丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响

目的：观察消旋、左旋及右旋丁基苯酞（dl-,l-,d-3-n-butylphthalide,dl-,l-,d-NBP）对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响。方法：用插线法造成大鼠局灶性脑缺血模型,并用体外显微摄像技术及微循环图象处理系统观察大鼠软脑膜微动脉管径及红细胞流速的变化。结果：dl-,l-和d-NBP对正常大鼠脑微动脉管径无明显影响,MCAO术前1 h预防给药,dl-,l-NBP和尼莫地平可明显增加局灶性脑缺血大鼠软脑膜微动脉管径及血流速度,而d-NBP则加重软脑膜微循环障碍。MCAO术后20 min治疗给药,dl-和l-NBP仍可明显逆转局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍,而d-NBP及尼莫地平作用不明显。结论：改善脑微循环状态是 dl-和l-NBP发挥抗脑缺血作用的重要药理机制之一。     

丁基苯酞对大鼠血栓形成及血小板功能的影响

目的研究消旋、左旋和右旋丁基苯酞(dl-,l-和d-NBP)对血栓形成及血小板功能的影响。方法利用半体外血栓形成术及比浊法,观察dl-,l-和d-NBP及阿司匹林(Asp)对大鼠血栓湿重和血小板聚集率的影响,并用放免法、荧光分光光度法测定其对血小板内cAMP和TXB2的水平以及血小板5-HT释放率的影响。结果ip,dl-NBP和l-NBP可剂量依赖性地抑制大鼠血栓形成,且l-NBP作用与Asp相似,d-NBP对半体外血栓形成无显著作用;dl-,d-和l-NBP可显著抑制胶原、ADP、花生四烯酸诱导的血小板聚集。结论NBP有抗血栓作用,l-NBP作用最强,dl-NBP作用较弱,其抗栓作用与升高血小板内cAMP的含量及抑制5-HT释放有关。     

丁基苯酞对原代培养胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响

用分光光度法和放射免疫分析法分别检测NO及cGMP水平,同时观察l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响。结果表明,d-NBP(0.1～100μmol·L^-1)对低糖低氧条件下或含N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)或含KCl的培养基中皮层神经细胞外液NO及细胞内cGMP水平明显升高,而l-NBP(0.1～100μmol·L^-1)则能明显降低NO和cGMP水平。提示:d-NBP和l-NBP对低糖低氧,NMDA或KCl诱导的NO释放和cGMP生成有相反的作用。     

丁基苯酞对原代培养的大鼠皮层神经细胞外液6-keto-PGF1α和TXB2及其比值的影响

目的旨在观察丁基苯酞(NBP)对神经细胞培养液中6-酮-PGF_1α和TXB₂含量及其比值的影响。用放射免疫方法,结果发现神经细胞在低糖低氧5h或低糖低氧5h/恢复糖氧3h条件下,d-,l-和dl-NBP(0.1～100μmol·L^-1)能够剂量依赖性升高细胞外液中的6-酮-PGF_1α含量,降低TXB₂水平,从而使6-酮-PGF_1α与TXB₂比值升高。而阿司匹林仅在小剂量(0.1,1μmol·L^-1)时能升高6-酮 PGF^1α与TXB^{2比值,大剂量(10,100μmol·L-1)时无影响。提示:NBP对6-酮-PGF_1α/TXB₂比值的升高可能与其增加局部脑血流和改善缺血性脑损伤有关。}     

丁基苯酞对蛛网膜下腔出血后脑血流的改善及血脑屏障的保护作用

侧脑室注入自体血液造成蛛网膜下腔出血模型,观察丁基苯酞(dl-NBP)对局部脑血流的改善作用及血脑屏障的保护作用。结果表明,dl-NBP5～20mg·kg^-1明显提高蛛网膜下腔出血后3h内尾状核的血流量,但无明显的剂量效应关系。0.25mg·kg^-1的尼莫地平亦明显提高脑血流。并发现dl-NBP10mg·kg^-1及尼莫地平0.25mg·kg^-1(分别于蛛网膜下腔出血后5min和3hip)均能明显降低蛛网膜下腔出血6h后皮层组织中伊文氏蓝的摄取量,提示对血脑屏障有明显的保护作用。     

丁基苯酞对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用

为进一步探讨丁基苯肽对神经的保护作用,用原代培养大鼠皮层神经细胞的方法,以LDH和细胞形态等指标,观察了l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。结果表明:l-NBP和d-NBP能剂量依赖性地抑制低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞内LDH的释放,降低细胞死亡率,并能改善受损细胞的形态;此外还能明显减轻低糖低氧诱导的神经细胞内粗面内质网脱颗粒及多聚核糖体解聚。提示:NBP对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤有明显保护作用。     

丁基苯酞对线粒体呼吸链复合酶活性的影响

目的：阐明正丁基苯酞(dl-3-n-butylphthalide, dl-NBP)改善缺血脑能量代谢的机制。方法：用分光光度法测定局灶性脑缺血大鼠脑线粒体呼吸链复合酶I,II,III和IV活性的改变,并观察dl-NBP对这些变化的影响。结果：缺血时复合酶II活性升高,IV的活性显著降低;再灌后, 复合酶I活性升高,II的活性降低。在缺血前10 min给予dl-NBP(5 mg.kg^-1或10 mg.kg^-1, ip)能逆转缺血-再灌引起的上述复合酶活性改变,尤其是使缺血后急剧降低的复合酶IV活性得到明显提高。同时NBP(d-,l-,dl-)还能逆转低糖低氧造成的原代培养大鼠皮质细胞呼吸链复合酶IV活性降低。结论：NBP能够改善缺血脑内能量状态是直接作用于脑线粒体的结果,而d-NBP起着主要作用。     

丁基苯酞对氯化钾及 N-甲基-D-门冬氨酸诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用

用原代培养大鼠皮质神经细胞的方法,观察l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对KCl及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用。结果表明:l-NBP和d-NBP能剂量依赖性地抑制NMDA诱导的大鼠皮质神经细胞内乳酸脱氢酶的释放,降低细胞死亡率,改善受损细胞的形态;此外l-NBP和d-NBP还能明显减轻KCl诱导的神经细胞损伤。提示:l-NBP和d-NBP对KCl及NMDA诱导的大鼠皮质神经细胞损伤有明显保护作用。     

三七皂苷的口服吸收机制

目的研究三七总皂苷(PNS)的口服吸收机制。方法采用Caco-2细胞和动物等模型研究PNS中人参皂苷Rb_l(Rb_l)和人参皂苷Rg_l(Rg_l)的胃肠道内稳定性、肠道黏膜吸收机制及吸收过程中胃、肠及肝对药物的影响。结果Rb_l和Rg_l在胃液酸性环境下易被破坏，而在近中性环境内基本保持稳定。Rb_l和Rg_l在大肠内容物中易降解，尤以Rb_l降解较为明显；二者在小肠内容物中则相对稳定。Rb_l和Rg_l在Caco-2细胞层的摄取受温度的影响，而pH的变化及环孢菌素A的加入对二者摄取均无显著性影响。在实验考察的浓度范围内，细胞内Rb_l(或Rg_l)的摄取量随Rb_l(或Rg_l)的浓度的增加而呈线性增加，Rb_l(或Rg_l)单体与总皂苷中的Rb_l(或Rg_l)在Caco-2细胞模型中的吸收特性无明显差异。而Rg_l的细胞摄取量［(1.07±0.16) μg·mg^-1(protein)］(C₀=1 mg·mL^-1)相对Rb_l［(0.77±0.03) μg·mg^-1(protein)］(C₀=1 mg·mL^-1)较高。Caco-2细胞转运实验表明，Rb_l和Rg_l单体的转运透过系数(P_app)分别为(5.9±1.0)×10^{-8cm·s-1和(2.59±0.17)×10-7 cm·s-1(C₀=1 mg·mL-1)，二者转运都不受环孢菌素A影响。PNS溶液灌胃、十二指肠及门静脉给药后测得Rb_l大鼠绝对生物利用度分别为0.71%，2.75%和65.77%；Rg_l分别为3.29%，6.60%和50.56%。结论三七总皂苷(包括Rb_l和Rg_l)的肠道吸收机制为单纯被动扩散，吸收过程不受细胞膜内P-gp和MRP外排载体的调控，PNS中其他成分对Rb_l或Rg_l的吸收特性无明显影响。胃液的酸性环境、大肠菌丛产生的酶及肝脏的首过作用均对其口服吸收产生影响，而肠道黏膜的透过性低是其口服吸收差的主要影响因素。}     

小檗碱对局灶性脑缺血大鼠血小板聚集及血浆TXB2和6-keto-PGF1a水平的影响

以大鼠可逆性大脑中动脉梗塞(MCAO)致局灶性脑缺血为模型,观察小檗碱对大鼠MCAO24h后血小板粘附、聚集、血栓形成及血浆TXB2和PGI₂生成的影响。结果表明,小檗碱20mg·kg^-1·d^-1ipl,3或5d,明显降低MCAo24h后血小板粘附性及ADP、胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集率,抑制血浆TXB₂水平。同剂量ip3或5d,则抑制血栓形成。提示小檗碱可能通过其抗血小板粘附和聚集及影响花生四烯酸代谢而发挥抗脑缺血作用。     

丁基苯酞对大脑中动脉阻断后皮层组织中花生四烯酸释放及磷脂酶A2基因表达的影响

目的　研究丁基苯酞 (dl NBP) ,d NBP和l NBP对大脑中动脉阻断 (MCAO) 6h后缺血区皮层中花生四烯酸 (AA)释放及磷脂酶A2 (PLA2 )基因表达的影响。方法　阻断大脑中动脉起始部造成局灶性脑缺血模型。HPLC检测AA。Northernblot检测皮层中PLA2 基因表达。结果　MCAO后 6h ,皮层中AA释放明显增加。于脑缺血后 5min和 12 0min ,给dl NBP(10或 2 0mg·kg- 1)和尼莫地平 (0 5mg·kg- 1)可显著抑制AA的释放。d NBP和l NBP作用比较 ,显示d NBP有与dl NBP相似的作用 ,而l NBP则无明显影响。Northern印迹结果表明 ,脑缺血 6h ,皮层中PLA2 的基因表达增强。dl NBP和d NBP(10 ,2 0mg·kg- 1,ip)皆可使表达降低 ,而l NBP对缺血脑组织中PLA2 的基因表达的升高无明显影响。结论　dl NBP和d NBP可抑制MCAO后脑组织中AA释放和PLA2 的基因表达。     

丁基苯酞对局灶性脑缺血过程中线粒体损伤的保护作用

目的　探讨抗脑缺血新药丁基苯酞(NBP)对缺血脑线粒体结构和功能的影响,以阐明其改善缺血脑损伤的作用机制。方法　用大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)和原代培养神经元的低糖低氧损伤模型,测定神经细胞线粒体的膜流动性、膜电位、总ATPase活性和超微结构的影响。结果　大鼠于MCAO后1 h线粒体膜流动性显著降低。经低糖低氧处理后神经细胞线粒体膜电位和总ATPase活性也明显降低。NBP ip能逆转缺血期线粒体膜流动性降低; dl-,l-和d-NBP能使线粒体膜电位和线粒体总ATPase活性恢复至正常水平。电镜结果显示NBP能明显改善脑缺血再灌引起的线粒体肿胀和空泡化。结论　NBP从形态和功能方面对线粒体发挥保护作用,从而改善缺血脑的损伤。     

A phospholipase A2 from Bothrops asper snake venom activates neutrophils in culture: Expression of cyclooxygenase-2 and PGE2 biosynthesis

In this study, the production of prostaglandin E₂ (PGE₂) and up-regulation in cyclooxygenase (COX) pathway induced by a phospholipase A₂ (PLA₂), myotoxin-III (MT-III), purified from Bothrops asper snake venom, in isolated neutrophils were investigated. The arachidonic acid (AA) production and the participation of intracellular PLA₂s (cytosolic PLA₂ and Ca²⁺-independent PLA₂) in these events were also evaluated. MT-III induced COX-2, but not COX-1 gene and protein expression in neutrophils and increased PGE₂ levels. Pretreatment of neutrophils with COX-2 and COX-1 inhibitors reduced PGE₂ production induced by MT-III. Arachidonyl trifluoromethyl ketone (AACOCF₃), an intracellular PLA₂ inhibitor, but not bromoenol lactone (BEL), an iPLA₂ inhibitor, suppressed the MT-III-induced AA and PGE₂ release. In conclusion, MT-III directly stimulates neutrophils inducing COX-2 mRNA and protein expression followed by production of PGE₂. COX-2 isoform is preeminent over COX-1 for production of PGE₂ stimulated by MT-III. PGE₂ and AA release by MT-III probably is related to cPLA₂ activation.     

消旋(15R)-15甲基PGE2甲酯(PG6E)对大鼠实验性胃溃疡的保护作用

用实验性胃溃疡模型研究了PG₆E的抗溃疡作用,结果表明PG₆E有抗胃酸分泌作用,而对胃肠运动无明显影响;PG₆E在剂量为10～80μg·kg^-1时,对无水乙醇型、盐酸型、消炎痛型、慢性醋酸型和幽门结扎型胃溃疡有明显保护作用,并能显著减少幽门结扎大鼠的胃液体积、胃酸分泌、胃蛋白酶活性和DNA含量。小鼠poPG₆E30～60μg·kg^-1,3d后粘膜氨基己糖含量显著增加。研究结果提示PG₆E能抑制对胃粘膜的攻击性因素,增加保护性因素的作用,可望成为一种新型抗胃溃疡药。     

丁基苯酞对大鼠全脑缺血纹状体细胞外液氨基酸和多巴胺含量的影响

用大鼠4动脉阻断全脑缺血模型和大鼠纹状体灌流方法,观察到大鼠急性全脑缺血20min,纹状体细胞外液谷氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸及多巴胺含量显著升高。丁基苯酞40 mg·kg^-1能使全脑缺血20 min纹状体细胞外液多巴胺及其代谢产物DOPAC含量明显降低,并能降低缺血前后纹状体细胞外液甘氨酸含量,而对谷氨酸等其他氨基酸无显著影响。结果提示丁基苯酞对缺血性脑损伤可能有保护作用。     

D<Subscript>2</Subscript> but not D<Subscript>1</Subscript> dopamine receptor stimulation augments brain signaling involving arachidonic acid in unanesthetized rats

Rationale and objectives Signal transduction involving the activation of phospholipase A₂ (PLA₂) to release arachidonic acid (AA) from membrane phospholipids, when coupled to dopamine D₁- and D₂-type receptors, can be imaged in rats having a chronic unilateral lesion of the substantia nigra. It is not known, however, if the signaling responses occur in the absence of a lesion. To determine this, we used our in vivo fatty acid method to measure signaling in response to D₁ and D₂ receptor agonists given acutely to unanesthetized rats. Methods [1-¹⁴C]AA was injected intravenously in unanesthetized rats, and incorporation coefficients k* for AA (brain radioactivity/integrated plasma radioactivity) were measured using quantitative autoradiography in 61 brain regions. The animals were administered i.v. the D₂ receptor agonist, quinpirole (1 mg kg⁻¹, i.v.), the D₁ receptor agonist SKF-38393 (5 mg kg⁻¹, i.v.), or vehicle/saline. Results Quinpirole increased k* significantly in multiple brain regions rich in D₂-type receptors, whereas SKF-38393 did not change k* significantly in any of the 61 regions examined. Conclusions In the intact rat brain, D₂ but not D₁ receptors are coupled to the activation of PLA₂ and the release of AA.     

乙酰丹酚酸A对大鼠大脑中动脉血栓所致局部脑缺血性损伤的保护作用

乙酰丹酚酸A(ASAA)是丹参有效成分的衍生物。用三氯化铁局部涂抹损伤血管形成大鼠大脑中动脉血栓模型。以脑梗塞范围、行为障碍、脑组织病理改变为观察指标,研究ASAA对大脑中动脉血栓所致局部脑缺血的预防作用。结果表明,ASAA50及100 mg·kg^-1iv可显著降低大鼠脑梗塞范围,改善行为障碍。脑组织检查中,ASAA100 mg·kg^-1组动物大脑中动脉内血栓形成极少或未形成,脑组织缺血病变较轻。以上结果提示,ASAA可能通过抑制脑血栓形成,从而减轻血栓形成所致的局部脑缺血性损伤。