缬沙坦及红花对单侧输尿管结扎大鼠肾脏细胞增殖的影响

目的观察肾间质纤维化实验大鼠肾脏细胞增殖的特点及缬沙坦、红花对其的抑制作用。方法结扎大鼠单侧输尿管(UUO)复制肾间质纤维化实验动物模型,分别给以缬沙坦10mg·kg-1·d-1、红花4.0g·kg-1·d-1经口灌服,14d后摘取肾脏,采用免疫组化、RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、流式细胞学检测细胞增殖/凋亡及细胞周期。结果免疫组化结果显示UUO大鼠肾脏PCNA阳性细胞表达明显增多,RT-PCR显示其基因表达增强,流式细胞学显示UUO大鼠肾脏细胞增殖/凋亡比例下降,S期细胞比例增多;缬沙坦及红花治疗组均可在蛋白及基因水平下调其表达。结论单侧输尿管结扎可诱导肾脏细胞增殖,血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦及中药红花可下调其表达。     

肾上腺髓质素基因敲除小鼠单侧输尿管结扎肾脏α-SMA表达特点及缬沙坦的作用

目的观察肾上腺髓质素基因缺失状态下小鼠肾脏α-SMA的表达特点及缬沙坦的作用。方法结扎单侧输尿管方法制备肾间质纤维化实验动物模型,采用免疫组化、RT-PCR方法检测α-SMA的定位与mRNA表达。结果单侧输尿管结扎小鼠肾脏α-SMA表达明显高于假手术组(P<0.01),其中肾上腺髓质素基因敲除小鼠高于野生小鼠,缬沙坦可下调其表达。结论单侧输尿管结扎可诱导肾小管上皮细胞表型转化,肾上腺髓质素基因缺失状态下其表达增强,血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦可部分抑制其转化。     

依普利酮下调SGK-1表达抑制梗阻性肾病细胞增殖的研究

目的观察盐皮质激素受体阻断剂依普利酮抑制梗阻性实验动物肾脏细胞增殖的作用及机制。方法结扎大鼠单侧输尿管(UUO)制备肾间质纤维化动物模型,给予依普利酮100 mg·kg-1·d-1治疗,10 d后摘取肾脏,观察大鼠肾脏组织病理改变。采用免疫组化、Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、血清糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果肾脏病理显示,UUO组大鼠肾脏有明显的细胞外基质(ECM)积聚,有大量炎性细胞浸润,肾小管扩张明显,上皮细胞脱落,依普利酮可明显减轻其细胞增殖及ECM的沉积;免疫组化和Western blot结果显示,UUO组大鼠肾脏PCNA、SGK-1、TGF-β1表达明显增强;依普利酮可下调其表达。结论依普利酮可通过下调SGK-1的表达,抑制梗阻性肾病细胞增殖,减少ECM的沉积,减缓肾脏纤维化的进程,减轻肾脏损伤。     

梗阻性肾病大鼠肾脏肾上腺髓质素的表达及缬沙坦、红花对其的影响

目的观察肾上腺髓质素在梗阻性肾病中的表达及缬沙坦、红花对其的影响。方法结扎SD大鼠单侧输尿管制备肾间质纤维化实验动物模型,同时给以缬沙坦及红花灌胃治疗,14d后摘取肾脏,免疫组化及原位杂交方法测定肾上腺髓质素的表达。结果梗阻性肾病实验动物肾脏肾上腺髓质素表达强度及面积均明显减弱,缬沙坦及红花可促进其表达。结论缬沙坦及红花拮抗肾间质纤维化可能与调控肾上腺髓质素的表达有关。     

促肝细胞生长素对肾间质纤维化大鼠模型HGF、ALK5及TGF—β1表达的影响

目的研究促肝细胞生长素因子（pHGF）对肾间质纤维化大鼠肾组织中肝细胞生长（HGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、活化素受体样激酶5（ALK5）及胶原Ⅲ的表达的影响,从而探讨促肝细胞生成素对肾间质纤维化的药物保护机制。方法54只大鼠随机分为：假手术组、单侧输尿管结扎（UUO）组及pHGF治疗组。每组于术后第3、7、14天分批处死,分别经免疫组化方法测定肾小管间质中HGF、TGF-β1、ALK5、胶原Ⅲ的表达的情况,HE、MASSON染色评定3组肾小管间质损害程度。结果UUO组TGF-β1、ALK5、胶原Ⅲ的表达及肾小管间质损伤程度明显高于假手术组（P〈0．05）;而pHGF治疗组明显低于UUO组（P〈0．05）;UUO组HGF于第3天表达最高,第7天稍有回落,第14天表达最弱;pHGF治疗组术后第3天、第7天、第14天HGF的表达均显著高于同时期UUO组（P〈0．05）,肾小管间质病变程度明显减轻,肾间质相对面积显著减小（P〈0．05）。结论pHGF能有效抑制肾间质中TGF-β1,从而进一步抑制ALK5的过度表达、使胶原Ⅲ合成减少;同时促进肾间质中HGF表达,从而能够改善UUO大鼠肾间质纤维化的程度。     

骨形成蛋白4对单侧输尿管梗阻小鼠肾组织白细胞介素-1β表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨骨形成蛋白4(BMP4)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾组织白细胞介素-1β(IL-1β)表达及细胞凋亡的影响。方法:将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为生理盐水鄄假手术组、生理盐水鄄UUO组、BMP4抗体鄄假手术组、BMP4抗体鄄UUO组各8只,各组均于手术日起每天分别给予小鼠抗人BMP4抗体200 μL/g 或等量生理盐水腹腔注射,术后7 d处死小鼠取材。采用免疫荧光法观察正常小鼠肾脏组织BMP4的表达与分布;实时荧光定量PCR检测小鼠肾脏组织IL-1βmRNA 的表达;TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:正常小鼠肾组织表达BMP4,主要分布于肾小管。BMP4抗体鄄假手术组和生理盐水鄄假手术组的IL-1βmRNA 表达、细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P均>0.05);BMP4抗体鄄UUO组IL-1βmRNA 表达、细胞凋亡率低于生理盐水鄄UUO组(P均<0.05)。结论:BMP4可能参与了梗阻性肾病肾间质炎症及细胞凋亡过程,有可能作为肾脏疾病的治疗靶点。     

缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏转化生长因子-β1、骨形成蛋白7表达的影响

目的:通过输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化动物模型,并应用缬沙坦进行干预,研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形成蛋白7(BMP-7)在肾间质纤维化时的表达,探讨缬沙坦(血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂)在肾间质纤维化(RIF)的病理生理改变机制中发挥的作用.方法:选取36只Wistar雄性大鼠,随机分三组(模型组、缬沙坦组,假手术组),每组12只,并制备UUO模型(单侧输尿管结扎),其中假手术组不结扎和剪断输尿管.每天一次对假手术组、模型组用0.9％ Nacl等量灌胃.缬沙坦治疗组日一次以6mg/kg缬沙坦给药量灌胃.连续用药2w后,每组随机选取6只大鼠取血后处死取肾脏.将剩余大鼠继续给药至4w后同样方法取材及处死.用免疫组织化学方法检测肾组织中的TGF-β1、BMP-7表达情况;血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)用全自动生化仪检测.结果:与假手术组相比,模型组和缬沙坦组在术后血肌酐及血尿素明显升高(P＜0.05).免疫组化法发现模型组TGF-β1表达增加,BMP-7表达减少,而缬沙坦组TGF-β1表达减少,BMP-7表达增加.结论:缬沙坦可能对肾间质纤维化起到拮抗作用,可能对临床用药提供实验理论依据.     

罗沙司他抑制HIF-1α/Notch-1信号通路缓解单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的研究

目的 研究罗沙司他(roxadustat,ROX)改善单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的机制。方法 48只♂SD大鼠随机分为假手术组、UUO组、UUO+ROX (25,50 mg·kg^-1)剂量组,每组12只。左侧输尿管结扎制备RIF大鼠模型,造模后第3天开始每天灌胃给药,连续给药21 d。测定大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;HE染色、Masson染色观察肾组织病理变化及胶原沉积情况;免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况。体外培养近曲小管上皮细胞,分为对照组、TGF-β1(5 ng·mL^-1)组、TGF-β1+二甲基亚砜(DMSO)组和TGF-β1+ROX (10,20,40 μmol·L^-1)组,细胞先用ROX或DMSO预处理2 h,再用TGF-β1(5 ng·mL-1)处理48 h。Western blotting检测肾组织和细胞内I型胶原(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ)、E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Notch-1、Notch-1胞内域(NICD)和Hes1的表达。结果 动物实验结果显示,与UUO组相比,ROX给药组大鼠Scr和BUN水平明显降低,肾组织胶原沉积明显减少,collagen Ⅰ和collagen Ⅲ的蛋白表达明显降低,RIF程度明显减轻;肾组织上皮细胞标志物E-Cadherin的表达明显升高而间质细胞标志物Fibronectin、α-SMA和Vimentin明显降低(P<0.05或P<0.01);同时肾组织HIF-1α、Notch-1、NICD和Hes1的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,与TGF-β1组相比,不同剂量ROX均能明显降低HIF-1α、Notch-1、NICD和Hes1的表达;显著上调E-Cadherin的表达,明显下调Fibronectin、α-SMA和Vimentin的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 本研究结果提示ROX可减轻UUO大鼠RIF,其作用机制可能与抑制HIF-1α/Notch-1信号通路、逆转肾小管上皮细胞上皮-间质转分化有关。     

紫草素通过Smad3/Erbb4-IR轴对肾脏纤维化的抑制作用研究

目的研究紫草素对单侧输尿管梗阻性肾病诱导的小鼠纤维化模型的治疗作用和潜在调控机制。方法选取C57BL/6雄性小鼠30只, 8周龄,体质量(20～22) g,随机分为假手术组、UUO组、紫草素低和高剂量组、厄贝沙坦组,紫草素组于术前1 h给予紫草素第1d的灌胃,连续灌胃10 d后处死小鼠,收集血清, HE和PAS观察肾脏病理,MASSON检测肾间质纤维化,IHC检测α-SMA,Western blot检测肾组织中纤维化指标和p-Smad3、Smad7的表达,RT-PCR检测TGF-β和长链非编码Erbb4-IR。结果与模型组相比,紫草素治疗后,肾功改善,病理染色显示肾小管损伤明显改善,纤维化减少;免疫印迹结果显示紫草素能够抑制TGF-β/Smad信号通路中关键蛋白Smad3活化,上调Smad7表达,而TGF-β和长链非编码Erbb4-IR的基因表达均呈现剂量依赖性下降。结论紫草素可有效减轻肾脏纤维化,其机制可能与调节Smad3/Erbb4-IR轴相关。     

幼鼠肾小管间质损伤不同时期缺氧诱导因子-1α的表达趋势及意义

目的探讨单侧输尿管结扎模型(UUO)幼年大鼠肾间质损伤过程中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)组织定位表达的趋势、相关性及潜在的病理意义,以及用苯那普利和氯沙坦联合治疗的效应。方法采用单侧输尿管结扎的方法制备实验性幼鼠梗阻性肾小管间质损伤模型,第3、7、14、28天作为观察点,用Masson染色评价各组各时间点肾小管间质损伤程度,免疫组织化学法分别检测各组幼鼠肾组织HIF-1α和TGF-β1定位、表达趋势及相关性。结果UUO模型组HIF-1α、TGF-β1蛋白表达及肾小管间质损伤的程度均明显高于假手术组(P<0.05);HIF-1α与TGF-β1均在持续了约14d左右的高表达后随纤维化的加重其表达反而有所下降;而在治疗组各指标的表达明显低于UUO模型组(P均<0.01),但各时间点比较其表达仍强于假手术组(P均<0.05);HIF-1α、TGF-β1及肾小管间质损伤指数之间呈正相关;治疗组各指标的表达水平明显低于UUO模型组(P<0.05)。结论在幼年大鼠肾小管间质损伤过程中,HIF-1α、TGF-β1的表达上调具有重要的致病意义,而苯那普利和氯沙坦治疗具有明显的干预效应。     

来氟米特抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察来氟米特对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化指标转化生长因子-β1(TGF-β1)及胶原(Col)Ⅰ、ColⅢ的表达程度的影响及相互关系,从而探讨其作用机制。方法将36只健康、雄性SD大鼠中的24只行左输尿管结扎术,另外12只行假手术。术后第2天开始给药,结扎后的大鼠分为单侧输尿管结扎(UUO)组和治疗组各12只。术后第7、14天分别处死各组中的6只大鼠,用免疫组织化学方法测定TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达情况。行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,动态观察肾间质病理学改变。结果来氟米特能显著减少UUO大鼠肾小管间质TGF-β1的表达,减轻ColⅠ和ColⅢ在肾小管间质的沉积。结论来氟米特抑制受伤的肾小管间质TGF-β1的表达,减少基质的聚集从而减轻肾间质纤维化。提示来氟米特有潜在的延缓慢性肾功能衰竭进程的作用。     

黄芪当归合剂对肾间质纤维化的多靶点抑制作用

目的动态观察复方中药黄芪当归合剂(A&A)对肾间质纤维化大鼠的抗纤维化治疗作用,了解A&A在疾病过程中的起效时间及不同阶段的主要作用环节。方法♂W istar大鼠随机分为对照(Control)、假手术(Sham)、单侧输尿管结扎(UUO)和UUO+A&A治疗组(UAA)。在给药(A&A 12 g.kg-1.d-1)后d 0、3、7、10处死动物,观察肾功能变化,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分。采用免疫组化、ELISA和W estern B lot分别分析肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA),转化生长因子β1(TGF-β1),纤粘连蛋白(FN)表达。结果与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾功能受损、病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、α-SMA、FN表达均增高(P<0.01)。A&A治疗后d 3,可观察到其明显减轻UUO大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化(P<0.05),同时可使肾组织中的TGF-β1表达减少(P<0.05),但此时并不影响α-SMA和FN表达。治疗后d 7,A&A的上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的α-SMA表达减少(P<0.05)、FN表达下降(P<0.05)。治疗10 d后,UAA组肾小管萎缩和肾间质纤维化程度、TGF-β1、α-SMA、FN的表达仍较UUO组分别减轻18.95%,28.7%,39.6%,26%。结论在UUO模型中,A&A的肾保护作用从病变早期开始,主要表现为减少炎症细胞反应和TGF-β1表达分泌,随后可减少肾脏固有细胞转化、分化及细胞外基质成分沉积,其作用的高峰时间是在造模后d 3~7,并持续存在至d10,特征是通过减轻肾间质纤维化而改善肾功能。     

辛伐他汀抑制肾间质纤维化的实验研究

目的观察辛伐他汀在体内对细胞增殖、肾间质肿瘤坏死因子(TGF)-β1表达的影响。方法36只Wistar大鼠随机分为假手术组(SOR组,12只),模型对照组(UUO组,12只),辛伐他汀治疗组(SIM组,12只),SIM组术前1 d开始给予辛伐他汀20 mg.kg-1.d-1灌胃,其余两组以等量蒸馏水灌胃,术后14 d处死大鼠,留取血标本实验室检查血清胆固醇和甘油三酯,取术侧肾脏行HE、Masson染色比较各组肾组织病变,免疫组织化学SP法检测肾小管间质增殖细胞核抗原(PCNA)、TGF-β1的表达。结果SIM组肾组织纤维化病变减轻,肾小管间质细胞增殖受抑,TGF-β1表达下调。结论辛伐他汀能够抑制肾小管间质纤维化早期细胞的增殖,减少间质中炎性细胞的浸润,并通过下调TGF-β1的表达,削弱细胞增殖与细胞因子间相互促进的恶性循环来抑制肾小管间质纤维化的进展。     

阿奇霉素对单侧输尿管梗阻大鼠NF-κBp65和MCP-1及ColⅢ表达的影响

目的研究阿奇霉素对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质核因子-κB（NF-κB）、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、胶原Ⅲ（ColⅢ）表达的影响,探讨其对肾间质纤维化的作用机制。方法采用单侧输尿管结扎肾间质纤维化模型,将60只SD大鼠随机分为3组：假手术组（正常对照组）,单侧输尿管结扎组（模型组）,阿奇霉素组（治疗组）,分别于术后第3、7、14天处死3组大鼠。用HE和MASSON染色法观察肾脏病理改变,用免疫组化方法检测NF-κBp65、MCP-1、ColⅢ表达情况。结果模型组NF-κBp65、mCP-1、ColⅢ在肾间质表达明显增强,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗组各因子的表达下调,与相应时间点模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阿奇霉素可降低NF-κBp65、MCP-1、ColⅢ的表达,缓解肾间质纤维化。     

CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响.方法 选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1 R.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射.观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达.结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05).结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化.     

沙利度胺对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究沙利度胺(Thd)对单侧输尿管梗阻(UUO)后大鼠肾间质纤维化的作用。方法 48只SD大鼠随机均分为四组,每组12只:假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、Thd200mg.kg-1.d-1治疗组(Thd组)和洛丁新10mg.kg-1.d-1治疗组(Lot组)。术后7、14d取血检测肾功能,Masson染色观察肾间质病变,免疫组织化学和RT-PCR检测肾组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果与Sham组比较,UUO组血尿素氮和肌酐水平、肾间质纤维化程度以及HIF-1α、α-SMA、ColⅠ蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.01);Thd组上述各观察指标均较UUO组减少(P<0.01);除HIF-1α表达外,Lot组其余指标均较UUO组下降(P<0.01),且与Thd组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Thd可改善肾功能,并可能通过下调HIF-1α表达而抑制肾小管上皮细胞转分化和肾间质细胞外基质积聚,进而发挥肾保护作用。