成分对THP-1巨噬细胞与MCF-7乳腺癌细胞的IC_(50)值;通过Transwell将THP-1巨噬细胞与MCF-7细胞进行共培养,筛选能够抑制共培养体系中MCF-7细胞增殖的白头翁有效成分;将筛选出的有效成分作用于巨噬细胞24 h,通过实时PCR检测巨噬细胞M1型相关细胞因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素12、白细胞介素23)以及M2型相关细胞因子(甘露糖受体、精氨酸酶1、白细胞介素10)的mRNA表达情况;流式细胞术(FACS)检测巨噬细胞表面抗原CD68、CD86的表达;Western印迹检测巨噬细胞TLR4信号通路相关蛋白的表达。结果通过筛选发现白头翁成分PA能够显著抑制共培养体系中MCF-7的增殖;实时PCR结果显示,白头翁成分PA低剂量(0.05 g·L~(-1))和高剂量(0.1 g·L~(-1))可显著增加M1型巨噬细胞相关因子IL-1β,TNF-α,IL-12,IL-23和CXCL11m RNA的表达,降低M2型巨噬细胞相关因子CD206,IL-10和Arg-1 mRNA的表达(P<0.05);FACS结果表明,白头翁成分PA组M1型巨噬细胞表面标志物CD86表达显著增高(P<0.01);Western印迹结果显示,白头翁成分PA可以促进巨噬细胞TLR4,My D88,TRAF6,NF-k B,P38,Ikbα和IRF5等蛋白的表达。结论白头翁有效成分PA可能通过影响巨噬细胞TLR4/My D88/TRAF6/NF-k B通路,诱导巨噬细胞向M1型极化、抑制M2型极化,启动巨噬细胞相关抗肿瘤免疫应答,从而干预肿瘤细胞的生长。     

黄芪对喉癌细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察黄芪对人喉癌细胞系Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用并探讨其作用机制。方法用20、100、200μg/mL的黄芪作用于Hep-2细胞24 h,MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,光学显微镜观察细胞形态学变化。结果 MTT结果显示,黄芪可显著抑制Hep-2细胞增殖且存在剂量依赖性;流式细胞仪检测发现,细胞凋亡率随着黄芪浓度增高逐渐升高,各实验组之间及其与对照组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);用药后光镜观察细胞数量减少,荧光显微镜观察可见典型细胞凋亡。结论黄芪可调控喉癌细胞周期,形成G2/M期阻滞,通过抑制增殖和促进凋亡发挥其抗癌作用。     

Influence of Spacer Length on Interaction of Mannosylated Liposomes with Human Phagocytic Cells

Purpose. To improve target specificity and uptake of liposomes by macrophages, one can improve high-affinity receptor binding to mannose determinants with their 175-kDa mannose receptor (MR), which is mainly influenced by the length and flexibility of the spacer between the carbohydrate head group and liposome surface. Liposomes containing alkylmannosides with hydrophilic spacers 0 to 8 ethyleneoxy units (EO) long (Man0...Man8) were used to investigate systematically the effects of spacer length on liposome-cell interactions. Methods. Concanavalin A (ConA)-induced liposome aggregation was studied by turbidity measurement and cell uptake using PMA-induced HL-60 cells or native human macrophages by determining 6-CF after cell lysis or NBD-fluorescence with flow cytometry. Detection of MR in native cell populations was carried out by an antibody assay using flow cytometry; MR-representing cells were selected analytically. Results. Liposomes containing mannosides with more than one EO spacer length were specifically aggregated by ConA, indicating accessibility of the carbohydrate ligands of these derivatives. Increase in EO spacer units of incorporated mannosides (two or more EO) led to suppression of cellular uptake of mannosylated liposomes by phago- cytes lacking MR (HL60, U937). The extent of suppression increased with spacer length. Liposome uptake by native macrophages expressing MR was, on the contrary, improved, particularly by Man6 and Man8. Conclusions. Uptake of liposomes modified with Man6 or Man8 by native cells was enhanced but did not reach an optimum. Thus, Man6, Man8, and mannosides with even longer spacer arms are of potential use in receptor-mediated targeting.     

siRNA抑制IRE1α蛋白表达对巨噬细胞凋亡的影响

目的研究游离胆固醇诱导内质网应激状态下,抑制IRE1α蛋白表达后对巨噬细胞凋亡的影响。方法取自C57BL6/J小鼠腹腔的野生型巨噬细胞和用IRE1α特异性siRNA干扰的巨噬细胞分别在普通培养基及普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白(促进游离胆固醇聚集条件下)中进行培养,分组孵育8h后Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果在FC-loaded状态下经8h孵育,野生型巨噬细胞组大量巨噬细胞凋亡,达到(21.83±2.47)%;siRNA干扰组巨噬细胞的凋亡明显减少。结论结果表明游离胆固醇聚集到内质网后引起内质网应激,而激活内质网跨膜蛋白IRE1α是诱导巨噬细胞凋亡的关键。     

白藜芦醇诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的研究

目的：探讨白藜芦醇诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。方法：以Res（10、20、40μg／mL）作用人胃癌SGC7901细胞,同时设DMSo和培养液作用为对照组。采用MTT法检测Res对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制情况．荧光染色法观察细胞形态变化。琼脂糖凝胶电泳法分析SGC7901细胞的DNA片断化。结果：Res对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且随着剂量的增高（10～40μg／mL）而增高,最大抑制率达（53．39±5．32）％;荧光染色结果发现Res48h凋亡细胞增多,镜下可见较为典型的凋亡形态学变化：细胞变小,核皱缩,荧光强度增强．呈囊月或环状．核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的“梯状”条带,而对照组未出现梯状务带。结论;Res能押制人胃癌SGC7901细胞的生长并诱导其凋亡。     

模拟微重力下瘦素对肺T淋巴细胞蛋白激酶C信号转导途径的影响

目的探讨在模拟微重力下瘦素对肺T淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)信号转导途径的影响。方法分离肺T淋巴细胞,利用旋转式细胞组织培养系统(RCCS)模拟微重力条件。培养T淋巴细胞后,采用PepTag非放射性PKC检测试剂盒测定T淋巴细胞PKC活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定T淋巴细胞的白细胞介素-2(IL-2)生成;采用流式细胞技术检测T淋巴细胞表面抗原CD25、CD71的表达。结果在普通细胞培养容器组,刀豆蛋白A(ConA)组与瘦素组、ConA+瘦素组与ConA组相比,PKC活性增强,IL-2生成增加,表面表达CD25分子的细胞增多;模拟微重力条件下,与普通细胞培养容器培养的T淋巴细胞相比较,ConA刺激后,PKC活性、IL-2水平,表面表达CD25分子的细胞减少(P<0.01);在模拟微重力条件下,瘦素组与ConA组相比,相同指标无明显变化,而且加入瘦素的ConA组与ConA组比较,仍无明显变化。RCSS组中的ConA+瘦素组,与普通细胞培养容器组中的ConA+瘦素组相比较,上述指标均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且在模拟微重力条件下,瘦素组和ConA+瘦素组与同样条件下的ConA+12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)组相比,上述所有指标均降低(P<0.01)。结论模拟微重力条件下,T淋巴细胞的激活受到抑制;PKC的活性降低,表面表达CD25的细胞数降低,T淋巴细胞分泌的IL-2降低;同样条件下,PMA对T淋巴细胞的上述指标有部分恢复作用。     

携带小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的构建及对 RAW264.7 细胞增殖的影响

目的 构建小鼠 Krüppel 样因子 4（KLF4）慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 细胞株。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 KLF4 后,构建重组质粒 pLVX-KLF4,并 通过 PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定。重组质粒与 pSPAX2、pMD2.G 辅助质粒通过 Lipofectamine® 3000 共转 染 293T 细胞,包装病毒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染 RAW264.7 细胞,实时定量 PCR 法检测 KLF4 mRNA 的表达。分选流式细胞仪分选 GFP 阳性 RAW264.7 细胞。流式细胞术检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞周期的影响。 EdU 法检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞增殖的影响。结果 经 PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠 KLF4 基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR 证实 Lenti-KLF4 感染的 RAW264.7 细胞中 KLF4 mRNA 表达高于未感染的 对照组 RAW264.7 细胞（P＜0.05）。初次浓缩后测定小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的滴度为 2.05×108 TU/mL。分选出 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞。KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞周期变化显示为 S 期延长,G0/G1 期缩短。EdU 检 测显示 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞增殖活性增高。结论 成功构建了 KLF4 的慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞株,KLF4 过表达促进了 RAW264.7 细胞的增殖。     

T-cell receptor (TCR)/CD3 is involved in sulfated polymannuroguluronate (SPMG)-induced T lymphocyte activation

Sulfated polymannuroguluronate (SPMG) has entered the Phase II clinical trial as the first anti-acquired immune deficiency syndrome (AIDS) drug candidate in China. Proliferation assays showed that SPMG was effective at enhancing the proliferative response of T lymphocytes either with or without concanavalin A (ConA) stimulation. Flow cytometry (FCM) and fluorescence microscope examination revealed the significant binding of SPMG to T lymphocytes. The significant engagement of SPMG with TCR/CD3 complex was verified by competitive inhibition assay and one of the SPMG binding proteins purified by affinity chromatography from thymocyte membrane preparations was further confirmed to be CD3 component of TCR/CD3 complex via Western blotting analysis. In addition, SPMG was demonstrated to dramatically interact with ConA in a multivalent manner by surface plasmon resonance (SPR) assay. Notably, the concomitant presence of ConA and SPMG facilitated each other's binding to T cells. Together, the simultaneous interactions of SPMG with TCR/CD3 and with ConA can be highly proposed to facilitate the cross-linking of these molecules, and thus favoring costimulatory signaling, which serves to well explain the immunopotentiation and anti-human immunodeficiency virus (HIV) activities of SPMG.     

紫草素抑制胃癌细胞增殖、黏附及诱导凋亡

目的探讨异紫草素AJ-7及其衍生物AJ-9、AJ-5和AJ-8对人胃癌细胞SGC 7901增殖及黏附的抑制作用,以及凋亡诱导作用。方法应用MTT比色法检测新疆紫草素对细胞的增殖、黏附抑制作用,用流式细胞术(FCM)、Annexin-V-FITC联合法及透射电镜检测新疆紫草素对胃癌细胞的凋亡诱导效应。结果新疆紫草素能够抑制胃癌细胞的增殖,并呈浓度时间依赖性。FCM出现明显的亚二倍体峰并将细胞阻滞于G1期,Annexin-V-FITC联合法染色可见细胞凋亡的特征性贯穿胞质穿过胞膜的红色颗粒,电镜下可见染色质边集及生发小体的凋亡形态特征。结论新疆紫草素能够有效抑制胃癌细胞的增殖、黏附,并诱导凋亡。     

谷胱甘肽耗竭促成紫花牡荆素诱导肝癌细胞凋亡

目的研究紫花牡荆素（casticin）诱导肝癌细胞（HCC）凋亡作用及其作用分子机制。方法体外培养人肝癌PLC/PRF/5细胞系细胞,MTT测定细胞活性;细胞凋亡ELISA检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测凋亡性细胞死亡。二氯二氢荧光素二乙酯（DCFH-DA）探针标记FCM测定活性氧（ROS）生成。谷胱甘肽检测试剂盒测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量。结果 Casticin以剂量依赖方式抑制PLC/PRF/5细胞生长（P〈0.05）。Casticin诱导PLC/PRF/5细胞系Sub-G1细胞百分率增加（P〈0.05）;并增加细胞组蛋白/DNA碎片的含量,呈浓度依赖性。Casticin降低PLC/PRF/5细胞内GSH含量（P〈0.05）,但不影响胞内ROS的生成。巯基抗氧化剂,N乙酰半胱氨酸和添加外源性GSH能恢复GSH含量,并减弱casticin诱导细胞凋亡作用;而不含巯基的抗氧化剂,丁羟茴醚和甘露醇无明显作用。结论 Casticin诱导肝癌细胞凋亡涉及细胞内GSH耗竭。     

地昔帕明对脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究地昔帕明（ＤＭＩ）对大鼠脑胶质瘤Ｃ６的增殖抑制和凋亡诱导作用,为三环类抗抑郁药作为肿瘤辅助治疗提供新的理论和实验依据。方法用ＭＴＴ比色法测定Ｃ６细胞活力,用透射电镜、流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,用免疫组化法分析ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果ＤＭＩ对Ｃ６细胞的增殖具有明显的浓度依赖性抑制作用, ＩＣ５０（ ９５ ％置信区间）为２０．７（１７．３～２４．２）μｍｏｌ·Ｌ－１,细胞阻滞于Ｇ０～Ｇ１期。ＤＭＩ（４０μｍｏｌ·Ｌ－１）使细胞发生典型的凋亡形态改变,ＤＮＡ含量分析显示 Ｇ０峰左侧出现亚二倍体细胞凋亡峰,呈浓度依赖性,蛋白合成抑制剂ＣＨＸ可显著抑制ＤＭＩ诱导的细胞凋亡。同时,ＤＭＩ（１０ μｍｏｌ·Ｌ－１）可下调细胞 ｂｃｌ－２蛋白的表达。结论ＤＭＩ体外对Ｃ６细胞的增殖具浓度依赖性抑制作用,并诱导细胞凋亡。