柱前衍生化RP-HPLC拆分酮洛芬对映异构体的研究

摘 要 目的：建立酮洛芬对映异构体的拆分方法。方法: 采用柱前衍生化RP HPLC法,以L-丙氨酸-β-萘胺（L-Ala-β-NA）为手性衍生化试剂,色谱柱：Hypersil ODS-2柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：乙腈-0.025 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（40∶60,v/v）,流速：1.0 ml·min^-1,检测波长：245 nm,柱温：25℃,进样量：10μl。结果: 酮洛芬对映体衍生物获得较好的基线分离,S-(+) 对映体和R-(-) 对映体衍生物的色谱峰保留时间分别在24.2 min和26.0 min处。右旋酮洛芬在0.025~0.125 mg质量范围内线性关系良好（r=0.998 1）,平均回收率为90.93%（RSD=4.10%,n=9）。结论:该方法简便、准确、快速,为酮洛芬的光学异构体的测定提供了参考依据。     

柱前衍生化RP-HPLC分离巴氯芬的对映异构体

目的建立巴氯芬对映异构体的拆分方法。方法采用柱前衍生化RP-HPLC法,以2,3,4,6-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯为柱前手性衍生化试剂,考察衍生化时间、试剂用量、流动相组成及其pH等因素对手性分离的影响。结果采用ZORBAX-C8(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,在流动相为甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾溶液(40:60,pH6.0)、紫外检测波长为254 nm、流速为1.5 m.lmin-1、柱温35℃的色谱条件下,巴氯芬对映体衍生物获得了基线分离,分离度为1.93,并确认了R( )-衍生物的色谱峰。结论所建方法简便、快速,为巴氯芬的光学异构体的测定提供了参考。     

柱前衍生结合手性固定相高效液相色谱法拆分2种氨基酸对映体

目的建立柱前衍生结合手性固定相HPLC法拆分2种氨基酸对映体。方法衍生化试剂：4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并噁二唑（NBD-Cl）;色谱柱：OA-2500S;流动相：甲醇（含5 mmol.L-1枸橼酸）∶-乙腈（50∶50,v/v）;检测波长：470 nm;流速：0.5 mL.min-1。结果在优化的色谱条件下,丝氨酸和缬氨酸对映体的分离度分别为2.4和2.5,分离因子分别为1.12和1.17。结论该方法简单、灵敏,可用于2种氨基酸对映体的拆分。     

柱前衍生化高效液相色谱法分离分析奥美拉唑对映体

目的 建立柱前衍生化高效液相色谱法分离奥美拉唑对映体.方法 以(S)-(+)-樟脑磺酰氯为柱前手性衍生化试剂,衍生物在Diamonsil C18色谱柱上,以10 mmol·L-1醋酸铵(pH 7.5)-异丙醇(75:25,v/v)为流动相分离,流速为0.5 mL· min-1.结果 奥美拉唑衍生物可达到基线分离,分离度为1.72.结论 采用柱前衍生化高效液相色谱法,在普通C18色谱柱上分离奥分析美拉唑衍生物,为此类手性药物的分离分析提供一个新方法.     

柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分布洛芬对映异构体

目的：建立一种柱前手性衍生化-反相高效液相色谱紫外法检测布洛芬的异构体。方法：以N′N-羰基二咪唑（CDI）作为活化剂活化布洛芬的羧基基团,再以（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺（R-NEA）作为手性衍生化试剂进行反应。选用Kromasil C18色谱柱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,以乙腈-0.05%磷酸（68∶32）为流动相,检测波长225 nm。结果：布洛芬的非对映异构体色谱峰的保留时间分别为25.6 min和27.9 min。结论：本方法操作简单,条件温和,衍生化产物稳定,且衍生化试剂价格便宜,更准确地实现了对布洛芬对映异构体的分离检测。     

柱前衍生化方法测定L-鸟氨酸盐酸盐的有关物质

目的：采用9-芴甲氧羰酰氯（FMOC-Cl）为柱前衍生化试剂,建立FMOC-Cl柱前衍生化反相高效液相色谱法测定L-鸟氨酸盐酸盐的有关物质。方法：采用Agilent Extend C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,醋酸盐缓冲溶液（0.1 mol·L-1醋酸铵,冰醋酸调节pH至5.0）-乙腈为流动相,梯度程序洗脱,流速：1 mL·min-1,检测波长：265 nm,柱温：35℃,测定L-鸟氨酸盐酸盐中的有关物质。衍生化方法与条件：需衍生化样品与0.05 mol·L-1硼砂缓冲液和8 mg·mL-1 FMOC-Cl乙腈溶液（v/v,1∶3∶3）室温反应20 min后正己烷萃取2次,4 mol·L-1盐酸溶液调节pH至3~4。结果：该品及其潜在的12种氨基酸类有关物质衍生物色谱分离度良好;测得各氨基酸浓度在1.0~20μg·mL-1范围内,线性关系良好,r均大于0.9995,加样回收率和精密度结果均良好。结论：该方法专属性好、准确度高,适用于该品有关物质的检测。     

GC法测定（1R，2R）-（-）-1，2-环己二胺中S，S对映异构体

目的：建立GC法,测定（1R,2R）-（-）-1,2-环己二胺中S,S对映异构体。方法：用三氟乙酸酐对1,2-环己二胺进行柱前衍生化。色谱柱：CHIRALDEX^TM B-DP二丙酰化B-环糊精手性毛细管柱（30m×0．25mm）,检测器：FID,进样口及检测器温度：200℃,柱温：175℃,载气：氮气,流速：3．0mL·min^-1,分流比：50：1,进样量：1．0μL。结果：1,2-环己二胺的R,R与S,S对映异构体衍生物达到基线分离;S,S对映异构体定量限和检测限分别为2．2和0．66mg·L^-1,平均回收率为96．2％,RSD为2．1％（n=6）。结论：本法能较为准确、快速、有效地分离测定（1R,2R）-（-）-1,2-环己二胺中S,S对映异构体。     

高效液相色谱法测定紫草油中β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的：建立紫草油中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLc）法,色谱柱为迪马C18钻石色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为乙腈．水-甲酸（75：25：0．2）;检测波长为275nm;柱温为室温。结果：在80．6～564．5ng范围内,β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁进样量和峰面积具有良好的线性关系,线性回归方程为C=1．0279×10^-6A＋2．3589×10^-2,r=0．9999。测得紫草油中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁平均含量为0．8692mg/ml。结论：该方法简便可行,重现性好,可作为紫草油的质量控制方法。     

HPLC法测定“化腐生肤”渗滤液中β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的建立用高效液相色谱法测定“化腐生肤”渗滤液中β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,为其制定质量标准提供依据。方法色谱柱为DiamonsilC18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈一甲酸水（78：22）,流速为1．0mL／min,检测波长为275nm,柱温30℃结果β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁在0．02-76～0．1935mg／mL范围内线性良好（r=0．9998）,平均回收率均在95％～105％,RSD为2．223％,“化腐生肤”渗滤液中β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量为0．3866mg／mL。结论该方法准确,简便灵敏,可用于“化腐生肤”渗滤液的质量控制。     

以羧甲基-β-环糊精为HPLC手性流动相添加剂法分离两种手性药物对映体

目的：建立以羧甲基-β-环糊精（CM-β-CD）为手性流动相添加剂的高效液相色谱法（HPLC）,对美托洛尔、文拉法辛两种手性药物进行对映体拆分研究。方法：色谱柱为SunFire TM C18柱（4.6 mm?15 mm,5 μm）,柱温为30 ℃,流速为0.5 mL?min-1。分离美托洛尔最佳条件为10 mmol?L-1磷酸盐缓冲液（pH值至5.0,含15 mmol?L-1 CM-β-CD）—甲醇（85∶15）,柱温为30 ℃,流速为0.5 mL?min-1,检测波长为285 nm;分离文拉法辛最佳条件为10 mmol?L-1磷酸盐缓冲液（pH值至5.0,含20 mmol?L-1CM-β-CD）—甲醇（85∶15）,柱温为 30 ℃,流速为0.5 mL?min-1,检测波长为230 nm。结果：在最佳分离条件下,美托洛尔、文拉法辛两种手性药物均达到了基线分离,分离度分别为1.51,1.79。结论：羧甲基-β-环糊精（CM-β-CD）对两种手性药物均有一定的手性选择性。     

柱前衍生化HPLC法测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体

目的:建立柱前衍生化HPLC法研究大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体体外代谢的立体选择性。方法:以二-O-乙酰基-L-酒石酸酐（DATAAN）为衍生化试剂,采用反相高效液相色谱法拆分川丁特罗对映体,测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体的浓度。结果:川丁特罗对映体达到基线分离,分离度为2.24,线性范围2.50～200μmol·L^-1,平均回收率（S）-川丁特罗为89.3%,（R）-川丁特罗为91.3%。平均日内、日间RSD均小于15%。在大鼠肝S9组分中川丁特罗的代谢呈现立体选择性。结论:此法专属性强、准确可靠,可用于大鼠肝S9组分中川丁特罗代谢的立体选择性研究。     

高效液相色谱流动相添加剂法拆分亚叶酸钙

目的：利用高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分亚叶酸钙对映异构体。方法：通过探讨色谱柱、柱温、手性配合剂、流动相的pH值对手性拆分的影响,确定乙腈-苯丙氨酸溶液（8 mmol L-苯丙氨酸、4 mmol硫酸铜,加水1000 mL,氢氧化钠试液调节pH至3.5）（10∶90）为手性流动相, Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）拆分亚叶酸钙对映体,检测波长为300 nm,柱温20℃。结果与结论：建立的方法简单易行,可用于药品质量控制与体内代谢立体选择性的研究。     

贝凡洛尔对映体在新型键合纤维素手性固定相上的拆分

目的:建立一种用新型键合纤维素手性固定相拆分贝凡洛尔对映体的高效液相色谱方法。方法:使用Chiralpak IB柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-20 mmol.L-1磷酸二氢钾溶液(25∶75,pH 4.5),流速0.8 mL.min-1,检测波长259 nm,柱温25℃,对盐酸贝凡洛尔对映体进行拆分,同时也在正相模式和极性有机模式下,对其进行拆分。结果:在3种模式下,盐酸贝凡洛尔在正相模式和反相模式下能够达到基线分离,在极性有机模式下能部分分离。结论:该实验方法操作简便,准确度高,重复性好。     

毛细管区带电泳法分离盐酸美沙酮对映体

目的:采用毛细管区带电泳法对盐酸美沙酮对映体进行了拆分。方法:比较了3种衍生化β-环糊精为手性添加剂的分离效果,对缓冲液的pH及浓度、手性添加剂的浓度、柱温、分离电压等方面进行了考察及优化。结果:确定采用75μm×75 cm未凃渍石英玻璃管柱,运行缓冲液为含50 mmol.L-1的Tris和10 mmol.L-1的HP-β-环糊精的水溶液(以磷酸调节pH至2.0),分离电压为25 kV,柱温25℃,检测波长为205 nm,结论:该方法简便、快速,在15 min内分离度可达到1.9。     

柱前衍生化RP-HPLC法分离苯乙醇胺类化合物对映体

目的以2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)为手性衍生化试剂,建立苯乙醇胺类化合物对映体RP-HPLC分离分析方法。方法采用RP-HPLC法。考察了衍生化反应中碱化试剂和衍生化试剂的浓度等反应条件对衍生化产率的影响,并考察流动相的组成和pH值等因素对生成的非对映异构体分离的影响。讨论了化合物的分子结构对手性衍生化及衍生后的非对映异构体色谱分离的影响。结果在三乙胺和GITC的浓度分别为10和5 mmol.L-1的乙腈溶液中,室温下反应20 min后,有5个苯乙醇胺化合物转化成相应的非对映异构体的硫脲衍生物。在色谱条件为:Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),30 mmol.L-1醋酸铵(pH6.0)-乙腈(体积比为50∶50)为流动相,检测波长254 nm,流速1.0 mL.min-1,室温下,5个苯乙醇胺化合物对映体衍生化后非对映异构体的分离度达到4以上。结论该方法可作为苯乙醇胺类化合物对映体分离的方法之一。     

3种新型α1-受体阻断剂的手性流动相HPLC分离与制备

目的建立3种新型α₁-受体阻断剂的手性流动相HPLC分离与半制备方法。方法通过探讨有机相、手性添加剂、流动相的pH、扫尾剂、反相固定相对手性分离的影响,选择最佳的手性分离条件。结果基线分离了3种新型α₁-受体阻断剂对映体,并制备了毫克级样品。结论所建立的分离与制备方法可用于该类新药的手性研究与开发。     

HPLC万古霉素手性柱和手性流动相添加剂法分离酮洛芬对映体

目的以万古霉素为手性选择子,建立酮洛芬对映体以手性柱法和流动相添加剂法进行手性分析的方法。方法考察万古霉素用量、有机改性剂用量及缓冲液pH值对酮洛芬对映体手性拆分的影响,并进行了定量分析的方法验证。结果两种拆分方法都使酮洛芬对映体达到了基线分离,都适合于酮洛芬对映体的定性和定量分析。结论所建立的两种方法均可用于S-(+)-酮洛芬的光学纯度检测。     

Automated determination of pirlindole enantiomers in plasma by on-line coupling of a pre-column packed with restricted access material to a chiral liquid chromatographic column.

A fully automated liquid chromatographic method has been developed for the determination of the enantiomers of pirlindole, an antidepressant drug, in human plasma. The method is based on the use of a pre-column packed with restricted access material (RAM) (LiChrospher ADS RP-4) for sample clean-up coupled to a column containing a cellulose tris-(3,5-dimethylphenylcarbamate) based chiral stationary phase (Chiralcel OD-R) for the separation and quantitative analysis of pirlindole enantiomers. A 50-microl plasma volume was injected directly onto the pre-column using a mixture of phosphate buffer (pH 5.0) and methanol (97:3; v/v) as washing liquid. By rotation of a switching valve, the analytes were then eluted in the back-flush mode with the LC mobile phase. A complete separation of pirlindole enantiomers was obtained in 22 min on the Chiralcel OD-R column, using a mobile phase made of a mixture of phosphate buffer (pH 5.0) containing 50 mM sodium perchlorate and acetonitrile (65:35; v/v). The flow-rate was 0.6 ml/min and the analytes were detected fluorometrically using 295 and 340 nm as excitation and emission wavelengths, respectively. The method was then validated and was found to be linear in the 2.5-200 ng/ml range. The limit of detection was lower than 1 ng/ml. Repeatability and intermediate precision at a concentration of 50 ng/ml were about 1.5 and 3.5%, respectively.