两株牛肝菌内生真菌的分离鉴定及活性初步研究

目的 从牛肝菌中分离内生真菌,并对其活性进行初步研究.方法 采用组织培养法从秦巴山区牛肝菌子实体中分离内生真菌,基于形态特征及ITS系统发育分析对内生真菌进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌为指示菌,检测内生真菌发酵产物的抑菌活性,并对其绿豆芽的抑制活性进行了研究.结果 分离获得2株内生真菌L3和L5,L3和黄瘤孢菌(Hypompces chrysosperums)序列同源性为99％;L5和毛霉属序列同源性为100％;两株菌的形态学特征分别与黄瘤孢菌和毛霉属形态特征一致.结论 内生真菌L3和L5,分别鉴定为黄孢瘤菌和毛霉属;这两株菌发酵液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,对绿豆芽生长均具有抑制作用.     

南极来源嗜/耐冷真菌的多样性及生物活性研究

目的 研究南极来源真菌的多样性及其生物活性。方法 通过形态观察,化学筛选和序列比较,对南极来源的真菌进行排重,依据真菌ITS rDNA基因序列分析比对结果,使用MEGA 5.0软件对排重后的真菌进行鉴定和系统发育分析。采用纸片法进行抑菌活性筛选,采用MTT法进行抗肿瘤活性筛选。结果 南极来源的147株真菌经形态分析,化学排重和序列分析后获得48株代表菌株,ITS基因序列亲缘关系分析结果显示,属于子囊菌门（Ascomycota）的4个目和6个属：Penicillium、Malbranchea、Aspergillus、Cladosporium、Pseudogymnoascus、Emericellopsis。其中,所鉴定的真菌以Penicillium属为优势菌属,占58.9％,12株嗜/耐冷菌在系统发育树中的亲缘关系相近且以Pseudogymnoascus属为优势菌属。通过活性测试筛选显示耐冷真菌具有良好的抑菌和抗肿瘤活性。结论 南极来源菌株具有丰富的种群和生物活性的多样性,是天然产物活性先导化合物的重要生物资源。     

中国南海海绵和珊瑚共附生真菌多样性及其抑菌活性研究

目的揭示中国南海海绵和珊瑚共附生真菌多样性及其抗菌活性。方法采用9种不同的真菌培养基对海绵和珊瑚中的共生真菌进行分离培养和纯化,根据真菌18SrDNA对所分离的真菌进行鉴定,使用MEGA 5.2软件对所分离真菌进行系统发育分析。采用圆形滤纸片法进行抑菌活性筛选。结果从采自南海的6种海绵与3种珊瑚中共分离得到106株真菌菌株,通过形态分析和序列分析排重得到41株独立真菌菌株。18SrDNA序列比对结果分析显示,分别属于子囊菌门(Ascomycota)的11个目和担子菌门(Basidiomycota)的4个目,共计26个属。其中子囊菌门所占比例最高为93.4%,剩下的6.6%为担子菌门。通过抑菌活性筛选显示部分真菌对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌具有广谱抗菌活性。结论本研究揭示了中国南海海绵和珊瑚共附生真菌丰富的种群多样性及部分真菌的抑菌活性,为进一步开发利用海绵和珊瑚共附生真菌及生产活性物质奠定了基础。     

中国南海海绵共附生真菌种群多样性及抑菌活性

目的揭示南海海绵共附生真菌的种群多样性,并筛选具有抑菌活性的真菌菌株。方法采用6种不同的真菌培养基、3个不同培养温度对中国南海10种海绵共附生真菌进行分离培养,并采用牛津杯法进行抑菌活性筛选。结果共分离培养得到177株真菌菌株。基于RFLP分析得到24株代表性菌株,基于18SrRNA基因的分子鉴定证明分别属于子囊菌门(Ascomycota)下的4个目10个属,真菌比例最高的目为Euro-tiales(37.5%)和Hypocreales(41.6%)。部分菌株显示了对革兰阳性细菌和革兰阴性细菌的广谱的抑菌活性。结论揭示的丰富的海绵共附生真菌及其抑菌活性对于深入研究和利用海绵共附生真菌具有重要价值。     

海洋共附生微生物的分离和抗菌活性鉴定

本研究从海参、海胆、海葵、海兔、石莼、羊栖菜、裙带菜分离得到125种共附生海洋微生物,以6种敏感菌为指示菌,从中筛选出具有抑菌活性的细菌21株,放线菌8株,真菌2株。21株抑菌海洋细菌中芽孢杆菌属为7株,占33.3%;弧菌属为11种,占52.2%;其余3株为假单孢杆菌属,占14.5%。8株抑菌海洋放线菌中链霉菌属为5株,占62.5%;小单孢菌属为3株,占36.5%。2株抑菌海洋真菌均为青霉属。     

金银花内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 从药用植物金银花中筛选出对指示菌有抑制作用的内生真菌,并对其抑菌特性进行研究.方法 采用组织块法对金银花内生菌进行分离;用形态学方法对内生真菌进行鉴定;以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,对内生真菌发酵产物进行抑菌试验,并对活性物质的热稳定性进行了研究.结果 分离获得38株内生真菌,鉴定为5目、5科、8个属;其中2株有抑菌活性,且发酵液具有良好的热稳定性.结论 金银花组织中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用.     

忽地笑鳞茎中产加兰他敏内生真菌的分离与鉴定

目的筛选产加兰他敏的内生真菌,为生产加兰他敏寻找新的途径。方法以忽地笑鳞茎为实验材料,分离内生真菌,利用HPLC对其发酵代谢产物进行检测,筛选能产生加兰他敏的菌株。结果从忽地笑鳞茎中分离出5株内生真菌,经HPLC分析,真菌GF-1能产生加兰他敏。经初步鉴定,GF-1为半知菌亚门(Deuteromycotina)青霉属(Penicillium LK.ex Fries)。结论忽地笑内生真菌有希望成为生产加兰他敏的新资源。     

穿龙薯蓣内生真菌分离鉴定及其抑菌活性研究

目的 分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,并对分离得到的内生真菌进行抑菌活性筛选及分类鉴定。方法 采用组织分离法纯化穿龙薯蓣内生真菌,采用载片培养法、挑片培养法、插片培养法,对照《真菌鉴定手册》和《半知菌纲手册》进行初步鉴定;以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、白色葡萄球菌Staphylococcus albus、柠檬色葡萄球菌Staphylococcus citreu、四联球菌Micrococcus tetragenus、大肠杆菌Escherichia coli、伤寒杆菌Salmonella typhi、铜绿色假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、变形杆菌Bacterium termo、肺炎杆菌Bacillus endocarditidis capsulatus、福氏痢疾杆菌Shigella flexneri、乙型副伤寒杆菌Bacterium paratyphosum B作为受试对象,检测内生真菌菌株发酵液以及菌丝提取物的抑菌活性,应用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行分类鉴定。结果 从穿龙薯蓣叶片中分离得到52株内生真菌,根据形态学特征将10株产孢子的内生真菌初步鉴定为2个目、3个科、9个属;其中有3株内生真菌的菌丝提取物具有广谱抗菌活性,结合形态学和分子生物学特征鉴定C37菌为赤霉属Gibberella真菌,C30和C50菌为链格孢属Alternaria真菌。结论 穿龙薯蓣叶片中存在具有抑菌活性的内生真菌,具有开发抑菌生物制剂的潜力。     

黄河三角洲植物真菌的分离、活性菌株的筛选及活性产物的鉴定

目的 从黄河三角洲植物中分离真菌,筛选具有抗菌或抗肿瘤活性菌株,分离鉴定活性成分。方法 蔗糖密度梯度法分离菌株,对其发酵物进行抗菌活性和细胞毒活性筛选,采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱对发酵产物进行分离、纯化,运用核磁共振、质谱等手段鉴定化合物的结构。结果 从黄河三角洲的9种植物样品中分离纯化真菌136株,筛选得到具有抑菌活性菌株25株、具有细胞毒活性菌株17株,并从1株枝孢属真菌Cladosporium sp. OUCMDZ-2046的发酵产物中分离鉴定了1个对白色念珠菌和人乳腺癌细胞株MCF-7具有抑制作用的化合物：桔青霉素。结论 黄河三角洲的植物真菌具有开发为药用活性菌株的潜力。     

一株采自新疆虫草体内的真菌的分离鉴定及其抑菌作用研究

目的研究从新疆虫草(Ophiocordyceps gracilis(Grev.)G.H.Sung,J.M.Sung,Hywel-Jones&Spatafora)体内分离得到一株真菌SFYC003。方法经生理生化特征、形态学和ITS序列对比分离鉴定菌株,采用滤纸片法研究了该菌株的菌体及其发酵液对6株供试菌的抑制作用。结果所得菌株属于青霉属真菌变灰青霉(Penicillium canescens)的一个变种,命名为SFYC003,其对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌供试菌的抑菌活性较强。结论菌株SFYC003具有进一步研究及开发利用的潜在价值。     

利用生物模型-稻瘟霉筛选活性菌株

目的从土壤真菌中筛选有抗真菌、抗肿瘤活性的菌株。方法以稻瘟霉分生孢子以及菌丝形态变化为指标 ,并通过稳定性考查 ,进行活性筛选。结果从云南、江西等地土壤中分离出 737株真菌 ,对其中的 14 2株活性菌株进行多次反复筛选 ,从中得到 6株活性、批次稳定性和遗传稳定性良好的菌株。进行温度稳定性考查的过程中发现多色青霉、黑粘座曲霉、产紫青霉三株菌发酵液活性基本不受温度影响。结论稻瘟霉是良好的筛选抗真菌、抗肿瘤活性菌株的初筛模型     

暗紫贝母产生物碱内生真菌的筛选及生物碱抑菌活性的测定

目的从暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia内生真菌中筛选产川贝母类生物碱及产活性生物碱的菌株。方法利用生物碱沉淀试剂和薄层层析(TLC)技术检测发酵液中的生物碱,采用平板打孔法分别测定生物碱碱粗提液的抑菌活性,结合形态学特征和ITS序列鉴定筛得的真菌。结果筛得5株能产生物碱的内生真菌(A1、A2、A3、A11、A14),其总生物碱对金黄色葡萄球菌均有抑制作用。其中,A1、A3、A14为镰刀属Fusarium sp.真菌,A2、A11属于粘帚霉属Gliocladium sp.真菌。结论筛选出的内生真菌产生的生物碱与暗紫贝母的不尽相同,但其抑菌效果效果显著,值得进一步研究。     

不同生长期川贝母内生真菌的多样性

目的 比较不同生长期川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don内生真菌的差异性,为其品质评价提供基础.方法 采用纯培养法对不同生长期的川贝母内生真菌鳞茎中的内生真菌进行分离和鉴定.结果 分别分离得到一年生内生真菌10株,鉴定为8个属;一年生内生真菌8株,鉴定为7个属;二年生内生真菌13株,鉴定为9个属;三年生内生真菌48株,鉴定为14个属;四年生内生真菌11株,鉴定为7个属.结论 不同生长期川贝母的内生真菌在类别和数量上存在着显著差异,其中树儿子内生真菌在类别和数量上最多,这与川贝母的品质有密切的联系.     

土壤丝状真菌AF-5、SQ_2-17菌株的筛选及其抗菌活性的研究

从辽宁、山东等省采得的 45份土样进行了菌种分离及纯化 ,共获得 482株丝状真菌 ,利用以稻瘟霉分生孢子形态异常作为生物活性筛选模型 ,对其进行了初筛 ,初步得到 2 42株活性菌株 ,经多次复筛获得了既对稻瘟霉菌株有较强活性又能抑制一些病原真菌生长的 16株活性菌株。其中AF 5、SQ2 17菌株能使稻瘟霉孢子高度变形 ,同时又具有较强的抗病原真菌作用及良好的遗传稳定性。     

三角叶黄连内生真菌的多样性及其抑菌活性的筛选

目的分离和鉴定三角叶黄连Coptis deltoidea根状茎、叶柄及叶中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用平板法分离菌株,对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基的颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定;选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌的发酵上清液进行体外抑菌试验。结果从三角叶黄连中分离获得的297株内生真菌,分属2目、3科、32属;抑菌实验表明:22株内生真菌的发酵液对指示菌均有不同程度的抑制作用,其中6号内生真菌同时对两种致病菌的抑菌效果明显。结论三角叶黄连内生真菌在种类、不同部位呈多样性分布,且部分内生真菌的代谢产物具有较强的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

海藻真菌的分离及其抗肿瘤活性筛

目的从海藻中分离海藻真菌并通过抗肿瘤活性筛选获得活性菌株。方法从样品中选择性分离得到真菌,并采用海虾生物致死法和人体慢性髓性白血病细胞K562为筛选模型对所得真菌的发酵产物进行抗肿瘤活性筛选。结果从黄海海岸潮间带采集到的28种海藻中分得221株真菌,经筛选得到具有海虾生物致死及细胞毒活性菌株各8株。结论实验结果表明,海藻真菌是寻找抗肿瘤活性物质的重要资源。     

银杏内生真菌中产生银杏内酯类菌株的筛选

目的 从银杏内生真菌中筛选能够产生银杏内酯类物质的菌株.方法 进行了TLC检测和抑制血小板聚集活性检测.结果 7株内生真菌在两种检测中均表现出阳性结果.结论 7株内生真菌代谢液中具有银杏内酯C或其结构类似物.     

丛生形盔珊瑚共附生真菌的分离及其抗菌活性的筛选

目的本试验旨在研究珊瑚共附生真菌抗菌活性。方法采用96孔板培养法结合酶标仪测定。以6种常见的致病或致食品腐败的细菌为指示菌,对其共附生真菌次级代谢产物进行抗菌活性筛选,对抗菌能力及抗菌谱进行研究。结果结果表明:共分离丛生形盔珊瑚共附生真菌19株,均具有不同程度的抗菌活性。高活性菌株占52.63%,其中4-4、4-5两菌株表现出良好的抗菌活性。结论丛生形盔共附生真菌是潜在的抗菌资源,具有较高的应用潜力和综合开发前景。     

酵母样真菌的分离鉴定与体外药敏试验

本文报告采用KB法对161株分离自本院临床标本的酵母样真菌进行药敏试验,结果,161株酵母样真菌对唑类抗真菌药氟康唑、伊曲康唑、酮康唑的敏感率分别为95．7％、94．4％、85．1％。表明酵母样真菌对氟康唑、伊曲康唑的敏感率最高,其次是酮康唑,制霉菌素的敏感率最低仅为65．8％。