乳猪肝制备肝水解肽的工艺研究

目的以乳猪肝为原料制备肝水解肽，分析产品活性。方法应用酶水解／超滤法提纯制备肝水解肽，采用Folin-酚法、四氮甲唑蓝（MTT）法测定含量及活性，并与成年动物肝脏对比。结果乳猪肝组收率明显高于成年动物肝组，产品活性与后者的比较，极显著性差异。结论采用乳猪肝制备肝水解肽，产品的生物活性高，收率好，具有一定的应用价值？     

促肝细胞生长素溶液不同制备方法的比较

目的比较从乳猪肝中提取促肝细胞生长素溶液的不同方法。方法对乳猪肝匀浆液分别用反复冻融、酸水解和酶水解3种方法提取，计算单位收率及单位生产成本。结果3种方法制备的促肝细胞生长素溶液均符合国家药品标准，但收率和活性不同。用酸水解法，多肽含量及收率比反复冻融法提高2倍，酶解法多肽含量及收率比反复冻融法提高2．4倍，酸解法和酶解法的活性值比反复冻融法都有所降低。酸水解法的单位成本只有反复冻融法的1／2，酶解法的单位成本与反复冻融法的基本相同。结论3种方法制备的促肝细胞生长素溶液在收率和成本方面有较大的不同，酸水解方法更适合于大规模生产。     

肝水解肽样品中牛源及猪源性成分的PCR检测

目的:建立肝水解肽各工艺步骤段中样品的PCR检测方法,用于检测生产原料的动物来源是牛源性或猪源性。方法:分别对猪源性及牛源性肝水解肽各工艺步骤段中样品进行了DNA提取,并加入猪、牛特异性引物进行扩增。对扩增产物进行酶切及测序验证。结果:工艺段为超滤液四之前的样品均可提取并扩增出相应的DNA片段,牛源性PCR产物与Genbank中牛序列的同源性为100%,猪源性PCR产物与猪序列的同源性为99.4%,PCR扩增的检测限为0.5 mg·mL-1的肝细胞酶解液。结论:可用本方法检测肝水解肽各工艺步骤段中超滤液四之前的样品。     

方格星虫多肽的结构分析及体外抗氧化活性

目的 以方格星虫为原料,酶解制备水溶性多肽并考察其抗氧化活性,探究其结构-活性关系。方法 利用5种蛋白酶酶解新鲜方格星虫,并结合超滤方法得到高分子量(>50kDa)、中分子量(5～50 kDa)和低分子量(＜5kDa)的酶解肽段;利用氨基酸自动分析仪测定方格星虫酶解肽的氨基酸组成。综合考察多肽对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH.)自由基、羟基自由(.OH)、超氧阴离子自由基( O-2.)的清除能力以及还原力效果,评价方格星虫多肽抗氧化活性;利用高效液相色谱-串联质谱方法鉴定小分子肽的氨基酸组成和序列结构。结果 胰蛋白酶水解方格星虫4h得到的酶解液蛋白含量最高,并在酶解液中检测确定了17种氨基酸,其中精氨酸含量最高13.65%。高中低三组肽段中,低分子量肽段的抗氧化活性优于其他：对DPPH 自由基和羟自由基清除能力大小顺序为低分子量>高分子量>中分子量、对超氧阴离子清除能力大小顺序为低分子量>高分子量≈ 中分子量、还原能力强弱顺序为高分子量>低分子量 > 中分子量。经高效液相色谱-串联质谱联鉴定了GFAGDDAPR、GLGGLSPEK 、LDLAGR和VTKEIPR 4个肽段。结论 低分子量的方格星虫酶解多肽具有较好的抗氧化活性,有潜力用作生物医药或化妆品工业的原料。     

酶法制备牡蛎抗氧化肽研究

目的优化牡蛎酶解制备抗氧化肽的工艺。方法通过正交试验法确定胃蛋白酶、胰蛋白酶及这两种蛋白酶的酶解液抗氧化(Fenton体系)的最佳工艺条件;采用Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱层析法对酶解液中抗氧化肽进行分离纯化。结果胃蛋白酶最佳酶解条件:温度35℃、加酶量2.5%、时间6h、pH 2.0,在此条件下清除率达到50%时的酶解液浓度(EC50)为1.929mg.mL-1;胰蛋白酶最佳酶解条件:温度45℃、加酶量2%、时间8h、pH 7.5,EC50为1.165mg.mL-1;胰蛋白酶、胃蛋白酶分步酶解法的酶解液EC50为0.869mg.mL-1。双酶酶解液经纯化后,得相对分子质量为751的抗氧化活性肽组分(BPO-Ⅱ),其EC50为0.529mg.mL-1。结论双酶酶解法优于单酶酶解法,从双酶酶解液中分离纯化得抗氧化肽BPO-Ⅱ。     

牡蛎酶解产物中多肽的分离纯化及其结构研究

目的从牡蛎蛋白质的酶解产物中分离制备具有活性的多肽并对其结构进行研究。方法采用胰蛋白酶对牡蛎蛋白质进行酶解,使其释放出具备特殊活性的肽,将含有活性肽的粗提物分别用Sephadex G25凝胶柱层析,DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析和C18反相柱进行分离和纯化。结果牡蛎酶解产物经过分离纯化制备得到纯度较高的多肽F32,红外光谱的测定表明该肽的肽链是以α-螺旋的构型存在。电喷雾串联质谱法分析多肽F32完整的氨基酸序列为:Arg-Gln-Ile或Leu-Gly-Ala-Thr-Asn-Ala。结论本研究将为牡蛎酶解多肽F32构效关系的研究提供基础。     

红非鲫(Oreochromis niloticus)鱼皮胶原蛋白酶解条件的研究

目的研究单酶和复合酶水解红非鲫鱼皮胶原蛋白制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)生物活性的寡聚肽的工艺条件。方法根据6种单酶的水解产物对ACE抑制作用的测定结果,确定了两种酶即菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L碱性蛋白酶组成复合水解酶。采用正交试验确定了这两种酶单独水解鱼皮胶原蛋白的最适酶解条件。结果与结论菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L蛋白酶的最适酶解温度,pH,酶/底物,时间,底物浓度分别为45℃,pH4.5,4000U.g-1,4h,6%和55℃,pH7.5,6000U.g-1,2h,4%。在此基础上,进行复合酶水解实验,结果表明先采用菠萝蛋白酶水解,再用alcalase 2.4L蛋白酶水解,效果更佳。采用该双酶复合水解工艺,所得水解产物的水解度为30.43%,体外对ACE的抑制率达68.6%。     

猪胎脑活素注射液的研制

目的 :在Paparizov等制备方法的基础上进行改良 ,提取猪胎脑活素。 方法 :采用新鲜猪胎脑 ,经酸碱水解、反复酶解、超滤等方法精制而成。结果 :猪胎脑活素注射液含有多种氨基酸、多肽、乙酰胆碱及神经生长因子 ,经测定游离氨基酸含量为 30 .9mg/ml,小肽含量为 30mg/ml,总氮量为 4.72～ 5 .74mg/ml。结论 :此方法工艺简单 ,来源丰富 ,提取率高     

美洲大蠊抗肝纤维化活性提取物的酶解制备工艺研究

目的 优选中性蛋白酶酶解美洲大蠊脱脂膏制备抗肝纤维化活性提取物的工艺。方法 以美洲大蠊脱脂膏的水解度、活性提取物的得率和体外活性为评价指标,在单因素考察（酶用量、酶解时间、pH值、酶解温度、底物浓度）的基础上,采用L₉（3⁴）正交试验优化中性蛋白酶酶解制备抗肝纤维化活性提取物的工艺。结果 最佳酶解工艺为酶用量0.3%,酶解时间2 h,pH值8.5,酶解温度45℃,底物密度1.07 g·mL^-1。工艺验证试验结果表明,美洲大蠊脱脂膏的水解度为15.8%,活性提取物的得率从0.54%提高到0.72%,其24,48,72 h的IC₅₀值分别为（118.37±3.12）,（115.16±2.48）,（105.00±6.35）μg·mL^-1。结论 研究得到美洲大蠊抗肝纤维化活性提取物的酶解制备工艺,该工艺得率较高,简单可行,为美洲大蠊抗肝纤维化药物的研发奠定基础。     

壳寡糖的制备及组分分析

目的　研究以壳六糖为主的壳寡糖制备工艺并对制备物组分进行分析。方法　用酶解法水解壳聚糖,有机溶剂法提取壳寡糖,色谱法分离纯化壳六糖,HPLC法分析检测壳寡糖组分。结果　壳寡糖粗提物中的主要成分为6-7聚壳寡糖,色谱分离得到较纯的壳六糖。结论　该制备工艺可以得到以6-7聚壳寡糖为主的壳寡糖制备物     

海洋小球藻多糖的制备及其体外抑制肿瘤血管生成活性的研究

目的 研究海洋小球藻多糖的制备工艺及其抑制肿瘤血管生成的作用。 方法 比较多种提取方法提取多糖,确定最适提取工艺,经乙醇沉淀,并结合DEAE- Cellulose 52 柱色谱分离纯化;采用创伤愈合法测定小球藻多糖对肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞迁移的抑制作用。结果 选择闪式萃取结合酶法最适宜提取小球藻多糖,其最佳提取条件为胰蛋白酶酶用量为1.5%、酶解pH值为6.5、酶解温度为40℃、酶解时间为1.5h,经柱色谱分离得到的小球藻多糖在浓度50、100ug/mL时可抑制肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞迁移。结论 采用闪式萃取-酶解结合柱色谱可获得小球藻多糖,其具有一定的抑制肿瘤血管生成活性。     

肝水解肽注射液致过敏性休克1例分析

报道分析1例女性乳腺癌患者静脉滴注肝水解肽注射液后突然出现过敏性休克的病例,检索国内文献曾发生过类似的报道。提示肝水解肽注射液可致严重的过敏反应,临床应加以监测。     

β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺研究

目的:研究用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺。方法:采用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ,以转化率为指标,通过单因素试验考察温度、pH值、酶与底物质量比、底物浓度和反应时间对转化率的影响。结果:酶解反应的优化条件为温度50℃、pH=5.0的枸橼酸-枸橼酸三钠缓冲液、酶与底物质量比1:2、底物浓度1mg·mL-1、反应时间90min。结论:β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ,转化率高,工艺简单、可靠,反应条件温和。     

Stabilisation and determination of the biological activity of L-asparaginase in poly(D,L-lactide-co-glycolide) nanospheres

The preservation of biological activity of protein drugs in formulations is still a major challenge for successful drug delivery. The enzyme L-asparaginase, which exhibits a short in vivo half-life and is only active against leukaemia in its tetrameric form, was encapsulated in poly(D,L-lactide-co-glycolide) nanospheres by the (w/o)/w-emulsion solvent evaporation technique in presence of various potential stabilisers. Elucidation of the preparation steps revealed that the enzyme is denaturated at the aqueous/organic interface and by sonication. The preparation of L-asparaginase nanospheres with trehalose, PEG 400, and glycerol as components of the inner aqueous phase yielded colloidal formulations with increased biological activity as determined by an improved protocol for quantification of the active enzyme encapsulated. After lyophilisation the enzyme activity and particle size distribution were retained only by use of Pluronic F68 as a lyoprotectant. Despite the unaltered particle size and improved biological activity, the release profile of the enzyme was strongly altered by coencapsulation of the stabilisers resulting in increased first bursts. In consequence, the biological activity of L-asparaginase during preparation and storage can be improved by combining appropriate additives but concurrently the release profile is influenced.     

Dopamine D2 receptor binding subunits of Mr congruent to 140,000 and 94,000 in brain: deglycosylation yields a common unit of Mr congruent to 44,000

The ligand-binding subunit of the porcine striatal dopamine D2 receptor was identified by photoaffinity labeling with [125I]N-azidophenethylspiperone ([125I]NAPS). Upon photolysis, [125I]NAPS covalently incorporated into a broad band of apparent Mr congruent 140,000 with an appropriate pharmacological profile for D2 receptors as assessed by autoradiography after sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. Smaller subunits of apparent Mr congruent 94,000 and 34,000 were specifically labeled by [125I]NAPS with an appropriate D2 receptor profile and were similar to the major ligand-binding subunits of photoaffinity-labeled canine striatal D2 receptors. Photoaffinity labeling in the absence or presence of multiple protease inhibitors did not alter the migration pattern of the Mr congruent to 140,000/94,000 subunits upon denaturing electrophoresis in either the absence or presence of thiol-reducing/alkylating reagents. In order to investigate the possible basis for the existence of these high molecular weight forms of the D2 receptor, we assessed the carbohydrate nature of photolabeled D2 ligand-binding subunits by the use of lectin affinity chromatography and specific exo- and endoglycosidase treatments. Both photoaffinity-labeled D2 receptor proteins from porcine striatum (Mr congruent to 140,000 and 94,000) were glycoproteins as indexed by their absorption and specific elution from wheat germ agglutinin lectin resins. The exoglycosidase neuraminidase altered the electrophoretic mobility of both the Mr congruent to 140,000 and 94,000 labeled subunits to a single band of apparent Mr congruent to 51,000. Prior removal of sialic acid residues did not alter the reversible binding characteristics of [3H]spiperone to D2 receptors. Complete removal of receptor-associated N-linked carbohydrate by the endoglycosidase glycopeptidase F (peptide-N4[N-acetyl-beta-glucosaminyl]asparagine amidase) produced a further increase in the mobility of the Mr congruent to 51,000 subunit to apparent Mr congruent to 44,000. The porcine Mr congruent to 34,000 photolabeled peptide is an N-linked glycoprotein as assessed by lectin affinity chromatography and susceptibility to digestion by glycopeptidase F to a peptide of apparent Mr congruent to 23,000.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)     

复方氟康唑滴眼液的制备及含量测定

目的 :制备复方氟康唑滴眼液及建立其含量测定方法。方法 :采用二阶导数光谱法测定氟康唑的含量。结果 :氟康唑在80～400μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系 ,回归方程 :D=0 0094 +0 002C ,r=0 9998 ;回收率为99 83 % (RSD=0 69 % ,n=5)。结论 :该滴眼液质量稳定 ;含量测定方法简便、快速 ,结果可靠。     

前列地尔脂质体制备工艺条件优化

目的:对制备前列地尔脂质体的工艺条件进行优化。方法:采用滴入法制备前列地尔脂质体,并以脂质体粒径及包封率为指标进行工艺条件优化。结果:前列地尔脂质体最佳制备工艺条件为乙醇处方用量12·5%、搅拌速度600r·min-1、滴入时间45min、缓冲液pH4·05;制备的脂质体粒径范围60～200nm,包封率为88·0%～90·5%。结论:滴入法制备前列地尔脂质体方便,可靠;制备工艺合理,可行。     

酶解法提取虎杖中白藜芦醇

目的研究酒曲对虎杖中白藜芦醇的酶解提取效果的影响。方法采用单因素实验及正交试验进行优选,考察酶解温度、酶解时间、酒曲用量等因素的影响,优化提取条件;采用HPLC法测定提取液中白藜芦醇含量,计算提取率,比较提取效果。结果虎杖通过酒曲酶解后,能提高白藜芦醇的提取率。结论较优工艺为酒曲用量0．5％,40℃酶解3h。该工艺对比直接提取法提取率提高近2倍,且重现性好,适宜工业化生产。