LC-MS/MS法测定厄贝沙坦中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺

建立同时检测厄贝沙坦中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的液质联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法。选择大气压电离串联四极杆质谱(APCI+MRM)模式进行检测,流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脱。结果表明该方法专属性良好,标准曲线线性范围分别为1~120 ng·mL^-1(NDMA)和0.4~48 ng·mL^-1(NDEA);检测限浓度分别为0.5 ng·mL^-1(NDMA)和0.2 ng·mL^-1(NDEA);精密度RSD均<3.0%;准确度为96.1%~106.2%,重复性良好;样品的提取回收率分别为102.5%(NDMA)和99.9%(NDEA);对照溶液在进样器和0℃下放置24 h后稳定。该方法简单灵敏准确,可以较好地满足厄贝沙坦原料药生产中基因毒性杂质NDMA和NDEA的检验。     

GC-MS/MS法测定缬沙坦氢氯噻嗪制剂中N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

摘要：目的:建立GC-MS/MS法同时测定缬沙坦氢氯噻嗪制剂中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）与N-亚硝基二乙胺（NDEA）含量的方法。方法:使用Thermo TG-WAMS毛细管柱（30 m×0.25 mm, 0.25μm）,采用脉冲不分流进样模式,利用程序升温进行分离,通过EI离子源和SRM模式测定NDMA和NDEA。结果:NDMA和NDEA分别在0.54～108.99 ng·ml-1（r=0.999 9）与0.20～100.00 ng·ml-1（r=0.999 8）浓度范围内线性关系良好,NDMA检出限为0.22 ng·ml-1;NDMA和NDEA加样回收率分别为101.6%,102.0%,RSD分别为2.2%,2.7%（n=9）。结论:该方法专属性好、灵敏度高、准确度高和样品制备简单,可用于缬沙坦氢氯噻嗪制剂中NDMA和NDEA检测。     

GC-MS测定坎地沙坦酯中微量的N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺

目的：建立GC/MS直接进样法测定坎地沙坦酯中微量的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）和N-亚硝基二乙胺（NDEA）的含量。方法：采用单四极杆GC/MS,色谱柱Agilent VF-WAX ms（长度30m,内径0.25mm,液膜厚度0.25μm）,程序升温,进样口温度200℃,流速1.0 ml?min-1;质谱采用EI源,电压为70eV,离子源温度230℃、四极杆温度150℃,5-7min检测离子为74(m/z) (NDMA),7-10min检测离子为102(m/z) (NDEA);以0.2mol?L-1氢氧化钠溶液溶解样品,以乙酸乙酯进行萃取。结果：在上述GC/MS条件下,NDMA、 NDEA及相邻色谱峰之间分离效果良好,NDMA和 NDEA分别在2.97～148.5 ng?mL-1和3.00～150.20ng?mL-1浓度范围内线性关系良好,定量限分别为0.06ppm、0.03ppm,检出限分别为0.018ppm、0.009ppm;NDMA低、中、高浓度平均回收率分别为86.3%、88.3%、91.4%,RSD分别为0.9%、0.7%、0.4%,NDEA低、中、高浓度平均回收率分别为88.1%、87.9%、91.7%,RSD分别为0.9%、1.1%、0.2%。结论：建立的GC/MS测定坎地沙坦酯中NDMA和NDEA的方法,准确度好,灵敏度高,简便可靠,对仪器污染小,可用于坎地沙坦酯中这两个基因毒性杂质的质量控制。     

UHPLC-MS/MS法测定盐酸二甲双胍制剂中2种亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定盐酸二甲双胍制剂中2种基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylaminen, NDMA)和N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine, NDEA)的含量的方法。方法 采用多反应监测(MRM)模式检测，离子源为APCI(+),色谱柱为ACE Excel 3 C₁₈-AR柱(100 mm×4.6 mm, 3μm),以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-质量分数0.1%甲酸甲醇溶液(B)为流动相梯度洗脱，流速0.5 mL·min^-1,进样体积5μL。结果 NDMA和NDEA的线性范围分别为0.99～99μg·L^-1(r>0.999 9)和0.53～53μg·L^-1(r>0.999 9),平均回收率为90.9%～98.9%,定量限分别为0.99和0.53μg·L^-1,检测限分别为0.3和0.2μg·L^-1。用建立的方法测定不同剂型的6批样品，2批...     

UPLC-MS/MS测定酒石酸伐尼克兰中基因毒性杂质N-亚硝基伐尼克兰

目的 建立酒石酸伐尼克兰原料药和片剂中基因毒性杂质N-亚硝基伐尼克兰超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法。方法 采用ACQUITY UPLC^? CSH^TM Phenyl-Hexyl(150 mm×3.0 mm,1.7μm)色谱柱;0.1%甲酸水溶液为流动相A,0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相B,梯度洗脱;流速为0.45 mL·min^–1,柱温为50℃;采用ESI离子源正离子扫描,多反应监测(MRM)模式下,对基因毒性杂质进行定量检测。结果 杂质在0.10～10.04ng·mL^–1具有良好的线性关系;原料药的低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)分别为103.58%(RSD=3.30%),98.65%(RSD=2.73%),92.00%(RSD=1.98%);片剂的低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)为91.53%(RSD=0.78%),96.76%(RSD=3.12%),93.01%(RSD=2.21%);检测限与定量限分别为0.014 ng·mL^–1<...     

GC-MS/MS法测定甲磺酸卡莫司他原料药中N-亚硝基二甲胺

目的建立GC-MS/MS法测定甲磺酸卡莫司他原料药中的亚硝胺类基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)。方法采用Agilent DB-SELECT 624UI色谱柱(30 m×0.32 mm×1.80μm)色谱柱,离子源为EI源,采用多反应监测模式,以m/z 74→44.2为定量离子,m/z 74→42.2为定性离子,进行数据采集。结果 NDMA在12.571 2～100.569 6 ng/mL线性良好(r=0.997 6),检测限质量浓度为5.028 5 ng/mL,平均回收率为107.4%,RSD值为2.5%。结论该方法操作简单,灵敏度高,专属性和重复性好,可用于甲磺酸卡莫司他原料药中NDMA的检测。     

GC-MS/MS法同时测定氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立同时测定氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量的方法。方法 采用气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）法测定氯沙坦钾原料药、氯沙坦钾片、氯沙坦钾胶囊、氯沙坦钾氢氯噻嗪片中N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、N-亚硝基-N-乙基异丙胺（NEiPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDiPA）、N-亚硝基二苯胺（NDPA）、N-亚硝基二丁胺（NDBA）6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量。色谱柱为SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛细管柱；采用程序升温；进样口温度为250℃；进样量为1μL；载气为氦气，流速为1 mL/min。离子源为电子轰击源，离子源温度为250℃；溶剂延迟时间为3.1 min；采集模式为多反应监测模式。结果 NDMA、NDEA、NEiPA、NDiPA、NDPA、NDBA与其相邻色谱峰之间的分离效果均良好，分离度均大于3.8；其线性范围分别为4.9～486.0、4.9～488.5、4.5～451.5、6.8～683.5、5.2～525.0、5.2～520.0 ng/mL(r≥0.999 8)，定量限分别为4.86、4.88、...     

GC-MS/MS测定替米沙坦片中10种亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立GC-MS/MS同时测定替米沙坦片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基甲乙胺(NMEA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基-N-乙基异丙胺(NEIPA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基二正丙胺(NDPA)、N-亚硝基二正丁胺(NDBA)、N-亚硝基哌啶(NPIP)、N-亚硝基吡咯烷(NPYR)和N-亚硝基吗啉(NMOR)10种亚硝胺类基因毒性杂质的含量。方法样品经甲醇提取,经Agilent VF-WAXms(30 m×0.25 mm,1μm)毛细管气相色谱柱分离,采用多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析。结果 NDMA、NMEA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDPA、NDBA和NPIP在0.2～50 ng·mL^–1线性关系良好,相关系数均为1.000 0;检测限均为0.05 ng·mL^–1,定量限均为0.2 ng·mL^–1,平均回收率分别为103%(RSD=9.2%,n=9),108%(RSD=6.1%,n=9),107%(RSD=5.3%,n=9),106%(RSD=3....     

UHPLC-MS/MS法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔

目的 建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔的UHPLC-MS/MS检测方法。方法 Waters ACQUITY UPLC® CSHTM C₁₈色谱柱(150 mm×3.0 mm, 1.7 μm),10 mmol•L^-1甲酸铵的水溶液（含0.1%甲酸）作为流动相A,乙腈溶液（含0.1%甲酸）作为流动相B,梯度洗脱,流速为0.5 mL•min^-1,柱温为50 ℃,进样器温度为5 ℃,进样体积为10 μL,采用多反应监测（MRM)模式,对盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔进行定量检测。结果 N-亚硝基普萘洛尔在1～20 ng•mL^-1范围内具有良好的线性关系。低、中、高3个浓度的加样回收率（n=3）在98.4%～103.2%之间,RSD≤2.7%。检测限和定量限分别为0.09 ng•mL^-1和0.3 ng·mL^-1。检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔含量为1.8 μg•g^-1。结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔,为盐酸普萘洛尔缓释片的质量控制提供参考。     

气相色谱串联质谱法测定二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中N-亚硝基二甲胺的含量

目的:建立了二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)的测定方法。方法:采用气相色谱-三重四级杆质谱仪,以多反应监测模式(MRM)进行测定,按外标法定量。仪器条件:EI源温度:230℃;电子能量:70 eV;碰撞气:高纯氮气,碰撞气流速:1.5 mL/min。载气:高纯氦气,载气流速为1.0 mL/min。结果:NDMA在0.243~48.626 ng/mL的浓度范围内呈良好的线性相关,相关系数(R²)大于0.9997,方法检出限均为0.005μg/g,定量限为0.01μg/g,平均回收率为92.41%~101.02%(n=9),RSD为2.4%,重复性试验RSD(n=6)为3.0%,NDMA在定量限浓度及限度浓度的精密度试验RSD(n=6)分别为4.2%和3.2%。结论:方法适合用于二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中基因毒性杂质NDMA的检测。     

Q-Orbitrap高分辨质谱测定盐酸法舒地尔中的基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯

目的:建立HPLC-Q-Orbitrap方法测定盐酸法舒地尔中的基因毒性杂质5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯。方法:采用Thermo Scientific Hypersil GOLD C8色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min^-1,柱温30℃;以Q-Orbitrap高分辨质谱检测,采用ESI离子源,正离子模式,Full MS-SIM模式扫描,扫描范围m/z 223~239。采用提取离子流色谱定量,分别选择m/z224.03759(质量偏差<5×10-6)和m/z 238.05324(质量偏差<5×10-6)作为5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯的定量离子。结果:5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯质量浓度在1.0~30 ng·m L^-1范围内线性关系良好(r分别为0.9983、0.9990);检测下限分别为0.66、0.30μg·g^-1,定量下限分别为2.0、1.0μg·g^-1;加样回收率(n=6)分别为95.4%、97.1%,RSD分别为2.1%、1.9%。6批样品中均未检出5-异喹啉磺酸甲酯和5-异喹啉磺酸乙酯。结论:本方法简便、快速、准确、灵敏,可用于盐酸法舒地尔的质量控制。     

硝西泮及其片剂中有关物质的液相色谱电喷雾质谱联用分析

目的:建立HPLC-MS法测定硝西泮原料及片剂中3种杂质。方法:采用Shimadzu VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈:10 mmol·L-1磷酸二氢钾(45:55)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱后分流;进样量10μL;DAD检测器,检测波长220 nm。电喷雾电离源(ESI),雾化器干燥气流速8 mL·min-1,干燥气温度:350℃,静电喷雾电压3500 V;质谱扫描质量范围50～1200 m/z。采用全扫描一级质谱和选择离子全扫描二级质谱(MS/MS)2种方式同时测定。结果:硝西泮与各杂质峰均能良好的分离,杂质A、B、C在0.24～30.0μg.mL-1浓度范围内与峰面积成良好的线性关系,回归方程分别为Y=3.411×104X+384.1,Y=2.411×104 X-258.4,Y=8.982×104 X-1.378×103,r均为1.000,最低检测限分别为0.24 ng、0.36 ng、0.24 ng,高、中、低三浓度的平均回收率分别为100.8%,99.4%,101.3%;并对硝西泮的未知降解产物进行结构分析。结论:该方法简便、灵敏、专属性好,硝西泮和3种已知杂质有良好的分离。     

LC-MS法测定塞来昔布中2个苯肼类基因毒性杂质

目的:建立液相色谱-质谱(LC-MS)法测定塞来昔布中对肼基苯磺酰胺(SHH)和对甲苯腙基苯磺酰胺(MAP) 2个苯肼类基因毒性杂质。方法:采用Thermo BDS Hypersil C18(100 mm×4.6 mm,2.4μm)色谱柱,以0.1%甲酸铵-0.1%甲酸水溶液∶甲醇(90∶10)溶液为流动相A,以甲醇为流动相B进行线性梯度洗脱。样品中加入5%二巯基苏糖醇的醋酸铵缓冲液作为稳定剂,在质谱电喷雾正离子化多反应监测模式下,以内标法进行定量测定。结果:SHH和MAP在20~200 ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.7%(RSD=6.0%,n=9)和97.6%(RSD=5.1%,n=9)。检测限为10 ng·mL^-1,定量限为20 ng·mL^-1,对照溶液和供试品溶液于4℃进样盘放置4 h内稳定。结论:本实验建立的LC-MS测定法适用于塞来昔布中SHH和MAP 2个苯肼类基因毒性杂质的检测。     

注射用磷霉素钠中磷霉素钠二醇物含量测定方法的研究

目的:建立液相色谱串联质谱法和高效液相色谱-示差折光法测定注射用磷霉素钠中的磷霉素钠二醇物含量,并与现行中国药典方法比较,提高对药品的质量控制。方法:液相色谱串联质谱法采用Promosil CN(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为5 mmol.L-1醋酸铵-甲醇(82∶18),采用(-)ESI电离源,多反应监测(MRM)扫描方式,用于定量分析的离子分别为m/z 154.9→80.9(磷霉素二醇物)和m/z 120.9→77.1(内标苯甲酸)。高效液相色谱-示差折光法采用Agilent Zorb-ax NH2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为10.89 g.L-1磷酸二氢钾溶液,流速为1.0 mL.min-1;柱温36℃;检测器温度为35℃。结果:采用液相色谱串联质谱法,二醇物在22.46～359.4 ng.mL-1范围内线性关系良好,定量限为4.492 ng.mL-1,每一样品的分析时间为5 min。采用高效液相色谱-示差折光法,二醇物在0.104～5.205 mg.mL-1浓度范围内线性关系良好,精密度为0.7%,重复性良好。结论:本研究2种方法专属性高、简便、可靠,可用于注射用磷霉素钠的质量研究和质量控制。     

人血浆中卡巴拉汀及其代谢物NAP226-90的LC-MS/MS测定研究

目的：建立LC-MS/MS法同时检测卡巴拉汀及其代谢物NAP226-90血药浓度。方法：血浆经甲基叔丁基醚-二氯甲烷提取预处理,用Phenomenex-curocil PFP（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,0.1%甲酸0.05%甲酸铵溶液-0.1%甲酸0.05%甲酸铵甲醇为流动相,梯度洗脱分离,ESI正离子化三重四极杆质谱MRM测定,检测反应离子对：卡巴拉汀m/z 251.0→206.0、NAP226-90 m/z 166.0→121.0、内标（美托洛尔）m/z 268.4→74.3。结果：卡巴拉汀及NAP226-90血药浓度在0.2～30 ng·mL-1范围内均线性关系良好,定量下限均为0.2 ng·mL-1,经方法学验证符合生物样品测定要求。结论：建立的LC-MS/MS方法可用于重酒石酸卡巴拉汀胶囊人体药动学研究。     

对照品替代法用于贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素含量测定的研究

目的:研究对照品替代法在高效液相色谱法含量测定中的应用,建立以大黄素为替代物测定贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素含量的方法。方法:采用HPLC-DAD和HPLC-MS,通过定性和定量手段分别求得被测成分相对于替代物的计算因子,从而实现以大黄素为替代对照品,测定样品中金丝桃素的含量。色谱条件:色谱柱,Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相,10 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(以醋酸调pH 4)-乙腈梯度洗脱系统;流速,1.0 mL.min-1;柱温,30℃;DAD检测器,检测波长284 nm。质谱条件:色谱柱,Agilent SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相,10 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(以醋酸调pH 4)-乙腈梯度洗脱系统;流速,0.4 mL.min-1;柱温,30℃;MS-ESI正离子模式检测,去溶剂温度300℃,去溶剂气(N2)流速10 L.min-1,雾化气压力241 Pa,毛细管电压4 kV,离子扫描范围为m/z 100～600,选定m/z269.1,503.2,519.2,535.5进行选择性离子扫描(SIM)。结果:对照品替代法与常规的含量测定法测得的结果基本一致。结论:本方法经济、实用、快速、高效,可用于贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏而给含量测定带来的困难,大大降低了分析检测的成本。     

UPLC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平浓度

目的:建立UPLC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平浓度并进行方法验证,应用于室间质评的样品测定。方法:采用UPLC-MS/MS法,以卡马西平-d8为内标,XSelect CSH C18柱(2.1 mm×75 mm,2.5μm)为分析柱,流动相A为含0.05%甲酸的水溶液,流动相B为含0.05%甲酸的乙腈溶液,流速为0.3 mL·min^-1,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,以多反应监测(MRM)正离子模式进行检测,用于定量分析的离子对为m/z 237.1→194.1(卡马西平)、m/z 245.0→202.1(卡马西平-d8)。结果:卡马西平在5~1000 ng·mL^-1范围内线性关系良好(r≥0.9993),批内批间精密度和准确度、回收率和基质效应以及稳定性均符合生物样品测定要求。应用该方法测定的室间质评样品结果全部通过。结论:该方法准确、灵敏、选择性好、重现性高,适用于血浆中卡马西平浓度测定及室间质评。     

LC-MS法检测大鼠血中甲苯磺丁脲含量

目的建立用LC-MS法检测大鼠血中的甲苯磺丁脲的方法。方法 Agilent Zoxbax SB-C18色谱柱,30℃柱温;流动相:0.1%甲酸溶液和乙腈梯度洗脱,流速为0.4 mL·min-1。使用SIM测定甲苯磺丁脲,卡马西平(内标)m/z 237,采用峰面积法定量。结果甲苯磺丁脲在10～1000ng·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9988)。日内精密度RSD和日间精密度RSD均小于8%,回收率均大于80%。结论本方法灵敏度高、专属性强,且操作简单,达到生物样本分析的要求。     

HPLC-MS法测定茄尼醇提取物中主成分及有关杂质含量

目的:建立以高效液相色谱-大气压化学电离质谱联用法测定茄尼醇提取物中茄尼醇及其有关杂质含量的方法。方法:色谱柱为C18,流动相为甲醇-乙醇(50∶50),流速为0.5mL·min-1,柱温为25℃;大气压化学电离源为负离子模式,检测器电压为1.6kV,加热模块温度为200℃,曲形脱溶剂装置温度为250℃,干燥气流速为2.5L·min-1,全扫描质核比范围为m/z150～800。结果:茄尼醇检测浓度的线性范围为0.006～114.0μg·mL-1(r=0.9998);平均加样回收率为99.3%(RSD=1.6%,n=3)。结论:本方法简便快速、灵敏准确,可用于茄尼醇提取物中主成分及有关杂质的含量测定。     

液质联用方法对海狗油大鼠药物动力学的初步研究

目的:应用LC/APCI-MS法检测大鼠血浆中海狗油的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)3个主要成分,为其药动学研究提供灵敏、准确和实用的方法。方法:取血浆样品0.1 mL经甲醇-正己烷(1∶1)沉淀蛋白并萃取后,氮气吹干后进行柱前转酯化衍生,采用Waters C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,以乙腈-水(9∶1)为流动相,流速0.3 mL·min-1,检测波长210 nm,柱温40℃。通过大气压化学电离四极杆质谱,以选择离子监测(SIM)方式进行检测。用于定量分析的EPA甲酯(EPAM)、DHA甲酯(DHAM)、DPA甲酯(DPAM)、十九碳二烯酸甲酯(内标物)的m/z分别为317.30[M+H]+、343.30[M+H]+、345.30[M+H]+、309.20[M+H]+。结果:EPAM、DHAM和DPAM的线性范围均为50～10000 ng.mL-1,定量限为50 ng.mL-1,日内、日间RSD均小于6.6%。对海狗油的大鼠药物动力学初步研究结果表明,EPA、DHA和DPA在连续给药第10 d达到稳态浓度,且时间与给药剂量之间没有关联性;大鼠血浆中EPA、DHA和DPA稳态浓度的高低与给药剂量正相关。结论:该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内EPA、DHA、DPA的药动学研究。