基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响

目的 探究升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响及其可能作用机制。方法 72只SPF级Wistar大鼠随机抽取12只为对照组，其余60只大鼠采用气管内灌注致癌碘化油溶液法建立肺癌模型，并分为模型组、顺铂组(5 mg/kg)、升阳益胃汤组(14 g/kg)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)激活剂740 Y-P组(10 mg/kg)、升阳益胃汤+740 Y-P组(升阳益胃汤14 g/kg+740 Y-P 10 mg/kg)，每组12只。给予相应的药物干预后，流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺占比，计算CD4⁺/CD8⁺比值；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM水平；取肺、脾和胸腺并称质量，计算肺、脾、胸腺指数；HE染色观察肺组织病理学变化；实时荧光定量PCR检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达；Western b...     

蛇床子素对急性胰腺炎模型大鼠的治疗作用

目的 探究蛇床子素对急性胰腺炎(AP)大鼠的治疗作用及在该过程中对磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节机制。方法 将SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组(50μg·kg^-1雨蛙素+10 mg·kg^-1 LPS)、阳性对照组(2 mg·kg^-1地塞米松)、低剂量实验组(20 mg·kg^-1蛇床子素)、高剂量实验组(40 mg·kg^-1蛇床子素)、高剂量+740Y-P组(40 mg·kg^-1蛇床子素+2 mg·kg^-1 PI3K激活剂740Y-P),每组15只。末次给药结束24 h后,用全自动生化分析仪检测大鼠血清中淀粉酶和脂肪酶活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平以及胰腺组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠胰腺组织的病理变化并进行病理损伤评分,用蛋白质印迹法检测...     

五味子乙素联合泼尼松调节PI3K/Akt信号通路改善大鼠膜性肾病研究

目的 研究五味子乙素联合泼尼松对膜性肾病大鼠的作用及对其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法 取15只SD大鼠作为对照组,60只大鼠采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）建立膜性肾病模型,造模完成后的大鼠随机分为模型组、泼尼松（2 mg/kg）组、五味子乙素（30 mg/kg）组、五味子乙素（30 mg/kg） ＋泼尼松（2 mg/kg）组。连续给药28 d后,分别测定各组大鼠24 h尿蛋白量、血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、尿素氮（BUN）及肌酐（Scr）水平,苏木精-伊红染色法进行组织病理学检查,Western blotting法检测大鼠肾脏p-Akt、Akt、PI3K-P85、PI3K-P110蛋白表达水平。结果 与模型组比较,泼尼松组、五味子乙素组、五味子乙素＋泼尼松组大鼠24 h尿蛋白量和血清TC、TG、MDA、BUN及Scr水平均显著降低（P<0.05）,SOD水平显著升高（P<0.05）,组织病理学明显改善,肾脏p-Akt、Akt、PI3K-P85、PI3K-P110蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,且五味子乙素＋泼尼松组各项指标均优于单给药组。结论 五味子乙素联合泼尼松对大鼠膜性肾病发挥显著改善作用,作用优于单给药,其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路有关。     

温阳解郁汤对肾阳虚型抑郁大鼠PI3K/Akt信号通路及神经递质的影响

目的 探讨温阳解郁汤对肾阳虚抑郁症大鼠磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路及神经递质的影响。方法 将雄性SD大鼠分为空白组、模型组、氟西汀组（西药阳性对照,4.17 mg/kg）、逍遥散组（中药阳性对照,1.88 g/kg）和温阳解郁汤低、中、高剂量组（1.25、2.50、5.00 g/kg）,每组15只。除空白组外,其余各组均皮下注射皮质酮20 mg/kg以复制肾阳虚型抑郁大鼠模型,并同时灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察大鼠的一般情况,检测其糖水偏好率、强迫游泳静止不动时间,计算其脏器指数,检测其血清中神经递质水平/含量,检测其海马组织中PI3K/Akt通路相关蛋白的表达量和树突棘数量。结果 与空白组比较,模型组大鼠出现了掉毛、畏冷扎堆、蜷缩等症状,糖水偏好率,肾上腺、胸腺、脾指数,血清环磷酸腺苷（cAMP）、脑源性神经营养因子、γ氨基丁酸水平,cAMP与环磷酸鸟苷比值,去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺含量,PI3K、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达量,以及海马组织中树突棘数量均显著降低（P<0.01）;静止不动时间、谷氨酸水平、糖原合成酶激...     

益肾通络方调控PI3K/Akt通路对环磷酰胺诱导无精/少精症大鼠模型的保护作用研究#br#

目的　探究益肾通络方（YTF）对环磷酰胺（CP）诱导的无精/少精症模型大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的调控作用及其作用机制。方法　将SD雄性大鼠随机分为空白对照组（Control组,灌胃生理盐水）、模型组（Model组,腹腔注射DMSO溶液）、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002组（LY组,腹腔注射0.3 mg/kg LY）、YTF低剂量组（灌胃3 g/kg YTF）、YTF高剂量组（灌胃12 g/kg YTF）以及YTF+LY组（灌胃12 g/kg YTF+腹腔注射0.3 mg/kg LY）,每组10只;除Control组外,其余各组大鼠均腹腔注射CP建立无精/少精症模型。连续给药4周后,取大鼠双侧睾丸组织,检测大鼠睾丸指数;采用苏木精-伊红（HE）染色观察睾丸组织病理改变,图像分析系统对生精小管直径（MSTD）进行检测,Johnsen评分法评价生精上皮细胞发育情况;取大鼠血清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清性激素睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）水平;以蛋白免疫印迹（Western blot）法检测睾丸组织PI3K/Akt通路蛋白及下游靶蛋白雷帕霉素靶分子（mTOR）蛋白表达,并检测精原细胞增殖、分化及精子形成相关指标碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、早幼粒细胞白血病锌指（PLZF）,跨膜酪氨酸激酶受体（C-kit）相对表达水平。结果　与Control组比较,Model组睾丸指数和T水平降低,FSH水平升高,MSTD、生精细胞发育评分及睾丸组织bFGF、PLZF、C-kit、PI3K、 p-Akt/Akt、mTOR蛋白表达水平降低（P＜0.05）。与Model组比较,YTF低、高剂量组睾丸指数和T水平升高,FSH水平降低,MSTD、生精细胞发育评分及睾丸组织bFGF、PLZF、C-kit、PI3K、p-Akt/Akt、mTOR蛋白表达水平升高（P＜0.05）,YTF高剂量组上述指标变化较低剂量组显著;而LY组上述指标变化与YTF低、高剂量组相反;YTF+LY组与Model组差异均无统计学意义。结论　YTF可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达,促进精原细胞增殖、分化和精子形成,改善无精/少精症大鼠生精功能。     

黄芪甲苷联合氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织PI3K/Akt/NF-κB通路的影响

目的探讨黄芪甲苷联合氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响。方法采用尾静脉注射链脲佐菌素(50 mg·kg~(-1))的方法建立糖尿病模型,并于4周后检测大鼠24 h尿蛋白排泄量,以≥30 mg视为糖尿病肾病(DN)模型建立成功。随机将DN大鼠分为模型组、黄芪甲苷组(60 mg·kg~(-1))、氯沙坦组(30 mg·kg~(-1))、黄芪甲苷+氯沙坦组(30 mg·kg~(-1)+15 mg·kg~(-1)),另取正常大鼠作为对照,每组10只。各给药组给予相应药物治疗8周,检测大鼠空腹血糖值(FBG)、尿蛋白(UmAlb)及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量,计算肾组织肥大指数,Western blot法和RTPCR法分别检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白和基因的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肾肥大指数、FBG、UmAlb、Scr、BUN水平均明显升高(P <0.01),肾组织PI3K、Akt磷酸化蛋白及基因表达显著下降(P <0.01),NF-κB表达升高(P <0.01);经黄芪甲苷、氯沙坦单独或联合治疗后,大鼠肾肥大指数、UmAlb、Scr、BUN水平均有明显下降(P <0.01或P <0.05),肾组织PI3K、Akt磷酸化蛋白及基因表达上升(P <0.01或P <0.05),NF-κB表达显著下降(P <0.01)。各给药组之间相互比较发现,联合给药组对大鼠肾肥大指数、UmAlb水平以及PI3K/Akt/NF-κB通路的调控作用较单独给药组更为明显(P <0.05),而黄芪甲苷组与氯沙坦组比较无明显差异。结论黄芪甲苷联合氯沙坦能通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路改善糖尿病大鼠的肾组织损伤状况,延缓DN的发生发展,且疗效要优于单独给药。     

补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:将60只健康雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(0.09 mg/kg雌二醇)和补骨脂素低、中、高剂量组(22、44、88 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均采用卵巢摘除去势法建立绝经后骨质疏松模型。术后正常饲养2个月,正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,各药物组大鼠灌胃相应药液;灌胃体积均为0.005 mL/g,每天1次,连续98天。末次给药24 h后,测定大鼠右侧下肢股骨和椎骨的骨密度,血清中钙离子、骨钙素、Ⅰ型前胶原N端前肽(P1NP)含量和骨形态发生蛋白2(BMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,以及股骨组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2、VEGF水平均显著降低,PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,补骨脂素中、高剂量组和阳性对照组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2(补骨脂素中剂量组除外)、VEGF(补骨脂素中剂量组除外)水平均显著升高,各药物组PI3K、Akt、m TOR mRNA(补骨脂素低剂量组除外)及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),且高剂量组股骨骨密度和钙离子、BMP2水平以及PI3K蛋白表达水平均显著高于阳性对照组(P<0.05),mTOR mRNA表达水平显著低于阳性对照组(P<0.05)。结论:补骨脂素可改善绝经后大鼠的骨质疏松,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

金钗石斛多糖对阿霉素肾病大鼠肾纤维化及PI3K/Akt/HIF-1α通路的影响【证明信、版权转让书、校对稿已收到】

摘 要 目的：探讨金钗石斛多糖对多柔比星肾病大鼠肾组织纤维化及磷脂酰肌醇3激酶/丝氪酸 苏氪酸蛋白激酶/缺氧诱导因子 1α（PI3K/Akt/HIF-1α）信号通路的影响,并分析其可能的作用机制。 方法: 将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组（依那普利,4 g·kg-1·d-1）、金钗石斛多糖低（5 g·kg-1·d-1）、中（10 g·kg-1·d-1）、高（20 g·kg-1·d-1）剂量组,每组各8只。除正常对照组外,其余各组大鼠制备多柔比星肾病大鼠模型。造模成功后灌胃给药,1次/d,连续给药4周,正常对照组和模型组给予等量生理盐水。采用Masson染色观察多柔比星肾病大鼠肾脏纤维化程度;检测各组大鼠肾功能指标;采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肾组织中平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平;Western blot法检测α SMA、FN、CTGF、PI3K及磷酸化PI3K（p PI3K）、Akt及磷酸化Akt （p Akt）、HIF-1α蛋白表达。 结果: 与正常对照组相比,模型组大鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平、24 h尿蛋白含量、胶原纤维阳性区占观察视野面积比、肾组织中α SMA、FN、CTGF及p PI3K、p Akt、HIF-1α表达水平均显著升高（P＜0.05）;与模型组相比,阳性对照组与金钗石斛多糖不同剂量组大鼠Scr、BUN水平、24 h尿蛋白含量、胶原纤维阳性区占观察视野面积比、肾组织中α SMA、FN、CTGF及p PI3K、p Akt、HIF-1α表达水平均显著降低（P＜0.05）,且金钗石斛多糖高剂量组与阳性对照组均显著低于金钗石斛多糖低、中剂量组（P＜0.05）,阳性对照组与高剂量组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。各组PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论: 金钗石斛多糖可改善多柔比星肾病大鼠肾功能并减缓肾纤维化,其机制可能与抑制PI3K/Akt/HIF-1α信号通路有关。     

丹参素经PI3K/Akt/Bax信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用

摘要：目的:探讨丹参素经磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）/促凋亡基因（Bax）信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用。方法:100只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、乌司他丁组（20 mg·kg-1）、丹参素低、高剂量组（40,80 mg·kg-1）,每组20只。除假手术组外,其余各组建立脓毒症模型。乌司他丁组、丹参素低、高剂量组给予相应药物灌胃,假手术组及模型组给予等体积的生理盐水,1次/d,持续给药7 d。实验结束后,评估大鼠神经功能,观察大鼠海马神经元病理结构,测定大鼠海马组织PI3K、Akt、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组Basso-BeattieBresnahan（BBB）评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显降低,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,乌司他丁组和丹参素低、高剂量组BBB评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显升高,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与乌司他丁组比较,丹参素低剂量组各指标差异有统计学意义（P<0.05）,高剂量组与其作用相似（P>0.05）。结论:丹参素可减轻脓毒症大鼠脑损伤,其机制与丹参素激活PI3K/Akt信号通路进而抑制Bax的表达有关。     

淫羊藿苷介导PI3K/Akt信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的研究

目的 探讨淫羊藿苷调控磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和淫羊藿苷10、20、40mg/kg组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖和im甲泼尼龙制备激素性股骨头坏死大鼠模型。淫羊藿苷组大鼠分别ig10、20、40mg/kg的淫羊藿苷,对照组、模型组均ig等量生理盐水,每天1次,连续6周。采用Micro-CT评估造模是否成功并分析骨密度（BMD）、骨体积密度（BV/TV）、骨表面积密度（BS/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁分离度（Tb.Sp）;ELISA法检测血清中血管内皮生长因子（VEGF）、一氧化氮（NO）水平;Western blotting法检测股骨头PI3K、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组BMD、Tb.Th、BV/TV、Tb.N、BS/TV、VEGF和NO水平明显降低,Tb.Sp明显增高（P＜0.05）;与模型组比较,淫羊藿苷组的BMD、Tb.N、BV/TV、Tb.Th、BS/TV、VEGF和NO水平明显增高,Tb.Sp明显降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组PI3K和p-Akt蛋白表达均减少（P＜0.05）;与模型组比较,淫羊藿苷组PI3K和p-Akt蛋白表达均增加（P＜0.05）。结论 淫羊藿苷能够有效缓解激素性股骨头坏死的进展,其机制可能与调节血清中VEGF、NO水平和增加骨组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达有关,从而诱导血管修复与新生,促进骨形成和愈合。     

川芎嗪通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导自噬改善糖尿病肾病大鼠肾损害

目的 探讨川芎嗪对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏 PI3K/Akt/mTOR信号通路和自噬标志蛋白 LC3B表达以及 尿微量白蛋白与尿肌酐比值（UACR）、肾脏病理的影响。方法 采用链脲佐菌素建立 DN大鼠模型,将模型大鼠随机 分为模型组,川芎嗪低、中、高剂量组,厄贝沙坦组;另设正常组,每组 12只。分别干预 8周后,采用酶法测定尿肌酐, 免疫比浊法测定尿微量白蛋白,计算 UACR;取肾组织,经甲醛固定后,进行苏木精-伊红（HE）和过碘酸-雪夫（PAS） 染色;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化检测大鼠肾组织 PI3K/Akt/mTOR信号通路以及自噬标志蛋白 LC3B 表达的变化。结果 川芎嗪能减缓 DN 大鼠 UACR 的升高,改善其肾脏病理变化,其中川芎嗪中、高剂量组 UACR显著低于模型组（P＜0.05）,且川芎嗪中、高剂量组与厄贝沙坦组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。此外, 川芎嗪能抑制 DN大鼠肾组织 p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达,进而提高自噬标志蛋白 LC3B的表达水平和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ比值。结论 川芎嗪能降低 DN大鼠 UACR的升高、改善其肾脏病理变化,发挥以上肾保护作用的机制可能 与其抑制 PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而促进肾脏自噬有关。     

牡荆素调控PI3K/Akt通路对脑外伤大鼠的神经保护作用研究

目的 通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路探讨牡荆素对脑外伤大鼠的神经保护作用。方法 选用SD大鼠90只,随机分成假手术组,模型组,牡荆素假手术组（12 mg/kg牡荆素）,牡荆素低（3 mg/kg牡荆素）、高剂量组（12 mg/kg牡荆素）和吡拉西坦组（20 mg/kg吡拉西坦）,每组18只。采用自由落体致伤法建立脑外伤大鼠模型;采用神经功能评分法评价神经功能缺损程度;测定脑组织的含水量;苏木素伊红（HE）染色检测脑组织病理变化;TUNEL法检测脑组织神经细胞的凋亡情况;ELISA法检测脑组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;Western blotting法检测脑组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠神经元变性坏死,毛细血管破裂,可见大量出血、炎性细胞浸润,神经功能受损评分、细胞凋亡指数、脑组织含水量及MDA含量显著升高（P<0.05）,SOD、GSH-Px含量及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平显著降低（P<0.05）。与模型组相比,牡荆素低、高剂量组和吡拉西坦组大鼠病理变化均有一定程度减轻,神经功能受损评分、细胞凋亡指数、脑组织含水量及MDA含量显著降低（P<0.05）,SOD、GSH-Px含量及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平均显著升高（P<0.05）。假手术组和牡荆素假手术组各项指标差异无统计学意义。牡荆素高剂量组和吡拉西坦组各项指标差异无统计学意义。结论 牡荆素可能通过激活PI3K/Akt信号通路,发挥脑外伤大鼠的神经保护作用。     

玉郎伞查尔酮调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制研究

目的探讨玉郎伞查尔酮(YLSC)调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法 40只♂SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、YLSC组、YLSC+PI3K抑制剂wortmannin组(YLSC+WM组)、PI3K抑制剂wortmannin组(WM组),每组8只。除假手术组外,其它各组大鼠均结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血30 min,再灌注120 min。实验结束后,采用比色法测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)水平,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,Western blot法检测心肌组织中总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,FQ-PCR法分析内皮型一氧化氮合酶(eN OS)、凋亡因子caspase-3及自噬相关基因Beclin1的表达量变化。结果与I/R组比较,YLSC组CK-MB、LDH以及TNF-α血清含量明显降低,NO水平升高,Beclin1、caspase-3及LC3-Ⅱ的表达量均明显下降,同时Akt的磷酸化水平与eN OS mR NA表达增加,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K/Akt信号通路的特异性阻断剂wortmannin所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 YLSC通过激活PI3K/Akt信号通路抑制缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡和过度自噬,从而发挥对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。     

肾上腺髓质素对肾肿瘤细胞 PI3 K／Akt／eNOS／VEGF信号通路的作用

目的：研究肾上腺髓质素（ADM）对肾肿瘤细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）／内皮型一氧化氮合酶（ eNOS）／血管内皮生长因子（ VEGF）信号通路的影响。方法将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM组、VEGF组,ADM＋VEGF受体抑制剂组,ADM＋ADM shRNA组,每组设置24 h、48 h、72 h 3个时间梯度,western-blot检测对照组和ADM组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS、VEGF表达;检测VEGF组,ADM＋VEGF受体抑制剂组和ADM＋ADM shRNA组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS的表达。结果 PI3K、Akt、eNOS、VEGF在ADM组各时间梯度组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞的表达（ P ＜0．05）。 PI3K、Akt、eNOS在VEGF组和ADM＋VEGF受体抑制剂组各时间组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞中表达（ P ＜0．05）。 PI3K、Akt 、eNOS在ADM＋ADM shRNA组各时间组肾肿瘤细胞中表达与其在对照组细胞中表达差异无统计学意义（ P ＞0．05）。结论 ADM可激活PI3K／Akt／eNOS／VEGF信号通路;VEGF 受体抑制剂不能阻断 ADM 激活 PI3K／Akt／eNOS 信号通路。 ADM 一方面通过VEGF发挥肾肿瘤血管生成作用,另一方面通过其受体激活PI3K／Akt／eNOS信号通路参与肾肿瘤血管生成作用。ADM可能成为抗血管治疗肾肿瘤新的靶点。     

二甲双胍调控PI3K/Akt通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响研究

摘 要 目的：探讨二甲双胍调控磷脂酰肌醇3 激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬的影响。 方法: 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二甲双胍低（150 mg·kg-1）、中（300 mg·kg-1）、高（500 mg·kg-1）剂量组、自噬激动剂组（雷帕霉素,5 mg·kg-1）,制备心肌缺血再灌注大鼠模型,药物处理组于建模前3 d以不同剂量二甲双胍及雷帕霉素每天灌胃治疗,模型组及假手术对照组采用等体积生理盐水灌胃,持续3 d。造模成功12 h后,处死大鼠,三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测血清中磷酸肌酸同工酶（CK MB）及肌钙蛋白I（cTnI）含量,免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3、P62阳性细胞比例,蛋白免疫印迹（Western blot）检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3（包括LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ）、P62及PI3K/Akt 通路蛋白p PI3K、PI3K、Akt、p Akt表达情况。 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显升高,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显降低（P＜0.05）;心肌组织中LC3 Ⅰ、PI3K、Akt蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组比较,各药物处理组大鼠心肌梗死面积、血清中CK MB、cTnI含量、心肌组织中P62阳性细胞比例、P62、p PI3K、p Akt蛋白表达明显降低,心肌组织中Beclin 1、LC3阳性细胞比例、Beclin 1、LC3 Ⅱ蛋白表达明显升高（P＜0.05）,且二甲双胍各组呈剂量依赖性。二甲双胍低、中剂量组与自噬激动剂组比较,以上各指标差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论: 二甲双胍通过促进心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞自噬,发挥心肌保护作用,其机制可能与下调PI3K/Akt通路有关。     

原花青素通过SIRT1/AMPK信号通路对庆大霉素致大鼠急性肾损伤的改善机制

目的 探究原花青素对庆大霉素致大鼠急性肾损伤（AKI）的改善机制。方法 通过腹腔注射硫酸庆大霉素构建AKI大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、盐酸贝那普利5 mg/kg组（阳性对照）、原花青素50 mg/kg组、原花青素100 mg/kg组、原花青素200 mg/kg组,每组10只;另取10只正常大鼠作为正常对照组。各给药组大鼠灌胃相应药液,正常对照组和模型对照组大鼠灌胃等体积生理盐水。所有大鼠每天给药1次,连续28 d。末次给药后,检测血清中血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及24 h尿液中尿蛋白（UP）水平;计算肾脏指数;观察大鼠肾组织病理变化并进行病理评分;检测肾组织细胞凋亡率和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2基因相关X蛋白（Bax）表达水平,以及沉默信息调节因子1(SIRT1)、AMP活化蛋白激酶（AMPK）蛋白的磷酸化水平。结果 与模型对照组比较,各给药组大鼠SCr、BUN、UP、MDA水平,肾脏指数,肾组织病理评分,肾组织细胞凋亡率及肾组织中Caspase-3、B...     

小檗碱调节AMPK/NF-κB信号通路对自身免疫性前列腺炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的 探讨小檗碱调节腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/核因子-κB(NF-κB)信号通路对自身免疫性前列腺炎（EAP）大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞（Treg）平衡的影响。方法 将90只SD雄性大鼠随机分为对照组（正常饲养）、模型组、小檗碱低剂量组（25 mg/kg）、小檗碱高剂量组（50 mg/kg）、阳性对照组（40 mg/kg塞来昔布）、抑制剂组（50 mg/kg小檗碱+0.2 mg/kg AMPK抑制剂compound C），每组15只。除对照组外，其余组大鼠均采用盆腔区域及双侧肩胛皮下多点注射完全弗式佐剂与前列腺组织混合悬液构建EAP大鼠模型，建模成功后进行药物处理，每天灌胃给药1次，持续4周。HE染色观察各组大鼠前列腺组织病理情况；免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织视黄酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白3(Foxp3)表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清中白细胞介素（IL）-17、IL-10水平；流式细胞仪检测大鼠外周血中Th17/Treg细胞比值；通过Western blot法检测大鼠前列腺组织中AMPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达...     

紫檀芪对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及机制

目的 探究紫檀芪（PTE）对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及机制。方法 取10只SD大鼠为对照组,其余大鼠以饲喂高脂高糖饲料+腹腔注射链脲佐菌素+剪去背部标记区域皮肤及皮下组织建立糖尿病性皮肤溃疡模型后,随机分为模型组、PTE低剂量组（40 mg/kg）、PTE高剂量组（80 mg/kg）和PTE高剂量+PP2组（80 mg/kg的PTE+2 mg/kg的SRC抑制剂PP2）,每组10只。于建模后第2天,各药物组大鼠腹腔注射相应药液,对照组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水,每天1次,连续14 d。测算各组大鼠给药第7、14天的创面愈合率,检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子（VEGF）含量,观察创面肉芽组织的病理变化并检测创面肉芽组织中SRC/促分裂原活化的蛋白激酶激酶（MEK）/胞外信号调节激酶（ERK）信号通路相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠的创面愈合率、血清中VEGF含量和创面肉芽组织中SRC、MEK1/2、ERK1/2的磷酸化水平均显著降低（P<0.05）,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α...     

栀子苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症反应、氧化应激和PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨栀子苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症反应、氧化应激和PI3K/Akt信号通路的影响。方法 将SD大鼠分为对照组、模型组和栀子苷5、10 mg/kg组,每组各10只。对照组、模型组大鼠ip溶剂橄榄油10 mg/kg,栀子苷5、10 mg/kg组大鼠ip栀子苷5、10 mg/kg,连续7 d,最后一次注射药物后进行肝缺血再灌注损伤建模处理。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素、直接胆红素以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;测定肝组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;观察肝组织病理学变化和细胞凋亡;检测肝组织凋亡相关因子Bcl-2、Bax mRNA表达及p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组相比,栀子苷5、10 mg/kg组血清ALT、AST、总胆红素、直接胆红素水平、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-1β、MDA和iNOS水平、肝组织凋亡细胞比例、Bax mRNA、蛋白表达和cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低(P<0.05),GSH、SOD水平、Bcl-2 mRNA和蛋白表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05),且栀子苷10 mg/kg组作用效果更明显(P<0.05)。结论 栀子苷能够改善大鼠肝功能,减轻氧化应激、炎症反应和细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

2型糖尿病大鼠心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路的改变及Sirt1的调控机制研究

目的检测Sirt1及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白在糖尿病大鼠心肌及高糖培养的H9C2细胞中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为糖尿病2周、4周、8周模型组和对照组,超声心动图检测大鼠心功能变化,Western blot检测大鼠心肌Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1蛋白表达变化。将H9C2细胞分为正常对照组、DMSO组(78.12 mmol·L~(-1))、高糖(HG)组(33 mmol·L~(-1))、白藜芦醇(Res)组(20μmol·L~(-1))、尼克酰胺(Nam)组(40 mmol·L~(-1)),Western blot及qRT-PCR研究心肌细胞Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1相关蛋白基因转录及表达,研究Sirt1对该信号通路的调控机制。结果在动物实验中,与2周DM大鼠比较,8周DM大鼠心肌Sirt1蛋白表达明显增加。2周模型组大鼠相对于正常对照组心肌PI3K、Akt、mTOR、S6K1表达明显增加,且S6K1表达4周模型组比2周模型组增加更明显,但8周表达降低。在高糖培养的H9C2细胞中,与对照组相比,高糖组Sirt1,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达明显增高。Nam处理组Sirt1表达明显降低,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达增高。Res处理组Sirt1表达明显增高,而PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达降低。结论 Sirt1通过负调控PI3K/Akt/mTOR信号通路参与糖尿病心肌损伤,参与早期糖尿病心肌病的发生发展。