氩激光诱导的大鼠脉络膜新生血管模型研究

目的 探讨应用氩激光诱导棕色挪威(Brown Norway,BN)大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovaseularization,CNV)模型建立的可行性,为明确CNV的发生机制及防治研究奠定基础.方法 雄性BN大鼠20只(40只眼)随机分为4组,每组5只,每只鼠一只眼作为实验眼,另一只眼作为对照眼(空白对照,不进行激光光凝).用氩激光(波长为647 nm)对大鼠实验眼视网膜进行光凝,激光功率、光凝斑直径和曝光时间分别为200 mW、100 μm及0.04 s,每只眼10个光凝斑点.光凝后7,14,21,56 d分别随机抽取1组大鼠,实验眼行荧光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography, FFA)检查后处死动物,摘除眼球制作标本,进行光学显微镜检查(LM)和免疫组织化学染色观察.结果 FFA、LM和免疫组织化学染色观察均证实,光凝后7 d见CNV开始形成,14 d逐渐增多,21 d达到高峰并能保持稳定,56 d CNV有所减少. 结论 氩激光损伤可以创建BN大鼠脉络膜新生血管模型,成模时间短,成模率高,是一种较为理想的CNV动物模型.     

色素上皮衍生因子在大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）中色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）的表达及意义。方法：对3组18只BN大鼠行单眼视网膜氩绿激光光凝，诱导脉络膜新生血管形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球，对光凝区进行病理学检查、Ⅷ因子相关抗原（FⅧR：Ag）的免疫组织化学检查。应用免疫组织化学检测CNV形成过程中PEDF的表达及变化。结果：病理学检查及FⅧR：如免疫组织化学检查显示，光凝后1周开始形成CNV，3周达到高峰。正常BN大鼠PEDF在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达。视网膜光凝后，PEDF阳性染色信号可见于视网膜神经节细胞层、内核层、视网膜色素上皮层、外核层和脉络膜的损伤区；光斑边缘近脉络膜侧PEDF阳性表达信号明显高于光斑内部。光凝后1周至3周，光斑区内FⅧR：Ag阳性染色密度逐渐增加（P〈0．05），PEDF阳性染色密度逐渐下降（P〈0．05），PEDF与FⅧR：Ag阳性染色密度呈负相关（r=-0．832，P〈0．05）。结论：CNV形成与PEDF表达量负相关，提示PEDF表达不足可能是CNV形成和增生的素因之一。     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P<0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P<0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P&lt;0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P&lt;0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

激光诱导鼠脉络膜新生血管的两种检测方法对比研究

目的 比较病理组织切片和眼底荧光血管造影（FFA）在检测半导体激光诱导Brown Norway（BN）大鼠的脉络膜新生血管（CNV）中的应用价值。方法 用半导体激光（波长810nm，曝光时间0．1s，光斑100μm，能量100-140mW）对10只BN大鼠视乳头附近的视网膜进行光凝，每眼10个激光点，光凝后2h，3天，1、2、4周分别行FFA以及病理组织学检查，观察光斑区CNV的产生及变化过程。结果 激光照射后2h及3天无CNV形成，FFA显示无荧光渗漏。激光光凝后1周出现CNV，FFA1周时荧光渗漏34点（34／102，33．3％），2周时荧光渗漏42点（42／68，61．8％），4周时荧光渗漏21点（21／35，60．0％），且CNV出现不一定伴有荧光渗漏，病理切片证实激光光凝后1、2、4周CNV发生率分别为35．7％、72．2％、70．6％。结论 相对而言，病理组织切片对CNV的检出率要比FFA高，但它和FFA一样也存在一些技术缺陷，这两种常用方法有待进一步改进和补充。     

实验性脉络膜新生血管动物模型的研究

目的 评价氪激光诱导棕色挪威(brown Norway,BN)大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性和CNV病变特点.方法 通过氪激光(波长647 nm,光斑直径50 靘,功率360 mW,曝光时间0.05 s)围绕视盘光凝建立大鼠CNV模型.分别于光凝后第3、7、14、21、30 d进行荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography,FFA).造影后6 h待其体内荧光素染料大部分被排出后,处死动物,摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片.选取有明确血管化的激光斑连续切片中"最大CNV膜"切片,常规HE染色,并计算CNV膜相对厚度.随机选取光凝后21 d大鼠作电镜检查.结果 光凝后7d出现CNV,21 d达高峰,大鼠CNV发生率达77.78%.FFA表现为造影早期强荧光斑,晚期出现与视网膜血管无关的荧光素渗漏.光镜和电镜下可见到CNV自脉络膜穿过破裂的Bruch膜突向视网膜下,以及巨噬细胞浸润、视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞迁移增生等.CNV相对厚度在光凝后7～21 d逐渐增加(P<0.01),21 d达高峰,之后变化不显著(P>0.05).结论 氪激光诱导BN大鼠CNV模型具有稳定、可靠、价廉、成模时间短,成模率较高等特点.激光诱导的CNV中有巨噬细胞浸润,存在炎症反应.     

RT-PCR测定大鼠脉络膜新生血管色素上皮衍生因子研究

目的建立氪激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型,建立RT-PCR方法检测大鼠视网膜及相关组织色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA性。研究PEDF mRNA与CNV生长的关系,从而探讨在CNV生长中的作用。方法对6组24只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)实验眼视网膜进行光凝,功率360mW、光斑直径50μm、曝光时间0.05s,围绕视盘等距光凝8个点,创建CNV模型。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PEDF mRNA在大鼠视网膜中的表达水平的变化。结果FFA光凝斑盘状荧光素渗漏,证实CNV形成。视网膜中PEDF mRNA表达水平呈先升高后降低的变化。结论氪激光诱导BN大鼠产生CNV模型,病理结构稳定,RT-PCR方法适合做大鼠动物模型PEDF mRNA的半定量检测,PEDF的变化与新生血管的发送更有关。     

BN大鼠脉络膜新生血管动物模型的制作

目的:脉络膜新生血管(CNV)是许多眼病致盲原因,目前无理想治疗方法,深入研究其发病机理及探索其治疗新方法成为必要.制作CNV动物模型是该研究的基础.方法:本研究拟用氩激光诱导BN大鼠CNV动物模型,并用组织病理切片及眼底荧光血管造影进行观察.结果:光凝后7d新生血管形成,21d达高峰,光凝区出现圆盘状的荧光素渗漏.结论:氩激光光凝可以成功制作BN大鼠CNV动物模型,为CNV防治的研究奠定了基础.     

半导体激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型的建立

目的 探讨应用半导体激光诱导建立BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)模型的可行性。方法 雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠30只，9只为对照组，21只为实验组；用半导体激光光凝实验组BN大鼠的视网膜，分别于光凝后1h，3、7及14d行眼底荧光造影(fiundus fluorescein angiography，FFA)检查，3、7和14d行病理组织学检查。结果 光凝后7dFFA及光镜检查均证实CNV开始形成。14dCNV大量形成。结论 半导体激光损伤可以成功地诱导BN大鼠形成CNV模型，成模时间短，成模率高，是一种较为理想的CNV动物模型。     

半导体激光诱导大鼠脉络膜新生血管形成

目的探讨应用810 nm半导体激光诱导棕色挪威(BN)大鼠脉络膜新生血管(CNV)模型建立的可行性。方法雄性BN大鼠35只,随机等分为7组,每组各取1只作为对照,其余4只采用810 nm半导体激光光凝大鼠双眼视网膜,于光凝后1、3、7、14、21、28、56 d观察眼底情况,并行眼底荧光血管造影(FFA)和吲哚菁绿血管造影(ICGA),于检查后立即处死,摘取眼球行光学显微镜(LM)检查。结果FFA、ICGA和LM检查均证实,光凝后7 d见CNV开始形成,14 d逐渐增多,21 d达到高峰并能保持稳定,56 d CNV有所减少。结论810 nm半导体激光能成功诱导BN大鼠CNV模型建立,成模所需时间短,成模率高,持续时间较长,操作方便,是一种比较理想的CNV动物模型。     

Blockade of the sonic hedgehog signalling pathway inhibits choroidal neovascularization in a laser-induced rat model

Sonic hedgehog (Shh) signaling has recently been shown to be involved in the pathological angiogenesis in response to tissue hypoxia and ischemic injury.Hypoxia/ischemia is considered to play an important role in the development of choroidal neovascularization (CNV).This study was aimed to examine the effect of blockade of the Shh signaling pathway on CNV and the underlying mechanism.A total of 64 male Brown-Norway (BN) rats were used in this study.One eye of each rat underwent laser photocoagulation.The other eye served as normal control.After the laser treatment, the 64 rats were divided into four groups (n=16 in each group):Blank control group, in which no intravitreal administration was given; cyclopamine group, recombinant Shh N-terminals protein (rShh) group and phosphate-buffered saline (PBS) group, in which cyclopamine (a Shh inhibitor), rShh (a Shh activator) and PBS were intravitreally injected into the laser-treated eyes respectively every other day for a total of four intravitreal injections immediately after the laser treatment.Fourteen days after the intravitreal administration, the changes of CNV-related variables, including positive CNV lesion percentage, CNV membrane area and CNV membrane thickness, were evaluated by fluorescein anqiography, indocyanine green angiography and pathological examinations.The mRNA and protein expression of PTCH1, Gli1, HIF-1α, VEGF and DLL4 in each group on 14 days of CNV model was detected by real-time quantitative PCR and western blot analysis, and the relationship between the Shh cascade and the HIF-1α-VEGF-DLL4 cascade in CNV was analyzed.The results showed that the CNV membrane area and the CNV membrane thickness were decreased by 62.5% and 41.9% in the cyclopamine group and increased by 85.7% and 64.3% in the rShh group in comparison to those in the blank control group (P<0.01 for each).There was no significant difference in the CNV membrane area and thickness between the blank control group and PBS group (P=0.102 and P=0.063, respectively).Real-time quant     

半导体激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型的实验研究

目的：评价532nm半导体激光诱导棕色挪威(brown norway，BN)大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovasularization，CNV）模型的可行性。方法：使用半导体激光（功率150mW，光斑直径75μm，曝光时间0.1s）对10只BN大鼠建立CNV模型。分别于光凝后7、14、21和28?d随机选取5只行眼底荧光素血管造影术（fundus fluorescein angiogrphy,FFA）和光学相干断层成像术（optical coherence tomography,OCT）检查,比较FFA早期（<2min）和晚期（>10min）荧光渗漏斑数/平均渗漏面积（mm²）的变化，并行统计学分析。结果：光凝后FFA检查经组间两两比较，14、21和28d的早期荧光渗漏斑数/渗漏面积差异无统计学意义(P>0.05)，14、21和28d与7d相比差异有统计学意义(P<0.05)；7、14、21和28d早期和晚期荧光渗漏斑数差异无统计学意义(P>0.05)。激光斑视网膜的平均厚度与平均荧光渗漏面积有相关性（r=0.73，P<0.05）。结论：半导体激光诱导BN大鼠的CNV模型是可行的。FFA联合OCT可有效检测CNV的形成和变化。     

氩激光诱导色素兔脉络膜新生血管的实验研究

目的:研究氩激光诱导色素兔脉络膜新生血管(CNV)的实验条件。方法:分别对3组动物实验眼用不同功率(0.4,0.8,1W)的氩激光光凝视网膜,光凝后3,7,14,28,56及91d行光学相干断层扫描(opticalcoherencetomography,OCT)、荧光素眼底血管造影(fundusfluoresceinangiography,FFA)和吲哚菁绿血管造影(indocyaninegreenangiography,ICGA)后处死动物,取光凝区眼球壁制作标本,进行光镜和透射电镜观察。结果:第1组未见CNV生长,第2,3组光凝后7d出现CNV,28d达高峰,56d后开始减少。结论:高功率(0.8～1W)的氩激光能有效诱导色素兔CNV,是较好的动物模型。     

健脾化浊法中药对实验性大鼠脉络膜新生血管影响的观察

目的:以激光诱导棕色挪威(BN)大鼠脉络膜新生血管(CNV)为模型,观察健脾化浊法中药对CNV的组织病理学影响,探讨健脾化浊法中药对CNV的作用。方法:成年BN大鼠分为健脾组、三七组和空白组,光凝后3 d开始给药,30 d后处死动物,光镜下观察大鼠CNV组织病理学改变。结果:在CNV发生面积和最大中央厚度方面,健脾组均优于三七组和空白组。健脾组较之空白组在减少CNV面积上差异有非常显著的统计学意义(P<0.01);CNV厚度和面积三七组较之空白组差异均有统计学意义(P<0.05),健脾组较之三七组差异均有非常显著的统计学意义(P<0.01)。在光镜下,健脾组纤维血管组织增生比三七组和空白组明显减少,神经纤维层无显著改变。结论:健脾化浊法中药对CNV有一定的抑制作用。     

氩激光诱导小鼠脉络膜新生血管形成

目的探讨应用氩激光诱导C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性。方法雄性C57BL/6J小鼠28只,用数字表法随机等分为7组,每组4只。用氩激光光凝小鼠双眼视网膜,于光凝后2h、3d、7d、10d、14d、28d和60d观察眼底情况,并行眼底荧光血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA),于检查后立即处死,摘取眼球行光学显微镜(lightmicroscopy,LM)检查。结果FFA和LM检查均证实,光凝后7d CNV开始形成,10d渐增多,28d到高峰并能保持稳定,60d有所减少。结论氩激光能成功诱导C57BL/6J小鼠CNV模型,成模所需时间短,成模率高,持续时间较长,操作方便,是一种比较理想的CNV动物模型复制方法。     

姜黄素抑制视网膜新生血管的实验研究

目的:观察姜黄素对视网膜新生血管的抑制作用.方法:高氧诱导幼鼠建立视网膜新生血管模型.治疗组玻璃体腔注射姜黄素;对照组注射等量生理盐水.组织切片计数突破视网膜内界膜血管内皮细胞核;免疫组化检测视网膜VEGF的表达.结果:治疗组视网膜新生血管数减少,视网膜VEGF表达较对照组明显减少,两者差异显著.结论:姜黄素可以有效抑制视网膜新生血管(CNV)形成.     

实验性兔脉络膜新生血管模型研究

目的:探讨氩激光创建有色家兔脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性,初步探讨CNV的有关发生机制,为其进一步防治研究奠定基础.方法:健康有色家免20只(40只限),每只兔一眼为实验眼,另眼为对照眼.以波长514.5 nm的氩绿激光(光斑直径50um,功率0.7W,时间0.1s),在距视盘2～3个视盘直径的颢侧髓线上下视网膜处密集照射20个点.分别于光凝后3,7,14,21,30天进行眼底荧光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)及脉络膜造影(indocyanine green angiography,ICGA).检查后处死动物(4只/次),摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片.常规HE染色及用免疫组化(S-P法)检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜的表达.结果:光凝后7天出现CNV,兔CNV发生率尚(63.8%),眼底造影和光镜下均有相应改变,FFA表现为视网膜血管无关的荧光素渗漏,ICGA见CNV充盈;光镜下可见到CNV结构;光凝后2周开始VEGF在视网膜神经节细胞以及内核层有表达.结论:氩激光诱导有色家免CNV模型成模时间短,成模率较高;VEGF参与了CNV的形成进程.