超滤-纳滤联合用于川贝母生物碱的浓缩工艺

目的探索超滤-纳滤联用技术在川贝母生物碱成分浓缩中的应用。方法以总蛋白和西贝母碱透过率为指标,考察超滤过程。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken响应面法,以西贝母碱的截留率为指标,考察滤膜截留相对分子量、超滤液中西贝母碱浓度和p H值对纳滤过程的影响。结果采用截留相对分子量为10 000的滤膜,对总蛋白的去除率为98. 61%,西贝母碱的透过率达到98. 57%。纳滤过程最佳工艺参数:截留相对分子量为500、西贝母碱质量浓度为140μg/ml、超滤液pH为5. 5,对西贝母碱的实际截留率为93. 57%。结论超滤-纳滤联用技术可有效完成对川贝母生物碱成分的浓缩,相比传统热浓缩优势明显。     

超滤法在海洋真菌多糖分离纯化工艺中的应用

目的用超滤法代替透析法去除海洋真菌多糖提取液中的单糖等小分子杂质。方法采用中空纤维超滤膜 ,对多糖去蛋白质后的提取液通过超滤去除小分子杂质 ,同一批提取液中取出部分用透析法处理 ,作平行对照。结果原液浓度、操作压力等影响参数优化后得到的产品 ,多糖得率和含量都不低于对照组 ,而且洗脱曲线也与对照组相似。结论超滤法适用于海洋真菌多糖的分离纯化 ,可供中试生产使用     

B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究

目的为提高荚膜多糖抗原得率,降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量,提高荚膜多糖抗原纯度,优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件。方法研究pH值,沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度,乙醇沉淀多糖所需的温度和时间;比较蛋白酶K法、Sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果。结果建立起25%乙醇沉淀去核酸,冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖,55%乙醇沉淀多糖的方法。3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12.4%~14.8%;分配系数(Kav)≤0.5的多糖回收率达90%以上;荚膜多糖得率为0.021~0.027 g/L,抗原纯度较高。结论从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的。     

人血高密度脂蛋白制备新工艺

以血浆制备白蛋白 (Cohn 6法 )后所产生的 F - 1沉淀为原料 ,采用低温乙醇工艺 ,经过 3步分离纯化 ,再用截留分子量 5 0 k D的超滤膜超滤脱醇浓缩后 ,加入 (10± 1) %(g/ m l)蔗糖作保护剂进行巴斯德病毒灭活 ,制得人血高密度脂蛋白。制品经 SDS- PAGE显示 ,纯度 85 %～ 95 %,载脂蛋白 A 分子量 2 7.3k D,活性 4.0× 10 6u/ g蛋白以上 ,载脂蛋白 A 回收率在 6 0 %以上。     

Plackett-Burman联用Box-Behnken响应面法优选镰形棘豆总多糖纯化工艺

摘要：目的:运用Plackett-Burman实验设计联合Box-Behnken响应面法,筛选大孔树脂法优化镰形棘豆中总多糖的纯化工艺。方法:通过单因素试验探讨各因素对镰形棘豆总多糖吸附率或洗脱率的影响。在此基础上,采用Plackett-Burman实验设计筛选影响镰形棘豆多糖回收率3个显著性因素,再采用Box-Behnken响应面法对这3个主要影响因素进行工艺优化,得到最佳纯化条件,并进行验证分析。结果:大孔树脂为ADS-7,径高比为1∶11,上样液浓度为0.2 mg·ml-1,上样量为60 ml,上样速率为1.0 ml·min-1,洗脱液为51%乙醇,洗脱量60 ml,洗脱速率为1.0 ml·min-1,验证试验中镰形棘豆多糖平均回收率达87.03%,RSD为0.52%,与预测值的偏差为2.80%。通过该工艺镰形棘豆总多糖的纯度由19.2%提高到66.5%。结论:Plackett-Burman联用Box-Behnken响应面法优化的镰形棘豆多糖纯化工艺稳定可靠、简便易行,可为镰形棘豆总多糖的开发利用奠定基础。     

化香树果序多糖脱蛋白工艺研究

目的 应用木瓜蛋白酶法脱除化香树果序多糖中蛋白,探究最佳工艺条件。方法 通过对酶用量、酶作用时间、酶作用温度及pH值四个单因素考察,采用响应面优化法试验分析。结果 最佳工艺条件,木瓜蛋白酶用量1.508%,温度65 ℃,酶解时间92.3 min,pH＝7.0,多糖蛋白脱除率为90.90%,多糖保留率为84.06%。结论 木瓜蛋白酶法是一种较优的多糖脱除蛋白方法。     

A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究

研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。     

马粪海胆生殖腺中多糖的纯化方法及其抗肿瘤作用研究

目的 优化马粪海胆生殖腺中多糖的纯化方法,并评价其体外对肿瘤细胞的生长抑制作用.方法 马粪海胆生殖腺经水提取、木瓜蛋白酶结合Sevage法除蛋白、透析后醇沉、干燥制得马粪海胆总多糖,总多糖应用Sephacryl S-300凝胶柱色谱分离纯化;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;通过噻唑蓝(MTT)法测试多糖的体外抗肿瘤作用.结果 马粪海胆生殖腺的水提液应用木瓜蛋白酶结合Sevage法除蛋白效果最佳,木瓜蛋白酶最佳用量为100∶6(海胆脱脂粉与酶质量比),制得总多糖的纯度达90%;总多糖及分离得到的2个多糖体外对人肝癌Bel7402细胞表现出生长抑制作用.结论 该纯化方法步骤简单、易操作,所得多糖理化性质好、易溶于水,适用于马粪海胆生殖腺多糖的纯化.     

超滤法除热原在细胞色素C生产中的应用

<正> 超滤技术在国外已作为一种常规的分离方法应用于各个行业,国内应用近几年也有许多报道。生化制药中蛋白质、酶、核酸、多糖等多种药物的生产采用超滤技术进行分离纯化,不仅活性不受影响而且可提高效率、简化工艺步骤。     

Sevag法去除黄芪粗多糖中蛋白质成分的研究

目的研究Sevag法去除黄芪粗多糖中蛋白质成分的效果。方法Sevag法去除蛋白质,以考马斯亮蓝法和苯酚-硫酸法测定黄芪粗多糖应用Sevag法前后蛋白质和多糖含量的变化。结果经过6次Sevag法处理后,黄芪粗多糖冻干粉中70.8%的蛋白质被去除,而多糖组分的含量变化不大,仅下降4.44%。结论Sevag法用于去除黄芪粗多糖中蛋白质成分切实可行,可作为纯化黄芪粗多糖的手段之一。     

盐酸莫西沙星脂质体的制备及包封率测定方法研究

目的：制备盐酸莫西沙星脂质体,建立盐酸莫西沙星脂质体包封率测定方法。方法：乙醇注入法制备盐酸莫西沙星脂质体,正交试验优选脂质体的最佳处方。采用葡聚糖凝胶柱法、超滤离心法分离脂质体与游离药物,并进行方法学考察,优选出测定盐酸莫西沙星脂质体包封率的方法。结果：盐酸莫西沙星脂质体的最佳处方为：卵磷脂与胆固醇比为 3：1,药脂比为 1：7,水合介质中聚山梨酯20的用量为1%,优化后的包封率为90.73%。葡聚糖凝胶柱法和超滤离心法都能将脂质体与游离药物分离,葡聚糖凝胶柱法的平均柱加样回收率为85.54%~88.15%,超滤离心法的平均加样回收率为94.40%~97.35%。结论：盐酸莫西沙星脂质体的制备工艺稳定,包封率较高。葡聚糖凝胶柱法不适于盐酸莫西沙星脂质体的包封率测定,超滤离心法可高效、准确、方便地测定盐酸莫西沙星脂质体包封率。     

细菌内毒素定量法研究活性炭与超滤法热原去除工艺

目的 研究细菌内毒素定量法研究活性炭及超滤法的热原去除工艺。方法 以动态浊度法测定不同浓度活性炭及不同截留分子量超滤膜使用前后药液中细菌内毒素的含量变化,观察其去除热原的效果。结果 在三七总苷溶液中外加内毒素制备三七总苷原液,测得0.03%,0.10%,0.30%3种浓度活性炭的细菌内毒素去除率分别为62.21%,76.21%,81.03%;50 000及100 000相对截留分子量的超滤膜的细菌内毒素去除效率均＞91%。结论 该实验明确了不同浓度活性炭与其细菌内毒素去除效率的量化关系及超滤法去除细菌内毒素的效率,为注射剂生产工艺中去除热原提供依据。     

白花蛇舌草多糖的提取纯化工艺研究

目的优选白花蛇舌草多糖的提取及纯化工艺。方法采用正交试验设计法优选白花蛇舌草多糖的最佳提取工艺;通过乙醇沉淀法、鞣酸沉淀法并联用活性炭对传统多糖的纯化工艺进行改进。结果最佳提取工艺为:白花蛇舌草药材预先加12倍量水浸泡2h,加热至70℃,提取3次,每次1.5h,采用鞣酸沉淀法联合活性炭可有效去除多糖中的蛋白质和色素等杂质。结论提取时间对多糖的提取效率影响较大;所优选的纯化工艺方法简便,蛋白去除率高,色素脱除完全,多糖损失少,工艺可行性强。     

二色补血草多糖脱蛋白工艺研究

目的 对二色补血草多糖进行脱蛋白研究,筛选最优的脱蛋白 方法 . 方法 采用三氯乙酸法、Sevage法、木瓜蛋白酶法和木瓜蛋白酶 Sevage法等4种脱除蛋白 方法 对二色补血草多糖进行脱蛋白处理. 结果 木瓜蛋白酶结合Sevage法最为理想,最佳工艺条件为:酶用量2.0%,酶解温度75 ℃,酶解时间2 h,pH＝7,结合3次Sevage法操作,在此工艺条件下,多糖蛋白脱除率83.72%,多糖保留率80.25%. 结论 木瓜蛋白酶结合Sevage法是一种良好的脱蛋白 方法 .     

b型流感嗜血杆菌多糖纯化工艺的优化

目的 优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖纯化工艺,替代传统的苯酚结合乙醇方法.  方法 采用十六烷基三甲基溴化铵提取粗糖,以脱氧胆酸钠结合乙醇多级纯化进一步纯化粗糖,通过超滤浓缩和除菌过滤获得纯化的Hib多糖.采用优化的纯化工艺以中试和放大规模各纯化3批Hib多糖,按照《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求检测纯化的Hib多糖.   结果 中试和放大规模纯化的各3批Hib多糖的相对分子质量分别为621 800、634 400、659 900和597 200、612 100、583 400,均符合规定的标准.中试和放大规模纯化的各3批Hib多糖的细菌内毒素含量分别为2.0、0.5、0.7 EU/μg和4.0、2.0、1.0 EU/μg,均明显低于规定的标准.鉴别试验显示,中试和放大规模纯化的各批Hib多糖均可与标准Hib抗血清形成明显的沉淀线.  结论 优化的Hib多糖纯化工艺具有较好的稳定性,且易于工艺放大,可替代传统工艺用于Hib多糖的纯化.     

膜分离制备右旋糖酐40中细菌内毒素的控制

摘要：目的:将细菌内毒素作为膜分离制备右旋糖酐40工艺过程中的一个标的进行检测,使细菌内毒素含量成为右旋糖酐40原料药的质量指标,与国际标准接轨。方法:右旋糖酐发酵液经过板框过滤、陶瓷膜微滤和超滤等预处理,盐酸水解后通过100,10,50 kDa超滤除杂分离纯化为右旋糖酐40。结果:右旋糖酐发酵液预处理,果糖的去除率79%～89%。6%右旋糖酐发酵液处理液盐酸水解,还原糖的变化为5.72～8.68 mg·ml-1,总糖收率90%以上。水解液经过截留相对分子质量（Mr）分别为100,10,50 kDa超滤处理,绝大部分内毒素被去除,100 kDa和50 kDa截留干品（杂质）Mr均在50 000以上。截留Mr 50 kDa超滤膜的滤过液经减压浓缩,50%～60%乙醇沉淀制取右旋糖酐40内毒素含量＜3.0 EU·g-1,优于＜10.0 EU·g-1的国际标准,右旋糖酐40 Mr分布达到中国药典标准。结论:右旋糖酐发酵液经过陶瓷膜、超滤预处理之后盐酸水解,超滤（100,10,50 kDa）分离纯化水解液可以得到右旋糖酐40,同时对其细菌内毒素的含量加以控制,右旋糖酐40原料药的细菌内毒素指标优于国际标准。     

多级超滤及亲和超滤法分离纯化NADH工艺的研究

研究出一种经济、高效、简便且容易放大的提取、分离和纯化辅酶NADH的工艺条件并进行优化.使用化学渗透法处理啤酒酵母细胞Saccharomyces cerevisiae粗提NADH,多级超滤及亲和超滤法进一步分离和纯化NADH.选用酵母醇脱氢酶（YADH）作为亲和配体,在pH值8.0,离子强度为0.1 mol/L时,用YADH和细胞渗透液中的NADH亲和.使用MWCO=30 000的滤膜超滤.结果：NADH YADH复合物留在截留液中,从而与其它小分子物质分离.改变pH值和离子强度,NADH-YADH复合物解离,通过MWCO=1 000的滤膜超滤,NADH分离到滤过液中,YADH作为截留而回收,回收率达93%,活性损失15%.试验表明使用化学渗透法处理酵母细胞,用亲和超滤纯化可获得高的NADH产率.和以前的方法相比具有简单、经济、省时、高效等特点,且容易放大.     

酶法生产L-丝氨酸的分离纯化

目的:用膜分离和离子交换技术分离纯化转化液中的L-丝氨酸。方法:以膜过滤去除菌体、蛋白质和色素,离子交换获得纯L-丝氨酸溶液,经反渗透膜浓缩制备L-丝氨酸。结果:用陶瓷膜去除菌体,氨基酸损失率为0.84%。除菌体后的转化液经超滤-纳滤输出的清液,加入碱或乙醇无蛋白质析出,透光率达90%以上,是活性炭脱色处理后滤液的2.5倍,氨基酸损失率为7%。L-丝氨酸与甘氨酸的离交分离条件为上柱流速55mL·min-1,解吸剂浓度0.08mol.L-1,解吸流速30mL·min-1。用反渗透膜浓缩解吸液,L-丝氨酸损失量仅为真空减压浓缩的40%。结论:用膜分离和离子交换技术分离纯化L-丝氨酸,优于传统的絮凝剂沉淀蛋白质、活性炭脱除色素和真空减压浓缩,可明显提高L-丝氨酸收率和产品质量。     

超滤去除红霉素发酵液乳化现象的研究

目的开发一种超滤法去除红霉素发酵液处理过程中乳化现象的新工艺。方法采用自制的三种中空纤维超滤膜（UF-1、UF-2和UF-3）对红霉素发酵液去除乳化现象进行了试验。结果在优化的操作条件下，UF-3膜能够去除红霉素发酵液中蛋白质等引起乳化的杂质，超滤膜可以再生使用。结论超滤法可达到去除乳化的目的，同时提高了萃取的收率和质量。     

肌氨肽苷制备工艺及其病毒去除方法的验证

目的研究肌氨肽苷制备工艺并对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以家兔心脏和肌肉为原料,制得肌氨肽苷原液。并以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用截留相对分子质量为10 000的超滤器在进压0.12MPa、回流压0.05 MPa和进压0.20 MPa、回流压0.12 MPa条件下去除肌氨肽苷原液中病毒的效果,并以牛血清白蛋白为对照品,20%磺基水杨酸作为指示剂的条件下,对超滤膜的完整性进行验证。结果滤过液中未检测出PPV,经过盲传3代,也未发现特异性细胞病变;磺基水杨酸检测未变浑浊,表明膜完整性好,超滤设备可用。结论制备肌氨肽苷的方法可行,且所采用的超滤法去除PPV是1种有效去除病毒的方法。