TRAIL受体在胆管癌组织中的表达及意义

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的受体在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达及其临床意义。 方法 :应用原位杂交组织化学法检测TRAIL受体mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)中的表达。 结果 :DR4mRNA、DR5mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)均呈阳性表达。只有 3例DcR1(3/5 2 )和 7例DcR2 (7/5 2 )在人胆管癌组织呈弱阳性表达。DcR1、DcR2 mRNA在癌旁胆管组织呈阳性表达 ,而在胆管癌细胞株 (QBC939)均不表达。 结论 :TRAIL死亡受体和诱捕受体在人胆管癌、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达不同 ,这些受体表达的变化可能在调控人胆管癌凋亡中发挥重要作用。     

RRM2在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达和意义

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达、分布以及生物学意义。方法:采用免疫组织化学技术(SP法)检测RRM2基因和蛋白在40例胆管癌标本、40例癌旁胆管组织以及10例正常胆管组织标本中的表达;同时采用RT-PCR法及Western blot法分别检测了RRM2基因mRNA及其蛋白在人胆管癌细胞系QBC939以及人正常胆管上皮细胞系HIBEC中的表达。结果:RRM2基因蛋白在胆管癌组织中表达阳性率为72.5%,而在癌旁胆管组织和正常胆管组织中未能检测到RRM2表达。在人胆管癌细胞系QBC939中,RRM2的mRNA及蛋白均特异性表达,而在正常人胆管上皮细胞系HIBEC中未见RRM2的表达。结论:RRM2在人类胆管癌组织和胆管癌细胞系中选择性高表达,可能与胆管癌的发生、发展密切相关。     

HMGB1通过RAGE促进肝内胆管癌细胞增殖､侵袭的机制研究

目的:检测高迁徙率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)及其受体晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)在肝内胆管癌组织中的表达;探讨HMGB1/RAGE对肝内胆管癌细胞增殖及上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用?方法:免疫组化分析未转移和已转移胆管癌患者标本中HMGB1及RAGE的表达;ELISA法检测胆管癌及胆管结石患者胆汁中HMGB1的含量;CCK8?Transwell检测HMGB1及RAGE抑制剂(FFP-ZM1)对胆管癌细胞增殖?侵袭作用的影响;Western blot检测胆管癌及癌旁组织中p-ERK的表达?结果:HMGB1和RAGE在已转移的胆管癌患者组织标本中高表达,HMGB1可促进胆管癌细胞的EMT过程及胆管癌细胞的生长和侵袭?结论:HMGB1可参与胆管癌细胞的增殖与EMT过程?     

PKM2基因对胆管细胞癌迁移､侵袭及增殖的影响

目的:检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移?侵袭及增殖的影响?方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分别检测胆管癌及对应癌旁组织标本中PKM2的mRNA和蛋白表达水平?利用慢病毒表达载体系统在胆管癌细胞株HuCCT-1?HCCC-9810中下调PKM2,分别用划痕实验?Transwell细胞侵袭实验和CCK-8比色法检测细胞迁移?侵袭及增殖能力?结果:胆管癌组织中PKM2的mRNA和蛋白表达水平明显高于对应癌旁组织?经qRT-PCR和Western blot方法证实稳定转染PKM2 shRNA的胆管癌细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P < 0.05),与空载对照组(PKM2-NC)和正常对照组(PKM2)相比,实验组细胞(PKM2-shRNA)的迁移?侵袭及增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2 shRNA能有效地降低胆管癌细胞中PKM2基因的表达,PKM2基因沉默可以抑制HuCCT-1?HCCC-9810细胞的迁移?侵袭及增殖?     

原癌基因c-erbB-2在胆管癌细胞中的表达

目的：研究c-erbB-2基因在胆管癌细胞中的表达。方法：应用免疫细胞化学SABC法检测两株人胆管癌细胞（QBC一939和SK-ChA-1）、21例原代培养人胆管癌细胞和6例原代培养人正常胆管细胞中c-erbB-2蛋白的表达情况。结果：免疫细胞化学检测结果，c-erbB-2在QBC一939细胞和SK-ChA-1细胞中表达均为阳性；21例原代培养人胆管癌细胞中有18例（86％）表达阳性，3例表达阴性，6例原代培养人正常胆管细胞中e-erbB-2蛋白的表达均为阴性。结论：c-erbB-2蛋白在胆管癌组织中为诱导性表达，其表达上调与胆管癌的形成关系密切。     

FasL在人肝门部胆管癌组织和胆管癌细胞中的表达及其对细胞凋亡的诱导作用

目的：研究FasL在人肝门部胆管癌组织和胆管癌细胞中的表达及其诱导细胞凋亡的能力,从而探索肝门部胆管癌免疫逃逸的机制。方法：运用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）、印迹杂交及免疫组织化学等方法,检测了胆管癌细胞株QBC939细胞和人肝门部胆管癌组织中FasL的表达;并用TUNEL技术和流式细胞仪检测了相关淋巴细胞的凋亡。结果：在所观测的48例手术切除的肝门部胆管癌组织中均发现FasL蛋白的表达,TUNEL 染色发现瘤周肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）有高水平的细胞死亡;在胆管癌的细胞中检测到FasLmRNA及蛋白的表达,并且可使共同培养的Jurkat细胞发生凋亡。结论：胆管癌可通过FasL诱导活化淋巴细胞的凋亡以逃避免疫监视。     

整合素αVβ3在人胆管癌组织中的表达及其临床意义

目的研究整合素αVβ3在人胆管癌组织中的表达及其与胆管癌的临床病理关系.方法采用免疫组织化学方法检测47例人胆管癌组织及正常癌旁胆管组织中整合素αVβ3的表达.结果整合素αVβ3表达于人胆管癌细胞及胆管癌组织中的新生血管细胞,47例标本均呈阳性表达,其表达强度与是否伴有肿瘤转移有显著差异(P<0.05),而与性别、癌组织分化程度无关.结论整合素αVβ3可能在胆管癌细胞的恶性生物学行为中具有重要的作用,检测整合素αVβ3表达可以作为胆管癌预后判断的依据之一.     

表皮生长因子通过核转录因子κB促进胆管癌细胞侵袭的实验研究

目的：探讨表皮生长因子（EGF）诱导胆管癌细胞侵袭的相关机制.方法：检测胆管癌细胞株HuCCT1在EGF不同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况;采用凝胶电泳迁移率试验检测核转录因子κB（NF-κB）在不同EGF浓度下的活性;并用NF-κB的抑制剂（PDTC）和布洛芬预先处理HuCCT1胆管癌细胞后,检测其对HuCCT1胆管癌细胞侵袭力的影响.结果：随着EGF浓度的增加,胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加,具有明显的浓度依赖性.而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响.随着EGF浓度的增加,NF-κB的活化明显增强;PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力.结论：EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力,其增强的侵袭力可能是通过NF-κB信号传导路径,激活基质金属蛋白酶9等蛋白水解酶而实现的.     

骨桥蛋白在胆管癌中的表达及其与抗药性的关系

目的:探讨骨桥蛋白在胆管癌组织中的表达及其与抗药性的关系.方法:回顾性分析本院收治的32例胆管癌患者及10例胆管炎患的临床资料者,采用实时定量PCR技术与免疫组织化学法(SP)测定胆管炎患者正常胆管组织、胆管癌组织及胆管癌癌旁组织中的骨桥蛋白mRNA(OPN-mRNA)的表达水平,比较两种组织中及不同临床病理之间的骨桥蛋白mRNA的表达水平差异;应用靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的技术构建骨桥蛋白低表达细胞模型,并检测5-氟尿嘧啶与顺铂对癌细胞增殖的抑制作用.结果:对正常胆管组织、胆管癌组织、胆管癌癌旁组织中的OPN-mRNA进行测定,3种胆管组织中OPN-mRNA表达比较及两两组间比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);不同肿瘤分期、不同分化程度、是否具有淋巴结转移的胆管癌患者的OPN-mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);肿瘤分期越高、分化程度越低、具有淋巴结转移的患者OPN mRNA表达水平越高.沉默的OPN基因的胆管癌细胞OPN-mRNA表达明显低于未经沉默处理的胆管癌细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05);5氟尿嘧啶、顺铂抑制沉默的OPN基因的胆管癌细胞OPN-mRNA表达明显低于未经沉默处理的胆管癌细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:OPN mRNA在胆管癌组织细胞中的表达明显高于正常组织,且与抗药性有一定的关系.     

DNA甲基转移酶1基因在人肝外胆管癌组织和细胞中的表达及意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)在人肝外胆管癌组织和人胆管癌细胞系QBC939中的表达,并分析DNMT1的表达与胆管癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胆管癌发生发展过程中的作用.方法:用免疫组织化学法检测DNMT1在24例人肝外胆管癌组织和20例慢性胆管炎组织中的阳性细胞表达率,将二者进行对比并分析其与胆管癌...     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

PTEN and PDCD4 are bona fide targets of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma

Objective To investigate the expression profile of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma tissues and to validate its bona fide targets in human cholangiocarcinoma cells. Methods The expression profile of microRNA-21 in human cholangiocarcinoma tissues and cholangiocarcinoma cell line, QBC939, was evaluated by using real-time PCR analysis. The bona fide targets of microRNA-21 were analyzed and confirmed by dual luciferase reporter gene assay and western blot, respectively. The expressional correlation of microRNA-21 and its targets was probed in human cholangiocarcinoma tissues by using real-time PCR, locked nucleic acid in situ hybridization (LNA-ISH), and immunohistochemistry analysis. Results Real-time PCR analysis revealed that microRNA-21 expression depicted a significant up-regulation in human cholangiocarcinoma tissues about 5.6-fold as compared to the matched normal bileduct tissues (P<0.05). The dual luciferase reporter gene assay revealed endogenous microRNA-21 in cholangiocarcinoma cell line, QBC939, inhibited the luciferase reporter activities of wild-type PTEN (P<0.01) and PDCD4 (P<0.05) and had no this effect on mutated PTEN and PDCD4. Moreover, loss of microRNA-21 function led to a significant increase of PTEN and PDCD4 protein levels in QBC939 cells. Elevated microRNA-21 levels were accompanied by marked reductions of PTEN and PDCD4 expression in the same cholangiocarcinoma tissue. Conclusion microRNA-21 expression is up-regulated in human cholangiocarcinoma and PTEN, PDCD4 are direct effectors of microRNA-21.     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

microRNA143?microRNA145对胆管癌细胞株QBC939生长周期及凋亡的影响

目的:探讨microRNA143、microRNA145与肝外胆管癌的关系以及microRNA143、microRNA145对胆管癌细胞株QBC939细胞周期及凋亡的影响。方法:提取11对肝外胆管癌组织标本和正常胆管组织标本的RNA,实时荧光定量PCR(realtimePCR)检测microRNA143、microRNA145的表达;将microRNA143、microRNA145质粒转染人胆管癌细胞株QBC939,分别以流式细胞仪和噻唑蓝(MTT)的方法检测转染前后细胞周期、凋亡及生长情况。结果:相对正常胆管组织,胆管癌组织microR-NA143、microRNA145表达率分别为0.048、0.035(P<0.05)。较对照质粒组,microRNA143组、microRNA145组G1期细胞百分比明显增多[(66.08%±1.93%、65.57%±1.85%)vs(42.87%±1.37%)]、S期细胞百分比明显减少[(19.16%±1.15%、21.40%±1.65%)vs(38.76%±1.83%)]、细胞凋亡率增加[(18.49%±2.26%、16.89%±2.47%)vs(4.68%±1.65%...     

胆管癌中VEGF与MMP-9的表达及相关性研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胆管癌中的表达及其相关性。方法:采用免疫组化SP法检测了50例胆管癌及50例正常胆管组织中VEGF及MMP-9的表达。结果:VEGF和MMP-9在胆管癌中的阳性表达率高于正常胆管组织,差异有统计学意义(P<0.01);且胆管癌中VEGF和MMP-9的表达呈正相关。结论:VEGF和MMP-9可能与胆管癌的发生和发展有关,其表达的检测有助于胆管癌的判断。     

乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9在胆管癌侵袭转移中的联合表达及相关性

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基质金属蛋白酶-9(matrix metal loproteinases-9,MMP-9)在胆管癌侵袭转移中的表达及其相关性.方法:应用免疫组织化学SP法检测60例胆管癌、26例正常胆管组织中HPA和MMP-9的表达情况.结果:HPA和MMP-9在胆管癌组织中的阳性表达明显高于癌旁正常胆管组织(P<0.01);HPA和MMP-9的表达与患者年龄、性别、分化程度均无关(P>0.05);而与胆管癌TNM、浸润深度和淋巴结转移均呈正相关(P<0.05),且胆管癌组织中HPA和MMP-9的表达之间呈正相关(r=0.256,P<0.05).结论:HPA和MMP-9是胆管癌浸润、转移的重要因子, HPA可能通过上调MMP-9的表达来促进胆管癌的浸润、转移.两者表达的检测有助于胆管癌浸润转移的判断.     

胆管癌中血管内皮生长因子与微血管密度检测的临床意义

目的 探讨胆管癌组织中血管内皮生长因子和肿瘤微血管密度的表达及二者之间的关系。方法 应用免疫组织化学方法测定51例胆管癌组织和10例正常胆管组织的血管内皮生长因子和微血管密度的表达水平。结果 血管内皮生长因子在胆管癌组织中的阳性表达率为80.4％,在正常胆管组织中的阳性表达率为20％,两者相比差异有统计学意义(P＜0....