膀胱移行细胞癌中FHIT、p21waf1/cip1基因的表达

目的 通过测定脆性组氨酸三联体基因(FHIT)及p21waf1/cip1基因在膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中的表达,探讨FHIT基因以及p21waf1/cip1基因与膀胱癌的关系及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法对43例膀胱移行细胞癌(BTCC)组织及14例正常膀胱组织中的FHIT基因及p21waf1/cip1基因的蛋白表达进行检测.结果 Fhit蛋白与p21waf1/cip1蛋白在正常膀胱组织中的表达明显高于膀胱癌组织(P<0.05);Fhit蛋白表达与肿瘤的分期、分级无相关性(P>0.05),而p21waf1/cip1蛋白的表达与之有相关(P<0.05);Fhit蛋白的表达在GI期肿瘤、浅表性肿瘤中明显低于在正常膀胱组织中的表达(P<0.05),而p21waf1/cip1蛋白的表达在上述组织比较中差异无显著性;Fhit蛋白的表达在初发肿瘤中与复发肿瘤中差异无显著性,而p21waf1/cip1蛋白的表达在上述两种组织比较差异有显著性(P<0.05).Fhit蛋白与p21waf1/cip1蛋白的表达没有相关性.结论 FHIT基因可能成为早期诊断膀胱移行细胞癌的指标.p21waf1/cip1基因可能成为估计膀胱移行细胞癌的恶性程度及肿瘤侵袭性、预后的指标.FHIT基因、D21waf1/cip1基因在膀胱移行细胞癌的发生、进展中可能没有协同性.     

尿道下裂患儿包皮组织p53和p21waf/cip1mRNA的表达

目的:探讨包皮组织中肿瘤抑制蛋白p53和细胞周期调节基因p21 waf/cip1的表达与尿道下裂发病的关系.方法:采用RT-PCR技术检测30例尿道下裂患儿和30例对照组患儿包皮组织p53和p21 waf/cip1 mRNA表达水平.结果:与对照组比较,尿道下裂组p53 mRNA的表达降低(t=11.431,P=0.0...     

特发性矮小患儿血中 p53及 p21 waf／cip1的表达

目的：观察特发性矮小（ISS）患儿血中p53及细胞周期调节基因p21waf／cip1的表达,探讨二者与ISS发病机制之间的关系。方法：采用实时荧光定量PCR及ELISA法检测30例ISS患儿（ ISS组）和30名正常儿童（对照组）外周血中p53和p21 waf／cip1 mRNA的表达水平及血清中P53和P21 waf／cip1蛋白的含量。结果：ISS组患儿外周血中p53 mRNA的表达水平及血清P53的浓度与对照组相比,差异无统计学意义（ t＝1．044和0．701,P均＞0．05）,ISS组p21waf／cip1 mRNA的表达水平较对照组升高（t＝4．606,P＜0．001）。结论：p21waf／cip1可能通过非依赖p53途径参与ISS的发生。     

cyclinE、p21waf1蛋白表达与口腔鳞状细胞癌中心体扩增相关性

目的:了解口腔鳞状细胞癌(OSCC) cyclinE及p21waf1蛋白表达与中心体扩增相关性,探讨OSCC中心体扩增的分子机制.方法:8例正常口腔黏膜及27例OSCC石蜡包埋组织,采用流式细胞术对cyclinE和p21 waf1蛋白表达进行定量检测,并分析其与相应组织中心体扩增的相关性.结果:OSCC中心体扩增与cyclinE/p21waf1比值呈正相关(r =0.679,P＜0.01),而与p21waf1蛋白表达量呈负相关(r=-0.472,P＜0.05).结论:cy-clinE/p21waf1比值增高可能是OSCC中心体扩增的原因之一,p21waf1蛋白表达下调在其中可能起主要作用.     

乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究

目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。     

p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.     

脱氧核酶对cip1/waf1 mRNA的切割及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨脱氧核酶对cip1/waf1 mRNA的切割作用及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响.方法针对cip1/waf1基因的核苷酸序列,合成"10～23"型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割cip1/waf1 mRNA;转染绒毛膜癌细胞后,用RT-PCR扩增和荧光免疫方法测定cip1/waf1和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达.结果未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割cip1/waf1 mRNA;在转染绒毛膜癌细胞后,DzTi比DzT对cip1/waf1 mRNA表现出更强的切割作用,能显著地降低细胞内cip1/waf1蛋白(p21cip1/waf1蛋白或p21蛋白)水平(P＜0.01),下调bax基因的表达(P＜0.05),但对bcl-2基因的表达和细胞的生长未表现出显著的影响(P＞0.05).DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT′和DzTi′在胞外和胞内均不表现对cip1/waf1 mRNA的切割作用.结论人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割cip1/waf1 mRNA,并能上调凋亡促进基因bax的表达,表明脱氧核酶确实能够通过切割cip1/waf1 mRNA来参与细胞的凋亡过程.     

食管癌变过程中p53、BrdU、P21waf1和PCNA 蛋白表达的变化

目的:探讨食管癌及癌前病变组织中p53、P21waf1、PCNA及S期细胞标记指数(BrdU)表达的变化.方法:采用免疫组化ABC法对食管癌高发区无症状食管活检组织179例(正常上皮31例,基底细胞过度增生(BCH)117例,不典型增生(DYS)31例)、食管癌手术切除标本26例以及同一个体食管癌手术标本37例及相应癌旁组织中(正常上皮7例,BCH 29例,DYS 23例)p53、PCNA、BrdU和P21waf1进行检测.结果:不同个体和同一个体病理形态学相似的食管正常、各级癌前病变和癌组织中p53、P21waf1、PCNA和BrdU蛋白表达变化相似.随病变程度加重,PCNA、p53和BrdU阳性细胞数均呈上升趋势,但P21waf1呈下降趋势(P＜0.05).BrdU阳性表达与食管癌患者的年龄、性别、分化程度、肿瘤浸润程度及淋巴结转移均无关(P＞0.05).p53蛋白表达与食管癌患者淋巴结转移有关(P＜0.05),与其他指标无关;P21waf1的表达与细胞分化程度有关(P＜0.05);PCNA的表达与细胞分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:不同个体和同一个体食管癌变过程中存在相似的分子变化.在食管癌变过程中p53蛋白可能起重要的促进细胞增生的作用;P21waf1可能是一个重要的保护因子.     

乳腺癌细胞中p16、p21、cyclinD1的表达及临床意义

目的:探讨p16、p21和cyclinD1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法,检测60例乳腺癌组织石蜡切片上p16、p21和cyclinD1蛋白的表达,比较其与临床病理学指标之间的关系;用Kaplan-Meier法Log-rank检验进行单因素生存分析,应用Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果:p16、p21、CyclinD1蛋白阳性表达率分别为53.3%、58.3%、41.7%,阳性产物主要位于细胞核中。p16蛋白的表达与组织学分级(P<0.05)及淋巴结转移(P<0.01)相关。p21蛋白的表达与淋巴结转移相关(P<0.05)。cyclinD1蛋白的表达与ER相关(P<0.01)。p16蛋白的表达与p21、cyclinD1蛋白表达不相关(P>0.05)。p21蛋白表达与cyclinD1蛋白表达相关(P<0.05)。单因素生存分析提示,影响总生存率的因素有:组织学分级、淋巴结转移、ER和p16、p21、cyclinD1蛋白(P<0.05)。多因素生存分析结果表明,组织学分级、淋巴结转移、ER状态和p16、cyclinD1蛋白是影响乳腺癌患者总生存率的独立预后因素(P<0.05)。结论:p16、p21蛋白的失表达和cyclinD1蛋白的过表达可能参与了乳腺癌的发生和发展。p16、p21蛋白是判断乳腺癌浸润转移的客观指标,cyclinD1蛋白表达与ER有关。组织学分级、淋巴结转移、ER以及p16、p21、cyclinD1蛋白表达可能是判断乳腺癌患者术后生存的有效指标,综合考虑这些指标对判断乳腺癌的预后、合理确定治疗方案具有重要意义。     

外源性野生型p53基因对sW1990细胞调控基因表达的影响

目的：探讨外源性野生型p53基因对胰腺癌SW1990细胞调控基因表达的影响与可能机制。方法：分别采用RT-PCR和Western blot方法检测sw1990细胞、重组质粒p53-GFP转染的sw1990细胞和正常胰腺组织中p53、p21waf1/cip1、bax、puma、pten及mdm2 mRNA和蛋白的表达。结...     

P21^wafl、MDM2和P53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨P21waf1、MDM2、P53蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及其对于HCC诊断的意义.方法应用免疫组织化学SP法检测61例原发性肝细胞癌及59例相应癌旁肝组织中P21waf1、MDM2和P53蛋白的表达,并对它们之间的关系及其与肝癌的临床病理特征的关系进行统计学分析.结果P21waf1、MDM2和P53蛋白在HCC中的阳性表达率分别为31.15%(19/61)、26.23% (16/61)和57.38% (35/61),明显高于癌旁肝组织(P＜0.001).HCC中P21waf1与MDM、P53蛋白表达无明显相关性(P＞0.05).这三种蛋白的表达与肝硬化及不典型增生无关(P＞0.05).结论 P21waf1、MDM2和P53高表达均在HCC的发生中起作用,但不是早期事件;HCC中存在不依赖wt-P53途径的P21waf1的表达,HCC 中P21waf1的表达不能反映p53的基因状态.     

p53、Ki-67、p16和cyclin D1在口腔癌前病变的表达及相关性研究

目的探讨多基因表达及相互作用与口腔癌前病变癌变的关系。方法采用免疫组织化学ABC法对76例上皮异常增生和84例正常口腔黏膜p53、Ki-67、p16和cyclin D1的表达进行研究,并对上皮异常增生患者实际癌变率做了3年追踪调查。结果口腔黏膜癌前病变组织p53和Ki-67表达明显高于正常口腔黏膜,差异有统计学意义（P〈0.05）;p53和Ki-67同时过度表达与实际口腔癌前病变癌变率密切相关;口腔黏膜癌前病变组织中存在p16和cyclin D1表达失衡现象。结论p53和Ki-67同时过度表达及p16和cyclin D1表达失衡是口腔黏膜癌前病变癌变的重要标志。     

膀胱移行细胞癌中FHIT、p21^wafl/cip1基因的表达

目的通过测定脆性组氨酸三联体基因（FHIT）及p21^wafl/cip1基因在膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中的表达，探讨FHIT基因以及p21^wafl/cip1基因与膀胱癌的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法对43例膀胱移行细胞癌（BTCC）组织及14例正常膀胱组织中的FHIT基因及p21^wafl/cip1基因的蛋白表达进行检测。结果Fhit蛋白与p21^wafl/cip1蛋白在正常膀胱组织中的表达明显高于膀胱癌组织（P〈0．05）；Fhit蛋白表达与肿瘤的分期、分级无相关性（P〉0．05），而p21^wafl/cip1蛋白的表达与之有相关（P〈0．05）；Fhit蛋白的表达在GI期肿瘤、浅表性肿瘤中明显低于在正常膀胱组织中的表达（P〈0．05），而p21^wafl/cip1蛋白的表达在上述组织比较中差异无显著性；Fhit蛋白的表达在初发肿瘤中与复发肿瘤中差异无显著性，而p21^wafl/cip1蛋白的表达在上述两种组织比较差异有显著性（P〈0，05）。Fhit蛋白与p21^wafl/cip1蛋白的表达没有相关性。结论FHIT基因可能成为早期诊断膀胱移行细胞癌的指标。p21^wafl/cip1基因可能成为估计膀胱移行细胞癌的恶性程度及肿瘤侵袭性、预后的指标。FHIT基因、p21^wafl/cip1基因在膀胱移行细胞癌的发生、进展中可能没有协同性。     

Ki-67 p53蛋白在乳腺癌病理组织中的表达及临床意义

目的：检测Ki-67、p53蛋白在乳腺癌病理组织中的表达情况,探讨其临床诊断意义。方法采用免疫组化法检测65例乳腺癌病理组织及12例乳腺良性病变中Ki-67、p53蛋白的表达情况。结果 Ki-67、p53蛋白在乳腺癌病理组织中的阳性表达率分别为90.77%,53.85%,在乳腺良性病变中阳性表达率分别为0%,0%,两者差异有统计学意义（P<0.01）;Ki-67、p53蛋白的阳性表达率与临床分期、有无淋巴结转移均密切相关（P<0.01）。结论联合检测Ki-67、p53蛋白的表达,对乳腺癌与良性病变的鉴别及预后判断具有重要的参考价值。     

ATG5 介导肝癌细胞对抗营养危机的作用研究

目的 探索在小鼠肿瘤细胞中对抗营养缺乏的分子途径。方法 构建ATG 5 基因表达的质粒并瞬 时转染至细胞内;用不同靶基因的si-RNAs 转染到细胞来沉默基因的表达;不同条件下提取小鼠正常肝细胞 AML-12 和肝癌细胞Hepa1-6 的RNA 和蛋白;用qRT-PCR 检测基因的表达;用Western blot 检测蛋白的表达; 用流式细胞仪检测细胞周期;用CCK-8 的试剂测定细胞活性。结果 与小鼠正常肝细胞AML-12 比较,肝癌 细胞Hepa1-6 对缺血引发的细胞死亡有抵抗性。缺血使Hepa1-6 细胞内诱导自噬相关蛋白ATG5 表达升高 （P <0.05）;沉默内源ATG 5 基因后Hepa1-6 细胞对缺血的敏感性升高,且ATG5 诱导细胞周期抑制蛋白p21（cip1/ waf1）表达增加使细胞滞留在G1 期。结论 在营养缺乏的环境中,Hepa1-6 细胞内ATG5 表达升高,且ATG5 增加p21（cip1/waf1）的表达量使细胞滞留在G1 期,可能与对抗缺血引起的死亡有关。     

乳腺癌中CylinD1、p21^ras、p53、nm23、ER、PR的表达及其临床病理相关性研究

目的：探讨乳腺癌中中p53、p21^ras、CylinD1、nm23基因蛋白PR、ER受 的表达与乳腺癌组织学分级、分,示同年龄，肿瘤体积及有无淋巴结转移的关系。方法：以p53、p21^ras、CylinD1、nm23、PR、ER单抗对56例乳腺癌和21例乳腺良性病变进行标记，结果：p53阳性表达在有淋巴结转移组高达82．4％，p53,p21^ras,nm23在乳腺癌中的阳性表达分别为78．6％、69．6％及48．．2％，与良性病变组的阳性表达有显著性差异，PR、ER的阳性表达与组织学分级相豢，有显著性差异，结论：p53,ER,PR的过表达状态可作为判断乳腺癌预后和进行内分泌治疗的重要指标。     

p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.     

FGFR-1、cyclinD1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR-1)及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用原位杂交及免疫组织化学S-P法检测乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织中FGFR-1、cyclinD1 mRNA及蛋白水平的表达。结果在乳腺癌中,FGFR-1蛋白和FGFR-1基因的阳性率分别为70.0%(21/30)、70.0%(21/30),cyclinD1蛋白和cyclinD1基因的阳性率分别为66.7%(20/30)、76.7%(23/30),明显高于纤维腺瘤与正常乳腺组织(P0.05),FGFR-1表达与cyclinD1表达一致。结论 FGFR-1的过表达在人类乳腺癌的发生、发展中起重要作用,其机制可能通过上调cyclinD1的表达发挥作用,FGFR-1、cyclinD1的过度表达可作为判断乳腺癌预后的重要指标。     

卵巢浆液性癌中K-ras基因突变和p21、p53蛋白的表达

目的 研究卵巢浆液性癌及交界性病变中的K-ras基因第1外显子第12号密码子的点突变及p21和p53蛋白的表达,探讨其与卵巢浆液性癌癌变的关系.方法 应用显微切割、PCR-RFLP和免疫组织化学技术,对30例卵巢浆液性癌及其交界性病变区的K-ras基因突变及p21和p53蛋白表达进行研究.结果 卵巢浆液性癌K-ras基因突变率为17.8%,交界性病变为12.5%,良性病变未检测出突变.浆液性癌p53蛋白表达率为66.7%,明显高于交界性病变的37.5%.p21蛋白在浆液性癌的表达率为33.3%,明显低于交界性病变的87.5%.结论 K-ras基因突变主要发生于低分级浆液性癌中,是其发生的早期分子事件.p53和p21蛋白在浆癌中表达呈明显的负相关,提示突变型p53基因失去诱导p21的基因表达及其负性调控作用可能是导致细胞持续恶性增殖而癌变的原因.     

乳腺癌术后患者CyclinA1、A2、D1、E1表达及其临床意义

目的:探讨细胞周期蛋白cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1在乳腺癌术后复发患者中的表达及其临床意义?方法:选择81例乳腺癌术后患者,研究组为41例术后5年随访期内出现复发者,对照组为40例5年未复发仍存活者?取患者标本石蜡切片,应用实时定量RT-PCR芯片技术平行检测细胞周期蛋白cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1的表达情况,进行单因素Cox回归分析?结果:cyclinA1?cyclinA2? cyclinD1及cyclinE1中cyclinA2? cyclinD1在乳腺癌术后复发患者中呈现高表达,两组间比较有显著性差异(P < 0.05),其OR值?95%CI分别为3.600(2.337~5.574)?2.604(1.726~3.927),cyclinA2?cyclinD1为乳腺癌术后复发的危险性因素?cyclinA1?cyclinE1表达两组间无显著性差异(P > 0.05)?结论:细胞周期蛋白cyclinA2?cyclinD1在乳腺癌术后复发患者中呈现高表达,可作为判断乳腺癌术后复发及预后的重要参考指标?