血清纤维结合蛋白的酶免疫检测法

目的建立血清纤维结合蛋白(Fn)含量的酶免疫分析(EIA)检测方法。方法利用现有Fn检测试剂盒建立Fn的EIA测定法,并对所建立的方法从灵敏度、精密度、特异性、重复性等方面进行方法学评价。结果该法灵敏度为11．69ml／L,线性范围为50～300mg／L,批内变异系数为 3．82％,批间变异系数为5．10％,回收率97．7％。肺结核组及正常对照组血清Fn含量分别为 (188．82±5．51)mg／L和(275．25±18．11)mg／L,两组间差异有显著性意义(P<0．01);肺结核稳定期患者血清Fn显著高于进展期及好转期(P<0．05)。结论该方法线性范围适宜,准确度、精密度较好,符合临床检验工作要求。     

免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白A的钩状效应及其解决方案

目的探讨研制的血清淀粉样蛋白A(SAA)试剂盒的钩状效应及其解决方法。方法以83个西门子定值血清为研究对象,分析研制的SAA试剂盒的线性范围、准确度和精密度等性能;用试剂盒检测超高值血清样本,验证是否存在钩状效应,并研究稀释法能否解决钩状效应。结果 SAA试剂盒线性范围为1～200 mg/L,测定值与样本定值之间的偏差在20%以内,精密度CV均3.0%。浓度超出200 mg/L样本的实测值明显低于定值,浓度范围在1～1000 mg/L的拟合曲线未出现明显的下降趋势,而1～2000 mg/L、1～3000 mg/L拟合曲线出现明显的下降趋势,存在钩状效应。用稀释法测定异常值样本,测定值与定值相近。结论所发现的非正常测定值由钩状效应所致,稀释法能够解决钩状效应问题。     

免疫透射比浊法β2-微球蛋白试剂盒的性能评价

目的 了解免疫透射比浊法β2-微球蛋白试剂盒的性能指标。方法 测定该试剂盒的检测下限、精密度、准确度、线性范围。结果 免疫透射比浊法β2-微球蛋白试剂盒的检测下限为0．09mg／L，批内CV小于4％，批间CV小于8％，准确度为99．29％，线性范围为0．2～18mg／L。结论 免疫透射比浊法β2-微球蛋白试剂盒可以满足临床检测的需要。     

免疫增强透射比浊法测定高敏C反应蛋白试剂盒方法学评价

目的 评价免疫增强透射比浊法测定高敏C反应蛋白(CRP)试剂盒的方法.方法 取70例血清标本,用免疫增强透射比浊法对高敏CRP进行检测.测定指标包括其精密度及线性范围.并将免疫散射比浊法作为对照.结果 免疫增强透射比浊法测定CRP在3.21 mg/L、6.52 mg/L时,总不精密度分别为3.25％和2.43％,均在误差允许范围内；测定血清CRP分析测量范围为0.2 ～ 400 mg/L,最低检测限为0.2 mg/L;对比试验显示,相关系数为0.9911,回归方程Y=1.0074X+0.3042.结论 免疫增强透射比浊法检测CRP操作简便快捷,精密度高,线性范围较宽,是一种可靠、有效的检测方法,适用于临床.     

NM-BAPTA法钙检测试剂盒的性能评价

目的 对NM-BAPTA法钙检测试剂盒进行性能评价.方法 根据美国临床与实验室协会(CLSI)指南文件EP15-A2、EP9-A2、EP6-A、C28-A2,验证日立7180生化分析仪上NM-BAPTA法钙检测试剂盒的精密度、准确度、线性范围、生物参考区间.结果 高低2个浓度的血钙质控品批内精密度标准差(SD)分别为0.03 mmol/L、0.02 mmol/L,批间精密度标准差分别为0.08 mmol/L、0.06 mmol/L;准确度验证其血钙结果与参比系统cobas 8000血钙结果呈良好的相关性,r2=0.954 8,相对偏差＜12.5％;线性范围验证斜率为0.971,r2=0.999,线性范围为1.00～4.70 mmol/L,线性理想;参考区间验证符合率100％.结论 NM-BAPTA法钙检测试剂盒在日立7180生化分析仪上的分析性能符合质量目标要求,可应用于临床检测.     

TNF-α/hs-CRP双标记时间分辨荧光免疫法用于脓毒症早期筛查诊断的研究

目的 建立一种双标记时间分辨荧光免疫法（TRFIA）用于定量检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和超敏C-反应蛋白（hs-CRP）水平。方法 将抗TNF-α和hs-CRP单克隆抗体包被在96孔板,制备铕（Eu³⁺）和钐（Sm³⁺）检测抗体偶联物,建立双抗体夹心TRFIA法并组装成试剂盒,评价此试剂盒的灵敏度、线性范围、加标回收率和各项检测性能。结果 建立了TRFIA检测血清TNF-α和hs-CRP水平的新方法并组装成试剂盒,此试剂盒对TNF-α检测的线性范围为0~100 ng/L,灵敏度为0.05 ng/L,对hs-CRP检测的线性范围为0~100 mg/L,灵敏度为0.02 mg/L;对TNF-α检测的加标回收率92.00%~107.00%,对hs-CRP检测的加标回收率95.00%~106.82%,与其他常见的血清干扰物质无明显的交叉反应;对TNF-α检测的批内CV 4.57%~9.24%,批间CV 5.13%~9.27%;对hs-CRP检测的批内CV 3.57%~7.69%,批间CV 6.07%~10.00%;试剂盒能够在4 ℃稳定保存6个月,37 ℃下可稳定保存7 d以上。TNF-α的检测阈值为0.44 ng/L,hs-CRP的检测阈值为1.41 mg/L。该试剂盒检测判定结果与临床情况相一致,符合率100%。结论 双标记TRFIA法可定量检测TNF-α和hs-CRP水平,具有灵敏度和准确度高、特异性强、方便快捷等优点,可为脓毒症临床样品的早期筛查、疗效评价和预后评估提供一种新的检测方法。     

微小核糖核酸122(MicroRNA-122)定量检测技术性能评估

目的：对微小核糖核酸122（microRNA-122）的定量检测技术进行评估,探讨其临床应用价值。方法：采用miRFLP技术检测企业校准品、参考品和临床样本,评价该技术的分析性能与临床检测价值。结果：该方法定量下限为183 copies/μL,检测标准曲线183~1500000 copies/μL。高浓度平均回收率113.2%,低浓度平均回收率94.2%,比例系统误差为3.7%。人间精密度变异系数4.2%~1.3%;室间精密度变异系数6.4%~2.5%;批间精密度变异系数4.0%~1.5%;批内精密度变异系数4.1%~1.7%。试剂盒放置4℃ 12小时后的检测结果与预期靶值无明显差异。采集化疗后24小时内43例肿瘤化疗患者的血样,并分离血浆进行miRNA-122检测,将检测结果与现行诊断标准进行ROC方法学分析,CutOff值设定为14136copies/μL,与欧盟公布的PSHT HV健康志愿组（欧洲人群）miRNA-122的13356 copies/μL（95%）基本一致。结论：基于miRNA的微小核糖核酸（miRNA-122）定量检测技术具有性能优良、准确度高、稳定性好等优点,有较高的临床应用价值。     

CC反应蛋白荧光免疫层析定量检测试剂的研制及性能评价

目的旨在建立一种人CRP荧光免疫层析快速定量检测试剂。方法采用双抗体夹心法,以羧基荧光微球标记的抗人CRP单克隆抗体及羊抗兔IgG为标记抗体,另外一株抗人CRP单克隆抗体作为检测线,制备荧光免疫层析试纸条。结果研制的检测试剂盒检测限为0.12 mg/L,CV≤15%,线性范围(0.5~200)mg/L;对223份临床样本进行测试,经配对t检验分析,t=-0.155,P=0.877,与对照试剂性能无显著性差异。结论本研究研制出了一种操作简便、快速的CRP POCT定量检测试剂。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原定量检测方法的建立

目的 建立定量检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)抗原的方法,以用于疫苗生产过程中SFTSV抗原含量的检测.方法 用SFTSV抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗SFTSV单克隆抗体.抗体纯化后以辣根过氧化物酶进行标记,建立双抗体夹心ELISA法.确定该法的线性范围和灵敏度,并对该法的准确性、精密性、专属性进行验证.结果 建立的ELISA法的线性范围为0.117～2.000 mg/L,定量限为0.117 mg/L,线性的决定系数为0.990 3.该法具有良好的准确性和精密度,样品回收率为98％,变异系数均＜8％.该法的专属性良好,对6株不同SFTSV的检测结果均为阳性,而与其他布尼亚病毒、Vero细胞培养上清及其他生产辅料均无交叉反应.结论 成功建立了SFTSV抗原的定量检测方法,为疫苗生产的质量控制奠定了基础.     

首次应用酶联免疫法检测血浆纤维结合蛋白

目的 探讨血清纤维结合蛋白(Fn)含量的检测方法。方法 首次应用酶联免疫法(ELISA)检测待测血清,测定其光密度(D值),判定待测血清中Fn的含量。结果 该方法线性范围50～300mg/L,批内、日内、日间的CV分别为2.37％、2.89％、3.24％;回收率98.79％。结论 该方法线性范围适宜,准确度、精密度较好,符合临床检验工作要求。     

免疫散射比浊法和化学发光酶免疫分析法检测C反应蛋白的结果评价

目的:比较采用免疫散射比浊法和化学发光酶免疫分析法对人血清中C反应蛋白(RP)检测方法.方法:针对109例受检血清,分别采用免疫散射比浊法和化学发光酶免疫分析法检测CRP,并在109例受检血清中随机抽取40例混合,两种测定方法同时测定CRP 20次做重复性实验.结果:重复性实验结果免疫散射比浊法,平均值(-x)4.57 ms/L,标准差(s)0.22 mg/L,变异系数4.88%,化学发光酶免疫分析法面8.66 ms/L,s 0.58,变异系数6.7%.两种方法检测CRP结果差异有显著性(P<0.05).结论:免疫散射比浊法的准确度要优于化学发光酶免疫分析法.     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗中庆大霉素残留量检测方法的验证

目的  验证口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的检测方法。方法  应用庆大霉素ELISA试剂盒建立庆大霉素残留量的检测方法。对该方法标准曲线的线性、线性范围内的准确度、精密度、专属性、耐用性、检测限及定量限进行验证。结果  验证的标准曲线线性良好,相关系数>0.98。该法检测高、中、低浓度的庆大霉素标准品的回收率为92.7%～123.6%;检测同一批次的供试品的相对标准偏差为8%;不同试验人员检测同一批次供试品和不同批次试剂盒检测同一批次供试品,相对标准偏差均<15%;庆大霉素加样回收率为95.9%～121.3%;该法在（37±1） ℃温度范围内耐用性良好;该法测定庆大霉素的检测限为0.040 ng/ml,定量限为0.135 ng/ml。结论  用于检测口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）中庆大霉素残留量的方法是有效的。     

高效液相色谱法测定万古霉素血药浓度

目的：建立测定人血浆中万古霉素浓度的高效液相色谱法。方法：采用外标法定量,万古霉素血浆样品经5%高氯酸处理,采用Inertsil ODS-SP C18（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.2）（11.5∶88.5）,流速为0.5 ml/min,检测波长为230 nm,柱温30℃,进样量20μl。结果：血浆中万古霉素在1.56~100.00 mg/L内线性良好（r=1）,检测限0.33 mg/L（S/N=3）,平均回收率为95.26%,RSD为1.16%。结论：该方法灵敏、准确、快速、操作简便、取样量少,适合临床万古霉素血药浓度的监测。     

乙型脑炎减毒活疫苗原液的残余PHK细胞蛋白检测方法的验证

 目的   验证PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）原液的残余PHK细胞蛋白的适用性。 方法   对PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性、精密度、专属性、耐用性和线性进行验证。 结果   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性良好,PHK细胞蛋白标准品的回收率为96.16%~111.44%。该试剂盒在PHK细胞蛋白质量浓度为6.25~200.00 μg/L时呈现良好的线性,决定系数为0.997,最低检测限和最低定量限分别为6.70和22.33 μg/L。该试剂盒检测乙脑疫苗原液中的残余PHK细胞蛋白的专属性良好,而且操作人员、时间和试剂盒批号变化对检测结果没影响（相对标准偏差均≤15%）。 结论   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒适用于乙脑疫苗中的残余PHK细胞蛋白检测。     

新型抗凝药磺达肝癸钠人血浓度测定方法的建立

目的建立人血浆中磺达肝癸钠浓度的检测方法。方法使用肝素试剂盒拟合标准曲线,测定其检测限、精密度、回收率和稳定性,并检测开胸术后使用磺达肝癸钠进行预防血栓治疗的患者血样156份。结果磺达肝癸钠质量浓度在0．1-1．5mg·L^-1时线性良好（r^2=0．996）,方法回收率99．5％-102％,日内和日间RSD分别为4．2％-8．44％和2．73％-9．51％。结论肝素试剂盒用于检测磺达肝癸钠的血浆浓度简便、快捷,可用于临床药动学研究。     

高效液相色谱法测定大鼠血清中盐酸柔红霉素浓度

目的 建立测定大鼠血清中柔红霉素血药浓度的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇-0.01 ml/L磷酸二氢铵溶液(pH=4.65)-冰醋酸(30:20:0.1),流速1.0 mL/min,检测波长233 nm,柱温35 ℃,内标为盐酸多柔比星,进样量20 μL.结果 盐酸柔红霉素质量浓度在0.147 8～14.77 8 mg/L(r=0.998 4)范围内与待测物和内标峰高比值线性关系良好,低、中、高3种质量浓度(0.738 9,3.694 5,14.778 0 mg/L)的平均相对回收率分剐为102.5%,98.7%,99.3%,日内、日间RSD均小于10%.结论 该方法样品处理简便,可用于血清中盐酸柔红霉素的血药浓度测定和药代动力学研究.     

反相高效液相色谱法测定莫西沙星的人体血药浓度

目的建立测定莫西沙星人体血药浓度的反相高效液相色谱法,为临床合理用药提供参考。方法色谱柱为Diamonsil ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(含0.04 mol/L磷酸和0.4%三乙胺),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为290 nm,灵敏度为0.01 AUFs。沉淀剂选用10%三氯醋酸,以峰面积外标法定量。结果莫西沙星的保留时间为8.7 min,质量浓度线性范围为0.05～5.00 mg/L,最低定量限为0.04 mg/L;平均回收率为96.22%～100.56%,绝对回收率为82.21%～93.65%;日内RSD为5.21%～6.30%,日间RSD为6.78%～7.56%。结论该方法简单、准确、快速和灵敏度高,可用于莫西沙星的人体血药浓度测定。     

毛细管胶束电动色谱-紫外间接检测环胞素制剂中的有机溶剂

用毛细管胶束电动色谱-紫外间接检测环胞素软胶囊及环胞素注射液中的有机溶剂含量.采用非涂层弹性石英毛细管;操作缓冲液为含0.26mol/L十二烷基硫酸钠的0.02mol/L苯巴比妥钠溶液(pH9.0);检测波长为235nm(间接检测);电泳过程中在进样端始终外加适当的压力使基线保持稳定.以甲醇为内标物,乙醇和1,2-丙二醇均在2.6～18mg/ml范围内呈良好的线性关系.连续进样分析所得峰面积和迁移时间的相对标准偏差均不大于1.3%.环胞素软胶囊中乙醇和1,2-丙二醇含量测定方法的回收率分别为99,2%和100.7%;环胞素注射液中乙醇含量测定方法的回收率为99.5%.