阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：观察δ阿片受体激活剂D-丙（2）-D-亮（5）脑啡肽（DADLE）对培养心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的保护作用。方法：采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞，建立H／R损伤模型，检测指标包括：（1）心肌细胞形态；（2）心肌细胞存活率；（3）超氧化物歧化酶（SOD）活性；（4）丙二醛（MDA）含量；（5）乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果-模型组缺氧后心肌细胞存活率降低，复氧30min后进一步下降，各个时间点细胞内SOD活性下降，MDA含量升高，LDH活性升高，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），复氧60min后各指标逐渐趋于正常状态；DADLE 1μmaol／L组细胞存活率升高，LDH活性降低，MDA含量逐渐趋于正常，SOD活性逐渐回升，表明经DADLE干预后，心肌细胞抗损伤能力加强，发生损伤的程度减轻；δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol／L抑制DADLE的保护作用。结论：DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H／R损伤具有保护作用。     

环维黄杨星D对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究环维黄杨星D对纯化培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定细胞凋亡率、caspase-3、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率明显增高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01);CVB-D(1×10-5mol.L-1)组降低LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率,提高SOD活性,与缺氧/复氧组比较各实验指标均差异具有显著性(P<0.05)。结论CVB-D对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制与清除氧自由基,抗脂质过氧化及降低细胞凋亡率有关。     

重组鼠骨形态发生蛋白-7基因转染对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

为探讨转染骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,将体外培养的乳大鼠心肌细胞分为3组:①阴性对照组;②缺氧复氧组:培养的心肌细胞缺氧120min,复氧240min;③转染组:转染基因后,再行缺氧120min/复氧240min。心肌细胞损伤程度以心肌细胞搏动次数和乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)活性来表示。采用锥虫蓝排斥法检测心肌细胞存活率,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,心肌细胞缺氧复氧后可使细胞LDH活性显著增高,锥虫蓝摄取率明显升高,MDA含量较正常细胞显著增高,SOD含量较正常细胞显著降低;经BMP-7转染的心肌细胞可显著降低锥虫蓝摄取率,降低LDH、CPK活性,并提高细胞抗氧化能力,增高SOD活性,降低MDA含量。结论:BMP-7转染可对抗缺氧复氧对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力有关。     

黄芩茎叶总黄酮对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对过氧化氢(H2O2)所致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法:用体外细胞培养方法,培养乳鼠心肌细胞,制备过氧化氢损伤模型,测定细胞存活率,上清液乳酸脱氢酶(LDH)的活性,细胞内丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并采用原位末端标记法(TUNEL)标记细胞,测定细胞凋亡率。结果:H2O2处理心肌细胞后其存活率较正常心肌细胞下降,细胞培养液中LDH活性明显增加;其SOD活性较正常心肌细胞降低,MDA含量和心肌细胞凋亡率明显升高(均P<0.01)。SSTF(50～200mg/L)各剂量都能显著提高H2O2损伤的心肌细胞的存活率,明显抑制心肌细胞的LDH的释放,显著减少心肌细胞的MDA的含量,提高SOD的活性,明显降低心肌细胞凋亡率(均P<0.01)。结论:SSTF能减轻H2O2对心肌细胞的损伤作用,降低H2O2导致的培养心肌细胞的凋亡率。     

蒺藜皂苷单体B对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察蒺藜皂苷单体B(TTSMB)对大乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1～3d大鼠心肌细胞,培养72h后随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧模型组(H/R)、蒺藜皂苷组(GSTT)、蒺藜皂苷单体B(TTSMB)10、1、0.1nmol·L-1组。观察细胞形态学变化,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养基中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,并采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率及应用Western blot检测TTSMB对凋亡相关蛋白caspase-3的作用。结果与对照组比较,H/R组心肌细胞存活数明显减少,心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加(P<0.01),SOD活力下降,MDA含量升高(P<0.01);与模型组比较,TTSMB10、1、0.1nmol·L-1组存活心肌细胞数明显增多(P<0.05,P<0.01),心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量降低,SOD活力增加、MDA含量降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡率明显下降,caspase-3表达亦下降。结论TTSMB可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,抑制心肌细胞凋亡,具有心肌细胞保护作用,其机制与抗自由基作用有关。     

丹红注射液预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨丹红注射液(DH)预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其相关机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分离培养SD乳鼠心肌细胞,在培养3d后随机分为5组(每组实验重复6次):正常对照(control)组、缺氧/复氧(A/R)组,丹红注射液低剂量(终浓度为0.2μmol/ml)(DHL+A/R)组,丹红注射液中剂量(终浓度为0.6μmol/ml)(DHM+A/R)组,丹红注射液高剂量(终浓度为1.8μmol/ml)(DHH+A/R)组。测定各组心肌细胞存活率,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以及细胞内ATP水平。结果与对照组比较,A/R组心肌细胞存活率、细胞培养液中SOD活性和细胞内ATP水平均明显降低(均P<0.01),而培养液中LDH水平明显增加(P<0.01)。与A/R组比较,DH+A/R各剂量组心肌细胞存活率、细胞内SOD含量和细胞内ATP水平均明显增加(均P<0.01),而培养液中LDH水平均明显降低(P<0.01);其中又以DHH+A/R组细胞的存活率升高明显,与DHL+A/R组比较有显著差异(P<0.05)。结论丹红注射液预处理可减轻心肌细胞A/R损伤,其机制可能为丹红注射液增加了细胞的内源性抗氧化剂活性,改善了心肌细胞能量代谢;且在一定范围内呈剂量依赖性,随着剂量的升高,保护作用更明显。     

芳香新塔花对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用

目的比较芳香新塔花Ziziphora clinopodioides不同提取物对大鼠急性心肌缺血、对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响。方法通过体内注射垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血模型,观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图J点的变化,以及试药对超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的影响。体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后MDA的变化。结果芳香新塔花石油醚部位和氯仿部位0.3g/kg显著抑制注射垂体后叶素所致心电图J点升高,对心率、SOD、LDH、MDA的影响不显著;乙醇提取物和氯仿部位能明显降低缺氧-复氧模型下心肌细胞培养液中的MDA浓度。结论芳香新塔花具有潜在的心肌缺血保护作用。     

前列地尔对培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 :观察前列地尔对培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法 :采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型 ,观察不同浓度前列地尔 (5 ,15 ,4 5 μg·L- 1)剂量组细胞的形态学变化 ,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛 (MDA)含量 ,并测定缺氧复氧后细胞培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,透射电镜观察细胞超微结构改变。结果 :与正常组比较 ,模型组细胞SOD下降 ,MDA和LDH升高 (均P <0 .0 1)。前列地尔各剂量组与模型组比较 ,心肌细胞SOD(除小剂量组 )活性提高 ,MDA和LDH含量降低 (P <0 .0 1)。且心肌细胞形态及超微结构改善。结论 :前列地尔具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌细胞的作用。     

左卡尼汀注射液对阿霉素所致心肌细胞损伤的保护作用

目的 观察左卡尼汀注射液对阿霉素所致的心肌细胞损伤的保护作用.方法 将培养5d的新生Wistar乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组、阿霉素1 μg/mL阳性对照组和左卡尼汀10、20、30μg/mL保护组,加药后继续培养24 h,测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果 左卡尼汀能显著提高受损心肌细胞的存活率,抑制LDH释放量,减少MDA的生成,提高SOD活性.结论 左卡尼汀对阿霉素所致的心肌细胞损伤具有保护作用.     

新型褪黑素受体激动剂Neu-P11激活AMPK减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究新型褪黑素受体激动剂Neu-P11对心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及分子机制。方法实验分为对照组、缺氧/复氧模型组(H/R组)、H/R+Neu-P11组、H/R+Compound C组、H/R+Neu-P11+Compound C组。构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,检测各组心肌细胞凋亡情况,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、SOD活性及MDA含量及心肌细胞AMPK的活性。结果与缺氧/复氧组细胞相比,Neu-P11预处理组细胞凋亡率明显减少,CK、LDH、MDA含量明显下降,SOD活性增加,心肌细胞AMPK活性明显增高,而AMPK特异性抑制剂Compound C可以阻断Neu-P11的保护作用。结论 Neu-P11能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,这一保护作用与激活AMPK有关。     

玉郎伞两种黄酮单体对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究从玉郎伞(Yulangsan,YLS)中首次分离的两种黄酮单体对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入YLS两种单体的含药血清(10%、5%、2.5%)后,各组缺氧/复氧心肌细胞形态学和搏动频率的变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;用ELISA法测定心肌细胞Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及细胞培养上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与模型组相比,YLS两种单体含药血清的高、中剂量均能明显增加心肌细胞的存活率,增强Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活性,降低细胞培养上清液LDH、NOS活性、MDA含量,提高T-SOD活性并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论两种YLS单体对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载有关。     

PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　研究PGE1对纯化培养心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧 /复氧损伤模型 ,实验分 5组 :正常细胞培养组、缺氧 /复氧损伤模型组、缺氧 /复氧损伤 +PGE1(5、15、4 5 μg·L-1)组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化。结果　PGE1可明显提高SOD、LDH活性 ,降低MDA含量并可提高线粒体脱氢酶活性。结论　PGE1具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌作用     

附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护机制

目的以细胞凋亡的线粒体信号通路为着眼点,对附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制进行探讨。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3 h后复氧6 h;缺氧后适应组在细胞缺氧3 h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6 h;附子多糖组在缺氧3 h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 g.L?1的培养液中常规培养6 h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率和线粒体膜电位,进行凋亡诱导因子(AIF)的Western blotting分析,检测心肌细胞内SOD活性和MDA含量。结果与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以保护心肌细胞SOD活性,减少MDA的生成,阻止线粒体膜电位的下降,抑制AIF自线粒体向胞浆的释放,减少心肌细胞凋亡率。结论附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制与其抗氧化损伤,抑制细胞凋亡的线粒体信号途径有关。     

意大利牛舌草总黄酮及四种化学成分对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制研究

目的探讨意大利牛舌草总黄酮及四种化学成分对心肌细胞缺氧/复氧损伤(hypoxia-reoxygenation,H/R)的保护作用及作用机制。方法分离并培养原代乳鼠心肌细胞,随机分组,建立H/R模型,给药后测定相关指标。结果与模型组相比,总黄酮及四种化学成分均能增加心肌细胞缺氧/复氧损伤后的存活率(P<0.01),降低LDH漏出量(P<0.01),减少细胞内MDA的含量(P<0.01),且SOD活力显著性提高(P<0.01),可显著降低心肌细胞早期凋亡指数,提高线粒体膜电位(P<0.01)。给药组NF-κB信号通路关键蛋白的激活受到抑制,Bax/Bcl-2比例明显降低(P<0.01),Beclin-1蛋白表达量明显降低而p62表达上调(P<0.01),焦亡相关蛋白NLRP3、IL-1β以及GSDMD明显降低(P<0.01)。结论意大利牛舌草总黄酮及四种化学成分可通过抑制NF-κB信号通路的激活及心肌细胞的过度自噬,缓解细胞焦亡,减少心肌细胞凋亡,减轻H/R对心肌细胞造成的损伤。     

风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的研究风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响。方法实验设置对照组(Con,不作任何处理)、缺氧/复氧组(H/R,缺氧6 h,复氧3 h),H/R+药物-1组、H/R+药物-2组、H/R+药物-3组(6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml的风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理)、H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC+缺氧/复氧处理)、H/R+anti-miR-702-5p组(转染anti-miR-702-5p+缺氧/复氧处理)、H/R+药物-3+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC+25μg/ml风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理)、H/R+药物-3+anti-miR-702-5p组(转染anti-miR-702-5p+25μg/ml风轮菜总黄酮+缺氧/复氧处理)。蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-702-5p表达水平。结果缺氧/复氧诱导的心肌细胞中P21、Caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,MDA含量升高,LDH活性升高,CAT、SOD活性降低。不同浓度风轮菜总黄酮处理后P21、Caspase-3表达水平降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,MDA含量降低,LDH活性降低,CAT、SOD活性升高。抑制miR-702-5p表达可抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制剂可显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡和氧化应激反应。结论风轮菜总黄酮联合miR-702-5p抑制物可保护心肌细胞免受缺氧/复氧引起的损伤。     

一氧化氮参与预处理心肌细胞早期保护作用

目的　明确一氧化氮 (NO)是否诱导预处理心肌细胞早期保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分为如下各组 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP(5 0 0 μmol·L-1)预处理组 (NO组 ) ;③缺氧预处理组 (HP组 ) ;④NO合成抑制剂L NAME作用细胞后再行缺氧预处理组 (L NAME +HP组 ) ;⑤L 精氨酸 (L Arg)预处理心肌细胞组(L Arg组 ) ;⑥L NAME与L Arg共同作用于心肌细胞组(L NAME +L Arg组 ) ;⑦缺氧复氧损伤组 (H/R组 )。②～⑥组细胞在给予干预因素后使细胞经历 6h缺氧及 3h复氧 ,阳性对照组不予任何处理直接使其缺氧 6h复氧 3h。分别检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,以判定心肌细胞损伤程度。结果　NO预处理心肌细胞后使其缺氧复氧损伤减轻 ,表现为与单纯缺氧复氧组细胞比较其培养上清LDH活性降低 ,细胞存活率提高 (P <0 0 1) ;缺氧预处理和L Arg预处理细胞均可减轻心肌细胞缺氧复氧损伤 (P<0 0 1) ,但此作用可被NOS抑制剂L NAME所拮抗。结论　内源性及外源性NO均可诱导心肌细胞预处理早期保护作用     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤及Egr-1表达的影响

目的观察碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(H/R)所致的损伤及早期生长反应蛋白-1(Egr-1)表达变化的影响。方法制作心肌细胞H/R损伤模型。倒置显微镜和透射电子显微镜下观察心肌细胞一般形态、自发性搏动及超微结构的变化。采用免疫组织化学方法测定心肌细胞Egr-1蛋白阳性表达的细胞数。结果H/R造成心肌细胞形态异常、搏动节律紊乱,导致超微结构损害;H/R诱导心肌细胞Egr-1表达明显增强。缺氧及复氧前给予F2则能改善H/R所致心肌细胞病理损害,抑制心肌细胞Egr-1的过量表达。结论F2对培养心肌细胞H/R损伤具有保护作用,这可能与其抑制Egr-1蛋白过量表达有关。