不同来源小鼠2-细胞胚胎体外发育情况的比较

目的比较小鼠配子体外授精法与2-细胞胚胎收集法所得鼠胚体外发育情况,探讨适合人类体外受精实验室的质量控制系统。方法采用雌雄小鼠配子体外授精和体内受精收集2-细胞胚胎,同时对2-细胞胚胎在相同条件下进行体外培养,观察胚胎发育情况。结果小鼠配子体外授精法的受精率为82.2%;对两种方法所获2-细胞胚胎进行培养,48 h卵裂率及72 h囊胚形成率均无显著差异。结论体内受精2-细胞胚胎收集法较小鼠配子体外授精法操作简便,是较理想的人类胚胎实验室质控方法。     

1例复杂染色体易位伴男性不育患者的家系核型分析及文献复习

染色体复杂易位是累及3条以上染色体,有3个以上断裂点的染色体结构异常,这种异常非常罕见。染色体畸变携带者一般个体表型正常,但是在减数分裂时发生平衡易位的染色体及其同源染色体发生联会交换,生成配子时发生遗传物质变化,这类配子受精后形成的胚胎遗传物质严重不平衡,往往表现出不育、不孕、流产、死胎或者胎儿畸形等不良后果的发生,本文就1例复杂染色体易位伴男性不育患者进行病例分析。     

PMSG或FSH同期发情处理对小鼠卵巢、输卵管和子宫中孕激素受体分布的影响

目的探讨孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)和促卵泡激素(folliclestimulating hormone,FSH)同期发情处理的小鼠卵巢、输卵管和子宫中孕激素受体(progesterone receptor,PR)分布的差异。方法 10只8周龄KM系雌鼠,随机分为PMSG和FSH两个组,第一次处理后48 h取其卵巢、输卵管、子宫进行固定,免疫组织化学法观察各组织中PR的分布。结果两组小鼠卵巢、输卵管和子宫内膜中均有PR表达;其中PMSG组初级卵泡、次级卵泡和输卵管的阳性率均显著高于FSH处理组(P<0.05);PMSG组各级卵泡的平均吸光度值均显著高于FSH处理组(P<0.05);PMSG处理组子宫内膜上皮与腺上皮中的阳性率显著高于FSH组(P<0.05),而基质和子宫内膜上皮中的平均吸光度值显著低于FSH组(P<0.05)。结论 PMSG和FSH同期发情处理不同程度影响小鼠卵巢、输卵管和子宫中PR的表达分布;其中PMSG处理组小鼠卵巢、输卵管和子宫上皮中PR表达普遍显著高于FSH处理组。     

利用超数排卵方法高效获取小鼠休眠胚胎

目的为提高小鼠休眠胚胎的制备效率,尝试用超数排卵方法获取小鼠休眠胚胎。方法超排小鼠在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后,按照是否注射抗孕马血清(anti-PMSG serum或A-PMSG)以及注射的不同时间分为5组:在母鼠合笼前注射A-PMSG、在母鼠见栓后注射A-PMSG、在见栓第四天卵巢摘除手术后注射A-PMSG、不注射A-PMSG的超排组和不超排组。结果见栓后注射抗PMSG组的平均出胚数(9.4枚/只)最高,显著高于其他实验组。结论常规超排处理结合注射抗PMSG血清法能有效提高小鼠休眠胚胎的回收率。     

人类染色体非整倍体形成机理的研究进展

非整倍体是指染色体数目只有一条或少数几条增减的异常核型 ,主要是由于在生殖细胞发生过程中 ,减数分裂染色体不分离 ,异常配子受精后形成。另外 ,受精卵在有丝分裂过程中染色体不分离亦可形成非整倍体 ,它是导致智力低下、性别异常、自发流产、多发畸形和染色体病的主要原因[1] 。人类非整倍体畸变机理一直是医学遗传学领域的重要研究课题 ,研究者从细胞遗传学、分子遗传学及生殖生物学等多方面进行了大量的深入研究。本文旨在对该领域的研究进展作一综述。1　非整倍体与减数分裂不分离非整倍体一般是由于生殖细胞发生过程中 ,减数分裂染…     

小鼠窦前卵泡培养成熟后卵母细胞纺锤体的变化

目的小鼠窦前卵泡体外培养得到成熟卵母细胞,观察卵母细胞的染色体和纺锤体形态,分析其变化及原因。方法完整小鼠窦前卵泡培养12 d,得到的卵母细胞进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察纺锤体和染色体的形态和分布。结果经过体外培养,得到GV、M I、MⅡ期卵母细胞分别占总数27.9%、37.2%、34.9%;GV期卵母细胞存在完整的染色质圆环,11.8%的M I期卵母细胞显示正常纺锤体和染色体;38.5%的MⅡ期卵母细胞显示正常的纺锤体和染色体。结论小鼠窦前卵泡经体外培养后能够得到成熟的MⅡ期卵母细胞,但是其效率较低。原因可能是卵母细胞骨架结构的异常使染色体分离障碍,部分卵母细胞停留于M I期;同时成熟卵母细胞的受精率低也与纺锤体异常有关。     

冻存精子与卵子受精后行囊胚移植分娩一健康婴儿

目的:报道1例经囊胚移植后娩出健康婴儿的病例,该囊胚由冻存精子使冻存的卵泡受精后发育形成。设计:病例报道。机构:大学的辅助生殖中心。患者:1例37岁有4年继发性不孕的妇女。干预:卵细胞冻存在1.5M丙二醇(PR OH)和0.3M蔗糖溶液中,经慢冻-速融方案进行处理,冻存精子。在卵细胞复苏后4h行卵母细胞单精子显微注射(ICSI)完成受精过程。主要观察指标:受精和胚胎发育至囊胚期,妊娠过程及最终结局。结果:14个卵细胞在冻融后对其中10个进行考察,其中8个由ICSI法进行受精,而其中仅有3个在受精后第3天时发育成由7～8个细胞构成的胚胎。在受精…     

促性腺激素及雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨取卵前给予孕马血清(PMSG)或人绒毛膜促性腺激素(HCG)以及在培养液中添加不同浓度雌二醇对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)及胚胎发育的影响。方法:将雌性小鼠随机分成5组,即24 h PMSG组(取卵前24 h给小鼠腹腔注射PMSG)、48 h PMSG组(取卵前48 h给小鼠腹腔注射PMSG)1、6 h HCG组(取卵前16 h给小鼠腹腔注射HCG)、PMSG+HCG组(给小鼠腹腔注射PMSG 48 h后腹腔注射HCG 16 h取卵)和未用药组。取未成熟卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置入含不同浓度E2(0,0.5,1.0,2.0 mg/L)培养液中培养24 h,并行卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)及胚胎培养。比较各组之间卵母细胞成熟率、受精率和卵裂率。结果:①24 h PMSG组和48 h PMSG组COCs的卵母细胞成熟率明显高于未用药组或16 hHCG组,差异有统计学意义(P<0.05)。PMSG+HCG组的受精率和卵裂率明显高于其他4组(P<0.01)。②与对照组比较,1.0 mg/L E2组和1.5 mg/L E2组中COCs的卵母细胞受精率和卵裂率明显增高(P<0.05)。各浓度17β-E2组间以及与对照组比较DO的成熟率和受精率无显著差异(P>0.05),但极少数受精卵发生卵裂。结论:①取卵前给予小鼠PMSG或者联合给与HCG均可促进卵母细胞体外成熟,但不能提高其早期胚胎发育能力;取卵前给予小鼠HCG不能提高卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育能力。②在培养液中添加一定浓度E2可促进未成熟卵母细胞胞质成熟,但不能促进核成熟。     

46，XX，—13，＋der（13），t（4；13）（q25；q32）1例

染色体病是一种严重遗传病 ,是父母双亲生殖细胞或受精卵染色体数目和结构异常或父母双亲之一为平衡易位携带者将异常染色体传递给子女而发病的。平衡易位携带者亲体在形成配子时 ,有 16 / 18可能形成单体型或三体型生殖细胞 ,不能成活或受精后产生死胎、流产、畸形儿。我室发现 1例平衡易位携带者母亲生出 1个 4号染色体部分三体型和3号染色体部分单体型患儿 ,已成活 9年 ,现报道如下。1　资料与方法患儿女 ,汉族 ,11岁 ,因智力低下伴先天畸形就诊 ,患儿为第一胎足月顺产。体检 :右眼斜视 ,上眼睑下垂 ,特殊面容。双手多指 ,赘生指均为拇指…     

46，XX，-13，+der(13)，t(4

染色体病是一种严重遗传病，是父母双亲生殖细胞或受精卵染色体数目和结构异常或父母双亲之一为平衡易位携带者将异常染色体传递给子女而发病的。平衡易位携带者亲体在形成配子时，有16／18可能形成单体型或三体型生殖细胞，不能成活或受精后产生死胎、流产、畸形儿．我室发现1例平衡易位携带者母亲生出1个4号染色体部分三体型和3号染色体部分单体型患儿，已成活9年，现报道如下。……     

不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。     

宫腔配子移植致宫外孕1例原因分析

宫腔配子移植（ＧＩＵＴ）是不同于体外受精胚胎移植（ＩＶＦⅡＥＴ）的一种助孕技术，１９９２年由陈子江等［１］首次报道。它是将成熟的卵子和体外获能处理后的精子同时移植入宫腔，使精子和卵子在宫腔内受精、卵裂，进一步胚胎形成和植入，并最终完成整个妊娠期胎儿发育和足月分娩。这一技术简化了助孕技术操作，缩短了人配子在体外的存留时间，省略了复杂的胚胎体外培养过程，是一种经济简便的助孕技术。最近作者发现，宫腔配子移植术后有宫外孕发生的病例。对其发生的可能原因进行分析１　病历摘要　　患者３４岁，１０ａ前孕４０…     

Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞纺锤体组装和稳定

目的:确定Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠卵细胞纺锤体组装和稳定的影响。方法:免疫荧光法检测Syt1在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位。用紫杉醇处理小鼠MⅠ期卵母细胞,明确Syt1与微管动力的关系。注射Syt1特定的寡聚核苷酸降调卵母细胞中Syt1的表达,免疫荧光法检测Syt1降调后卵母细胞纺锤体的形态变化、染色体异常以及中心体蛋白γ-tubulin定位变化。结果:Syt1在卵母细胞减数分裂成熟的不同发育阶段都有表达,主要集中分布皮质区和MⅠ和MⅡ期纺锤体的两极。Syt1在MⅠ和MⅡ期与中心体相关蛋白γ-tubulin共定位。紫杉醇实验发现Syt1集中定位于星体和高度集中的微管两极。降调Syt1表达后,染色体排列紊乱,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为无极、单极或者多级纺锤体,其次有拉长纺锤体和形态各异纺锤体。并影响微管组织中心相关蛋白γ-tubulin的正确定位。结论:Syt1可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装稳定。     

盆腔炎与生育

生育是复杂而有序的生物过程.正常的生育过程至少应具备下列三个条件:首先是两性配子的形成;其次是两性配子的相遇、受精;最后是胚胎在宫腔的植入和妊娠的维持.任何因素间接或直接地影响上述各环节,均可导致不育.     

阿霉素对小鼠骨髓微核和染色体的影响

目的探讨阿霉素对小鼠骨髓微核和染色体的影响。方法将60只小鼠随机分为3组,每组20只,A组腹腔注射阿霉素溶液3mg·kg-1,B组腹腔注射阿霉素溶液5mg·kg-1,C组为对照组,腹腔注射生理盐水,均连续注射5d。染毒5d后,取小鼠骨髓进行微核实验和染色体制片,统计小鼠骨髓微核发生率和染色体畸变率。结果经阿霉素处理后的小鼠骨髓细胞,在主核附近出现1个或几个小的亮点,即为微核;骨髓细胞的染色体畸变主要表现为染色体的断裂和部分缺失。A组和B组的骨髓微核发生率和染色体畸变率与C组相比显著升高(P<0.05,P<0.01),且B组小鼠骨髓细胞微核发生率和染色体畸变率高于A组(P<0.05),呈一定的剂量依赖关系。结论阿霉素可致小鼠微核发生率增高、染色体损伤,对小鼠有遗传毒性作用。     

染色体在妇产科上的应用

染色体、染色质的基本概念遗传的传递是通过生殖细胞核几的染色体进行的。染色体的基本物质是脱氧核粮核酸(DNA)。染色体的数目在人类生殖细胞受精前的单倍体是23条,以n代表之;这23条染色体中,除一条性染色体外,余22条称常染色体。卵子中的性染色体只有X一种,精子中的性染色体可以是X也可以是Y。受精后染色体成为双倍体,为46条,23对,以2n代表之。卵子如与含X的精子结合,则此受精卵的性染色体为XX,为女性;如卵子与含Y的精子结合成为XY,则为男性。所以生男生女的决定因素是精子而非卵子。正常女性细胞核内含有2条X,其中一条是活     

鼠胚胎培养在辅助生殖实验室质量控制中的应用研究

目的探究鼠胚培养在辅助生殖实验室培养质量控制中的作用。方法利用昆明白鼠进行体内外受精实验,体外受精实验组在小白鼠促排卵后,手术获得配子后进行培养;体内受精实验组在促排卵后合拢交配,手术获取原核胚进行培养。观察并记录两组小鼠胚胎发育情况。结果体内外受精组的受精率分别为(77.64±5.38)%、(79.01±1.24)%,卵裂率分别为(95.48±1.06)%、(92.04±1.01)%,囊胚形成率分别为(81.42±1.13)%、(78.15±0.98)%,两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论利用鼠胚实验可建立一套健全、完整的质量控制体系以确保培养环境及系统的可靠性,能为临床诊治提供依据。     

一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系

目的 利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系.方法 以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL/6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验,术后恢复的公鼠继续用于自然繁育.如果无法自然繁育,则将冻融精子用于体外受精(IVF).如果冻融精子仍无法受精获得后代,则需要借助卵胞质内单精子注射技术(ICSI)进行胚胎构建,胚胎移植,直至获得后代.结果 单侧睾摘除的BDF1、C57BL/6J的公鼠可以继续繁育;不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子IVF后,只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和子鼠;而以C57BL/6J 为遗传背景的GFP小鼠,其冻融精子只有采用ICSI技术,才可以得到子代.结论 精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素,同时还建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系,既可以达到品系保存的目的,同时又可以最大限度地利用小鼠品系.     

激素剂量及周龄对小鼠超数排卵的影响

目的：探讨不同剂量激素和不同周龄小鼠对超数排卵数量和囊胚率的影响,以期确定最适剂量和最佳周龄小鼠,获得更好的超数排卵效果。方法采用不同剂量孕马血清促性腺激素（ PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（ hCG）对不同周龄小鼠进行超数排卵,统计胚胎个数及囊胚率。结果激素剂量为PMSG与hCG各7．5 IU组的超数排卵显著多于5．0 IU组（P＜0．05）,但与10．0 IU 组差异无统计学意义,激素剂量为5．0 IU组囊胚率优于7．5 IU组和10．0 IU组,差异无统计学意义;不同周龄小鼠间超数排卵效果和囊胚率有一定差异,8周龄小鼠的超数排卵数量和囊胚率均高于其他各组。结论采用PMSG与hCG各7．5 IU对8周龄小鼠进行超数排卵处理效果最佳。     

转基因的方法

显微注射法和胚胎干细胞转染法是制作转基因动物的两种主要方法。这两种方法的目的是制作一种人工改变基因型的动物。两种方法之间的差异和其技术限度决定了各自的实验用途。因此,阐述这两种方法并正确评估两者的应用是很有价值的。显微注射原核制作转基因小鼠如同Gorden等(1980)报道过的,标准方法是显微注射小鼠胚胎。取交配后第2天的小鼠胚胎,将胚胎清洁后放置于操作显微镜。在此阶段两个配子融合,但细胞核(称为原核)仍