岩大戟内酯B通过阻断PI3K/Akt/NF-κB通路抑制结肠癌细胞的增殖和转移

目的:研究岩大戟内酯B(JB)对结肠癌HT-29细胞增殖和转移的抑制作用及其作用机制。方法:用不同浓度JB处理HT-29细胞,采用MTT法检测细胞增殖率;平板克隆实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞周期变化;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;免疫荧光法和Western blotting法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白vimentin、锌指蛋白(Snail)1、Snail2、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达;Western blotting法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达水平。100μg/L IGF-1组和100μg/L IGF-1+20μmol/L JB组分别处理HT-29细胞,Western blotting法检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达变化。结果:JB抑制HT-29细胞增殖作用浓度依赖性,其作用24 h的IC 50为52.68μmol/L;JB呈浓度依赖性地降低HT-29细胞的克隆形成率(P<0.05);与对照组相比,JB处理后的HT-29细胞G0/G1期比例显著增高,S期细胞比例明显下降;JB可显著抑制HT-29细胞的体外迁移、侵袭能力(P<0.05);JB作用后的HT-29细胞E-cadherin蛋白水平升高,vimentin、Snail1、Snail2、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05);IGF-1+JB组p-PI3K、p-Akt、与p-NF-κB P65蛋白的表达水平较IGF-1组显著下降(P<0.05)。结论:JB在体外能抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,抑制HT-29迁移和侵袭,调控上皮-间质转化(EMT)及MMPs,其机制可能与阻断PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

齐墩果酸对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响及其作用机制研究

目的:探讨齐墩果酸抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的作用及其机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度齐墩果酸(10、20、40、60、80、100μmol/L)作用12、24、36、48 h对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验观察低、高剂量齐墩果酸(20、40μmol/L)作用24 h对SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响;采用Western Blotting法检测低、高剂量齐墩果酸对SKOV3细胞中核因子κB p65(NF-κB p65)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、上皮钙黏着蛋白E(E-cadherin)等蛋白表达的影响;运用脂多糖(LPS)诱导和NF-κB p65质粒转染SKOV3细胞,采用Western blotting法和实时荧光定量PCR考察低、高剂量齐墩果酸对NF-κB/PRL-3通路相关蛋白及其mRNA表达的影响。结果:随着齐墩果酸给药浓度的增加和作用时间的延长,SKOV3细胞的增殖能力有随之降低的趋势,各剂量组的细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。低、高剂量的齐墩果酸组的迁移和侵袭细胞数均显著减少(P<0.05或P<0.01),且其NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。经LPS刺激后,LPS模型组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其m RNA的相对表达量较对照组显著升高,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);低、高剂量齐墩果酸组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其mRNA的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。在NF-κB p65过表达SKOV3细胞中,低、高剂量齐墩果酸同样能够显著下调NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:齐墩果酸能够通过调控NF-κB/PRL-3信号通路来抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭、转移。     

拉米夫定对HepG2.2.15细胞MMP-9及p53表达的影响

目的通过检测拉米夫定作用于人肝癌细胞系(Hep G2.2.15)后对其基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及p53表达的变化,探讨拉米夫定对原发性肝癌发生发展的抑制作用。方法不同浓度(100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml)拉米夫定作用于Hep G2.2.15细胞不同时间(3 d及6 d)后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖活性;双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞培养上清及胞质中MMP-9及p53蛋白含量。结果经拉米夫定作用后的Hep G2.2.15细胞生长未受明显抑制;细胞中MMP-9及p53的表达均出现不同程度降低。结论拉米夫定通过降低Hep G2.2.15细胞中MMP-9及p53的表达来抑制肝癌的侵袭及转移。     

连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 以肺癌NCI-H226细胞为研究对象,将细胞分为对照组,连翘醇提物低、中、高浓度组（5、10、20 mg/mL）,激活剂组[10 mg/mL连翘醇提物+0.5μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路激活剂PMA],抑制剂组（10 mg/mL连翘醇提物+10μmol/L NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082）,阳性对照组（20μg/mL顺铂）,除对照组细胞不作干预外,其余各组细胞加入相应药物培养24 h。检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,并计算增殖率、迁移率、侵袭细胞数;检测细胞中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平。结果 与对照组比较,连翘醇提物各浓度组和阳性对照组细胞的增殖率、迁移率、侵袭细胞数以及细胞中p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与连翘醇提物中浓度组比较,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数及细胞中上述蛋白表达水平均显著降低（P&l...     

丙泊酚对体外内毒素激活人中性粒细胞NF-κB亚单位p65蛋白的影响

目的观察丙泊酚对内毒素(LPS)激活后人体中性粒细胞(PMN)NF-κB p65的表达及对PMN凋亡的影响。方法采集20例健康志愿者外周静脉血,分离PMN后分为五组:C组,加入生理盐水作为对照;LPS组,加入LPS 100ng/L);P1组,LPS+丙泊酚2μg/ml;P2组,LPS+丙泊酚4μg/ml;P3组,LPS+丙泊酚8μg/ml。孵育2.5h后,提取RNA;用RT-PCR法检测p65mRNA,Western blot检测p65蛋白含量,流式细胞术检测PMN凋亡。结果 LPS 100ng/L可以显著激活PMN,使p65表达大量增加。实验剂量的丙泊酚均可不同程度抑制LPS激活后PMN p65的表达(P<0.05);2-8μg/ml浓度的丙泊酚可剂量依赖性增加LPS导致的PMN凋亡(P<0.05或P<0.01)。结论丙泊酚2-8μg/ml可抑制PMN p65的激活,促进LPS激活后的PMN凋亡。     

蜂毒肽对人肝癌细胞SMMC-7721迁移与侵袭的影响

目的探讨蜂毒肽对人肝癌细胞SMMC-7721迁移与侵袭的影响,并初步研究其作用机制。方法浓度为2、4、8、12和16μg/ml的蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测蜂毒肽对SMMC-7721细胞增殖活性的影响,细胞划痕实验观察对细胞迁移能力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭能力。Western blot法检测细胞内MMP-9和NF-κB p65蛋白表达变化。结果与对照组相比,2～16μg/ml的蜂毒肽作用SMMC-7721细胞后,细胞逐渐圆缩,崩解或死亡细胞增多,细胞存活率下降,差异有统计学意义(P0.05)。划痕实验结果显示,蜂毒肽作用后细胞迁移能力明显下降。Transwell小室结果显示,蜂毒肽对SMMC-7721细胞侵袭能力具有显著抑制作用,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,蜂毒肽处理组细胞MMP-9和NF-κB p65蛋白表达呈现下降趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论蜂毒肽对SMMC-7721细胞迁移与侵袭具有抑制作用,其机制可能通过抑制NF-κB通路调控MMP-9的表达。     

栀子苷对胰岛素抵抗HepG2细胞的胰岛素受体及核因子κB的影响

目的 研究栀子苷对人肝癌株细胞(Hep G2)细胞胰岛素抵抗(IR)的影响及其可能机制。方法 以高浓度胰岛素建立Hep G2胰岛素抵抗模型。通过葡萄糖试剂盒测定法,确定建立胰岛素抵抗模型所需胰岛素的浓度及作用时间。将Hep G2细胞分为3组,对照组、模型组、栀子苷组(62.5μg·m L-1作用24 h),用RT-PCR检测细胞内胰岛素受体(InsR)、核因子κB(NF-κB)的表达。结果 100 nmol·L-1胰岛素处理24 h为建立胰岛素抵抗Hep G2细胞模型的最佳条件。药物组作用后,与模型组相比,葡萄糖消耗量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。药物组InsR mRNA的表达量明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),药物组NF-κB mRNA的表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 栀子苷可以改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗,主要是通过下调NF-κB的表达、上调InsR的表达来发挥其药物作用。     

姜黄素抑制NF-κB信号对人肝癌HepG_2细胞株增殖的影响

目的探讨姜黄素对Hep G2细胞株增殖的影响及其机制。方法不同浓度的姜黄素(0、1.0、3.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μmol·L-1)处理Hep G2细胞株不同时间后,MTT法检测肝癌细胞株增殖情况;RT-PCR检测NF-κBp65和h TERT m RNA表达;Western blot检测h TERT蛋白表达,细胞免疫荧光法检测Hep G2肝癌细胞株中NF-κB活性。结果姜黄素能明显抑制Hep G2细胞的增殖,且呈时间与浓度依赖性;姜黄素能显著抑制NF-κBp65 m RNA表达及活性,同时伴有h TERT m RNA及蛋白表达降低。结论姜黄素抑制肝癌细胞株增殖,可能通过抑制NF-κBp65调控h TERT表达,进而下调端粒酶活性有关。     

Effects of propofol on in vitro LPS-activated human polymorphonuclear nuclear transcription factorkappaB subunit p65 protein

目的 观察丙泊酚对内毒素(LPS)激活后人体中性粒细胞(PMN) NF-κB p65的表达及对PMN凋亡的影响.方法 采集20例健康志愿者外周静脉血,分离PMN后分为五组:C组,加入生理盐水作为对照;LPS组,加入LPS100ng/L);PI组,LPS+丙泊酚2μg/ml;P2组,LPS+丙泊酚4μg/ml;P3组,LPS+丙泊酚8μg/ml.孵育2.5h后,提取RNA;用RT-PCR法检测p65mRNA,Western blot检测p65蛋白含量,流式细胞术检测PMN凋亡.结果 LPS 100ng/L可以显著激活PMN,使p65表达大量增加.实验剂量的丙泊酚均可不同程度抑制LPS激活后PMN p65的表达(P＜0.05);2-8μg/ml浓度的丙泊酚可剂量依赖性增加LPS导致的PMN凋亡(P＜0.05或P＜0.01).结论 丙泊酚2-8μg/ml可抑制PMN p65的激活,促进LPS激活后的PMN凋亡.     

牛膝-杜仲药对对小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用

目的研究牛膝-杜仲药对的抗炎作用。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为空白组、模型组、牛膝组(800μg/mL)、杜仲组(800μg/mL)和牛膝-杜仲药对低、中、高浓度组(400、800、1 600μg/mL),除空白组和模型组外,其余各组加入相应药物培养6 h后,空白组继续加入培养基,模型组加入10μg/mL脂多糖(以复制炎症模型),其余各组加入相应药物和10μg/mL脂多糖。检测各组细胞中炎症因子[一氧化氮(NO)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的水平,并采用金氏公式评价牛膝、杜仲的联合作用;检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)的表达水平和NF-κB p65、IκB激酶(IKK)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)、胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N端激酶(JNK)的磷酸化水平。结果与空白组比较,模型组细胞中炎症因子水平以及i NOS、COX-2蛋白表达水平和NF-κB p65、IKK、p38 MAPK、ERK、JNK蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.01),IκBα蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);经牛膝-杜仲药对干预后,细胞中炎症因子水平以及上述蛋白的表达水平或磷酸化水平大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01),且牛膝-杜仲药对具有协同作用。结论牛膝-杜仲药对对RAW264.7细胞具有协同抗炎作用,其作用机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路相关蛋白表达有关。     

大蒜素抑制胃癌细胞上皮-间质转化作用及其机制

目的研究大蒜素对胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)的抑制作用及其机制。方法以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养人胃癌细胞株HGC-27,分别采用大蒜素(3μg·L^-1)联合白细胞介素6(IL-6,50 ng·mL^-1)、大蒜素(3μg·L^-1)、IL-6(50 ng·mL^-1)处理,另设空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组胃癌HGC-27细胞E-cadherin、vimentin及核因子-κB(NF-κB)P65的mRNA表达;Wst-3-2H-四唑单钠盐(CCK-8)实验、细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测各组胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-qPCR显示,与空白对照组比较,大蒜素组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin及NF-κB mRNA表达下调;IL-6组E-cadherin mRNA表达下调,vimentin及NF-κB P65的mRNA表达上调(均P<0.05)。与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin与NF-κB mRNA表达下调(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,与空白对照组比较,大蒜素组胃癌HGC-27细胞被明显抑制,IL-6组具有明显增殖优势;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组细胞被抑制(均P<0.05);划痕实验中,与空白对照组比较,12,24 h大蒜素组胃癌细胞迁移能力明显减弱;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组划痕愈合百分比缩小(均P<0.05)。细胞侵袭实验中,与空白对照组比较,大蒜素组侵袭数目减少,IL-6组侵袭数目明显增多;大蒜素联合IL-6组细胞侵袭能力较IL-6组明显减弱(均P<0.05)。结论大蒜素能明显抑制胃癌细胞EMT,减弱其增殖、迁移及侵袭能力,该过程可能与调节NF-κB信号通路有关。     

阿加曲班对脑出血模型大鼠脑损伤的改善作用

目的:研究阿加曲班对脑出血模型大鼠脑损伤的改善作用。方法:取50只SD大鼠随机均分为正常对照(等量生理盐水)组、模型(等量生理盐水)组和阿加曲班低、中、高剂量(0.75、1.5、3 mg/kg)组,除正常对照组外其余各组大鼠复制脑出血模型。复制模型30 min后各组大鼠ip给予相应药物,每天1次,连续给药3 d。处死大鼠,检测各组大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)含量,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达和核转录因子κB(NF-κB)p65、IκBα的磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β含量增加,Caspase-3活性和MMP-2、MMP-9、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,NF-κB p65、IκBα磷酸化水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,阿加曲班低、中、高剂量组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β含量减少,Caspase-3活性和MMP-2、MMP-9、Bax蛋白表达减弱,Bcl-2蛋白表达增强,NF-κB p65、IκBα磷酸化水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且与剂量呈正相关。结论:阿加曲班呈剂量依赖性地抑制脑出血模型大鼠炎症因子分泌及脑组织细胞凋亡,其作用可能与NF-κB信号通路有关。     

甘草总黄酮通过调控MAPK/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应的抑制作用

摘要：目的:探讨甘草总黄酮通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的抑制作用。方法:体外分离培养原代HGF,以5μg·ml-1?LPS处理后,采用CCK-8实验检测0,1.5,3,6,12,24μg·ml-1甘草总黄酮对HGF细胞活力的影响,筛选出甘草总黄酮适合的剂量和作用时间。体外培养原代HGF,随机分为对照组(不进行任何药物处理)、LPS组(5μg·ml-1)、甘草总黄酮低剂量(6μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)组、甘草总黄酮高剂量(12μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)组、甘草总黄酮高剂量(12μg·ml-1)+LPS(5μg·ml-1)+C16-PAF(MAPK激活剂,4μmol·L-1)组。采用CCK-8实验、划痕实验分别检测各组细胞活力和迁移率;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组细胞炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、环氧合酶-2(COX-2)释放水平;免疫印迹法检测各组细胞IL-6、IL-8、COX-2、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、趋化因子2(CCL2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:甘草总黄酮可提高LPS诱导的HGF细胞活力,与药物剂量及作用时间呈正相关。与对照组相比,LPS组细胞活力和迁移率显著降低(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)/ERK1/2、p-c-Jun N-末端激酶(JNK)/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,甘草总黄酮低、高剂量+LPS组细胞活力和迁移率均显著升高(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及TNF-α表达均显著降低(P<0.05),且甘草总黄酮低、高剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。与甘草总黄酮高剂量+LPS组相比,甘草总黄酮高剂量+LPS+C16-PAF组细胞活力和迁移率显著降低(P<0.05),IL-6、IL-8及COX-2的释放量、IL-6、IL-8、COX-2、ICAM-1、CCL2、MMP-2及MMP-8蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65及TNF-α显著升高(P<0.05)。结论:甘草总黄酮可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路而降低炎性因子表达,并下调ICAM-1、CCL2、MMP-2、MMP-8蛋白表达,抑制LPS诱导的炎症,促使HGF生长和迁移。     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其机制

研究狼毒大戟中没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行探讨。采用细胞与Matrigel黏附实验,Transwell小室检测EG对人乳腺癌MDA-MB-231细胞黏附、侵袭和运动能力的影响。RT-PCR检测EG对MMP-2、MMP-9的m RNA表达的影响;Western blot法检测EG对Akt-NF-κB信号转导通路蛋白表达的变化。结果显示,EG在体外可显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、运动以及黏附能力(P<0.05)。EG可抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平,抑制Akt-NF-κB信号转导通路中的Akt磷酸化和NF-κB蛋白表达。因此认为EG在体外具有一定的抑制乳腺癌细胞侵袭迁移的作用,其机制与抑制MMP-2、MMP-9的m RNA水平、抑制Akt磷酸化过程和NF-κB蛋白表达有关。     

EGb761对NMB诱导的小鼠妊娠子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6表达的影响

目的探讨银杏叶提取物EGb761对神经调节素B(Neuromedin B,NMB)诱导的分娩期小鼠子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6表达的影响。方法应用原代培养的、NMB受体(Neuromedin B receptor,NMBR)表达阳性的分娩期小鼠子宫平滑肌细胞,联合NMBR和核因子κB(Nuclearfactor kappa B,NF-κB)p65的RNA干扰技术、real-time PCR和磷酸化ELISA等方法,确定EGb761对NMB诱导的小鼠子宫平滑肌细胞中NF-κB和IL-6表达的影响。结果高浓度的EGb761(100 mg.L-1)组,NF-κB p65DNA结合活性明显低于对照组及低浓度组(P<0.01),中、低浓度EGb组与对照组比较差异均无统计学意义。高浓度的EGb761预处理,可明显下调NMB诱导的子宫平滑肌细胞中NF-κB活性和IL-6的表达(P<0.01),且二者的变化呈正相关(r=0.892,P<0.01)。EGb761对NMB诱导的NF-κB活性和IL-6表达的调节作用可被NMBR及NF-κB基因沉默所阻断,且沉默两基因的阻断效率无差异。结论 EGb761可借助NMBR通路,抑制NF-κB活性和IL-6表达的上调,影响平滑肌细胞的活动。     

阻断p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对高糖培养肾小球系膜NF-κB信号通路调控影响

目的:探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)信号通路对高糖培养肾小球系膜NF-κB信号通路调控影响。方法:大鼠系膜细胞株分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L,对照组),高糖浓度(25 mmol/L,高糖组)及25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L p38 MAPK特异性抑制剂SB203580(SB组)。CCK-8测定系膜细胞增殖;Phospho-ELISA法分别检测胞浆及胞核内p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白和总NF-κBp65、活性NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(S276)表达。结果:与正常对照组比较,高糖组系膜细胞出现增殖增加;胞浆及胞核内磷酸化p38MAPK蛋白表达上调;胞核内NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB的表达增加;SB203580干预则能逆转这一变化。结论:阻断p38 MAPK信号通路能下调高糖培养的系膜细胞NF-κB信号通路的活化,进而抑制系膜细胞的异常增殖。     

姜黄素对前列腺癌PC-3M细胞抗侵袭作用的研究

为探讨姜黄素对前列腺癌PC-3M细胞抗侵袭作用,将0～40μmol/L姜黄素分别处理PC-3M细胞24h后,Westernblot法检测MMP-2和TIMP-2蛋白表达,免疫组化SP法检测细胞内NF-κB蛋白的表达水平。结果表明,姜黄素可下调MMP-2和上调TMP-2的表达,抑制NF-κB的表达。结论：姜黄素通过下调MMP-2和上调TIMP-2的蛋白表达发挥抗侵袭作用,抑制NF-κB的表达可能是抗侵袭作用的机制之一。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

白杨素对TNF-α诱导慢性暴露TGF-β卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响

目的研究白杨素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导慢性暴露转化生长因子-β(TGF-β)卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响,并探讨其作用机制是否涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。方法 TNF-α(10μg·L~(-1))处理TGF-β(5μg·L~(-1))预暴露12 d的卵巢癌OVCAR-3细胞24 h,球形成率测定法检测不同浓度(5.0、10.0、20.0μmol·L~(-1))白杨素对球形成率的影响;Western blot检测NF-κB(p65)蛋白表达;NF-κB(p65)siRNA转染探讨作用机制。结果 TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理增高OVCAR-3细胞系球形成率。白杨素能有效地拮抗致炎因子诱导卵巢癌细胞自我更新作用,呈剂量依赖性(P<0.05),并伴随着NF-κB(p65)蛋白表达下调。与对照siRNA相比,NF-κB(p65)siRNA转染OVCAR-3细胞NF-κB(p65)蛋白表达下调,并明显增强白杨素抑制球形成作用。结论下调NF-κB(p65)蛋白表达参与白杨素抑制TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理诱导卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成作用。     

黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇通过STAT3-NF-κB途径对胃癌细胞的作用研究

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇对胃癌细胞的作用及其可能的机制。方法黄芪甲苷Ⅳ和紫杉醇按给药剂量分为0μg/ml组、5μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、40μg/ml组、80μg/ml组和160μg/ml组处理胃癌细胞AGS。CCK-8试剂盒检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2和STAT3-NF-κB途径相关蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果黄芪甲苷Ⅳ在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,黄芪甲苷Ⅳ IC_(50)=63.99μg/ml;紫杉醇在10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,紫杉醇IC_(50)=40.08μg/ml。与对照组相比,黄芪甲苷Ⅳ组、紫杉醇组和联合组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05);与联合组比较,黄芪甲苷Ⅳ组和紫杉醇组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能是通过抑制STAT3-NF-κB途径实现的。