三个封闭群小鼠线粒体DNAPCR-RFLP分析

目的：分析ＫＭ等３个封闭群小鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的多态性,探讨实验小鼠的遗传监测方法。方法：ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术,即ＰＣＲ技术结合限制性内切酶片段长度多态分析（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＲＦＬＰ）。结果：ｍｔＤＮＡ Ｄ－Ｌｏｏｐ、ｔＤＮＡ１基因、ＤＮ３基因片段经ＨａｅⅢ、ＨｉｎｆⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＨｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、Ａｐａ     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９     

应用α—珠蛋白3′—HVR探针进行小鼠的DNA指纹分析

目的：探讨３′－ＨＶＲ探针及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术应用于实验小鼠遗传质量监测的可行性。方法：采用人源α－珠蛋白３′－ＨＶＲ探针,应用ＥＣＬ试剂盒,以ＨＲＰ标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以化学发光法进行检测,对５种近交系小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ、ＤＢＡ／２、Ｔ７３９、ＴＡ１、６１５）、１种封闭群小鼠（ＫＭ）及２种免疫缺陷小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ及Ｃ．Ｂ－１７ＳＣＩＤ）进行ＤＮＡ指纹分析。结果：其不     

人乳头瘤病毒HPV16L1—E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法,从ＨＰＶ１６型野毒株质业中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９－７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２－８５５ｂｐ）基因片段,采用ＰＣＲ产物的Ｔ－Ａ克隆法,将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ载体,构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨ１、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ,Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ＰＴＡＬ１,回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段,利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产竽相同粘末端的特点,     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法,从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段,采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法,将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体,构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ,Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ｐＴＡＬ１,回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段,利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产生相同粘末端的特点,产生Ｌ１Ｅ７Ｃ重组基因片段,将其克隆入质粒ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔｓｋ,构建了ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ重组克隆质粒,ＨｉｎｄⅢ、ＸｈｏⅠ酶切ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ,释放Ｌ１Ｅ７Ｃ基因片段,定向重组入ｐＣＡ１４腺病毒载体,成功构建真核表达载体ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组腺病毒载体：ｐＣＡ１４Ｌ１Ｅ７Ｃ,为研制ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组Ａｄ５载体疫苗和ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ嵌合蛋白疫苗打下基础     

CXA-1重组近交系小鼠脾T、B细胞对丝裂原应答能力的观察

目的 以Ｔ、Ｂ细胞的增殖效应为评介指标，观察ＣＸＡ－１重组近交系小鼠免疫细胞对丝裂原的应答能力。方法 ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法。结果♀ＣＸＡ－１小鼠的免疫细胞活性及其对Ｔ、Ｂ细胞丝裂原的应答效应均显著强于ＢＡＬＢ／Ｃ和Ａ／Ｊ小鼠。     

载脂蛋白B基因多态性与缺血性脑血管病的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），检测了１０６例正常汉族人及３３例缺血性脑血管病（ＩＣＶＤ）病人的ａｐｏＢ基因ｘｂａⅠ酶切位点限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）及其与血脂的关系。结果表明，ＩＣＶＤｔａｘｂａⅠ酶切位，走上ｘ＋的等位基因频率明显高于正常对照组（Ｐ＜０．００５）；ＬＶＤ组中具Ｘ＋Ｘ－基因型者的血浆ＨＤＬ－Ｃ较Ｘ－Ｘ－基因型者明显降低（Ｐ＜０．０５），而ＴＣ明显增高（Ｐ＜０．０５）。提示ａｐｏＢ基因多态分析结合血浆脂蛋白测定更能有效地检测ＩＣＶＤ易患人群。     

3-甲基胆蒽和X线幅射诱发小鼠T细胞淋巴瘤的实验研究

皮肤涂刷３－甲基胆蒽（３－ＭｅｔｈｙｌｃｈｏｌａｎｔｈｒｅｎｅＭＣＡ）和分级辐射（Ｘ－Ｉｒｒａ－ｄｉａｔｉｏｎ，Ｘ－Ｒ）不同品系小鼠，研究近交系（ＲＦ／Ｊ．ＤＢＡ／１Ｊ等）及其杂交Ｆ１代对两种致癌方式的抗性。结果表明，ＲＦ／Ｊ小鼠经ＭＣＡ涂刷和Ｘ－Ｒ辐射后，淋巴瘤诱发率最高，接近１００％；ＤＥＡ／１Ｊ和ＤＢＡ／２Ｊ小鼠淋巴瘤诱发率次于ＲＦ／Ｊ，诱发率达７０～８０％；ＤＢＡ／１Ｊ，ＤＢＡ／２Ｊ分别与ＲＦ／Ｊ杂交Ｆ１代，诱发率在ＲＦ／Ｊ与ＤＢＡ／１Ｊ，ＤＢＡ／２Ｊ之间；ＳＷＲ／Ｊ×ＲＦ／ＪＦ１代，ＳＷＲ小鼠，诱发率仅为２０～３０％。实验结果显示，多数能抵抗ＭＣＡ的小鼠，亦能抵抗Ｘ－Ｒ诱发淋巴瘤。     

正常人和内源性高甘油三酯血症患者血浆、HDL、LDL及VLDL中脂质与载脂蛋白的相关分析

用直线相关及多元逐步回归的方法对２０例正常人及２０例内源性高甘油三酯血症患者血浆、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及ＨＤＬ的脂质与载脂蛋白的关系进行了分析。单因素分析结果表明：ＴＧ及ｖＬＤＬ、ＴＧ分别与血浆ａｐｏＣⅡ、ＣⅢ、Ｅ，ＬＤＬａｐｏＢ１００，ＶＬＤＬ中ａｐｏＣⅡ、ＣⅢ、Ｅ．Ｂ１００呈正相关，与ＨＤＬ３ｐｏＡⅠ呈负相关；ＨＤＬ－Ｃ与血浆ａｐｏＡⅠ、ＨＤＬ中ａｐｏＡⅠ、ＣⅢ呈正相关，与血浆ａｐｏＣⅢ、Ｅ．ＬＤＬａｐｏＢ１００及ＶＬＤＬ中ａｐｏＢ１００、ＣⅡ、ＣⅢ、Ｅ呈负相关；ＴＣ与ａｐｏＢ１００、ＬＤＬａｐｏＢ１００呈正相关。多因素分析结果表明：有７种因素对ＴＧ有显著性影响，其中ＶＬＤＬａｐｏＣⅢ，血浆ａｐｏＣⅢ、Ｅ及ａｐｏＢ１００／ＡⅠ与ＴＧ呈正相关，ＨＤＬ中ａｐｏＣⅡ．Ｅ及ＣⅡ／ＣⅢ与ＴＧ呈负相关；只有血浆ａｐｏＣⅢ、ＶＬＤＬａｐｏＣⅢ、ＬＤＬａｐｏＢ１００三种因素对ＶＬＤＬＴＧ有显著性影响；对ＨＤＬ－Ｃ有显著性影响的因素是：ａｐｏＡⅠ、ＨＤＬａｐｏＡⅠ及ＨＤＬａｎｏＣⅡ呈正相关，ＶＬＤＬａｐｏＥ及ＨＤＬａｐｏＡⅡ呈负相关；ａｐｏＢ１００及ａｐｏＣⅡ与ＴＣ呈正相关。文内还对所得结果进行了讨论。     

Study on mitochondrial DNA diversity among 7 inbred strains of mice

Objective：To study the genetic variation of mitochondrial DNA （mtDNA） among common laboratory strains of inbred mice. Methods： The genetic polymorphism of mtDNA among 4 classical laboratory strains of inbred mice and 3 inbred strains of mice established in China was analyzed by polymerase chain reaction coupled with restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） and PCR coupled with single-stranded conformation polymorphism（PCR-SSCP）. Results： With regard to the D-loop （Displacement loop, D-loop）, tRNA^ Met＋Glu＋Ile, and ND3 （NADH dehydrogenase subunit 3, ND3） gene fragments of mtDNA from these mice,no variation was revealed by PCR-RFLP at 46 restriction enzyme sites. Further analyzed by PCR-SSCP,the D-loop 5＇fragment and 3＇end fragment of mtDNA from these mice also showed no genetic variation. Conclusion： Owing to maternal mode of inheritance of mtDNA,the results indicate that these common inbred strains of mice share the same maternal lineage.     

Mutations of mitochondrion DNA in mouse tumors

Objective： To ascertain the variations of mitochondrion DNA （mtDNA） in mouse tumors and to inquire into the relationship between mutations of mtDNA and carcinogenesis Methods： The variations of D-loop, ND3 and tRNA^Met＋Glu＋Ile gene fragments of mtDNA from six tumor cell lines of mice were analyzed by PCR technology with restriction fragment length polymorphism analysis （polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP） and single strand conformation polymorphism analysis （SSCP-PCR） method. Results： ND3 and tRNA^Met＋Glu＋Ile gene fragments ofmtDNA from the tumors showed no variation in 27 endonuclease sites; D-loop ofmtDNA from Hca-F had an additional endonuclease sites of Hinf I in contrast to that of the inbred mouse. Deeply analyzed by PCR-SSCP, the D-loop ofmtDNA was found to possess mutations in 4 of 6 tumors. Conclusion： D-loop is the hot spot of tumor mtDNA mutation which can act as contributors to the carcinogenic     

几种肿瘤细胞株线粒体DNA多态性

目的了解和分析线粒体DNA突变与肿瘤发生发展的关系.方法应用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对Lewis肺癌等肿瘤细胞株mtDNA的D-loop,ND3 and tRNAMet Glu Ile基因片段进行了分析.结果mtDNA编码区的tRNAMet glu Ile及ND1基因核酸片段经HaeⅢ等16种内切酶消化后,这些肿瘤细胞株表现出完全相同的酶切图谱.而D-loop片段,小鼠肿瘤Hca-F出现了与对照小鼠不同的酶切方式;用PCR-SSCP分析方法对这些肿瘤细胞株mtDNA的D-loop的5'及3'端作进一步分析,在研究的6个肿瘤中,有4个在mtDNA非编码区上存在着突变.结论mtDNA突变在肿瘤的发生发展中可能起一定作用.     

云南滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D-Loop的初步研究

目的研究封闭群滇南小耳猪与广西巴马小型猪线粒体DNA（mtDNA）的多态性,探索小型猪遗传监测的方法。方法用18种限制性内切酶对23头滇南小耳猪和21头广西巴马小型猪mtDNA D-loop的PCR产物进行RFLP分析。结果滇南小耳猪和广西巴马小型猪的mtDNA D—loop在品种内和品种间均表现出相同的酶切图谱,未见多态性。结论滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D—loop的遗传多样性贫乏,mtDNA PCR—RFLP技术在其遗传监测中不具应用价值。     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

高低转移小鼠肝癌细胞线粒体DNA遗传变异的研究

目的 检测和分析转移特性不同的两个小鼠肝癌细胞亚系线粒体DNA(mtDNA)的遗传变异,探讨线粒体DNA遗传改变与肿瘤发生发展的关系.方法 PCR-RFLP和序列测定技术.结果 对mtDNA的tRNA Ile GlN Met基因和ND3基因以及D-loop片段进行的扩增和限制性片段长度多态性分析结果 显示,无扩增片段长度呈多态性,且这两个肝癌细胞系mtDNA的所有限制性片段方式和大小完全一致.序列测定发现,这两个肝癌细胞系在线粒体DNA的 D-loop区存在序列差异.结论 mtDNA 非编码区内的遗传改变,反映了肿瘤发生发展过程中环境和遗传因素的影响,有可能与肿瘤细胞的恶性表型有关.     

Mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA in g astric cancer

Objective: To investigate the mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA (mtDNA) in gastric cancer.Methods: The mtDNA of D-loop region was amplified by PCR and ,sequenced in 20 samples from gastric cancer tissue and adjacent normal membrane. Results: There were 7/20(35% ) mutations in the mtDNA of D-loop region in gastric cancer patients. There were four microsatellite instabilities among the 18 mutations. Nine new polymorphisms were identified in 20 patients. Conclusion: The mtDNA of D-loop region might be highly polymorphoric and the mutation rate is high in patients with gastric cancer.     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

白细胞介素－2受体表达在近交系小鼠遗传监测中应用的研究

采用免疫组织化学方法，通过检测骨组织移植后宿主淋巴细胞白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的表达，判定近交系小鼠Ｈ－２基因的纯合性，以期作为近交系小鼠遗传监测的方法。选用Ｃ５７ＢＬ／６系小鼠，实验前进行了标准的组织相容性基因检测（皮肤移植法），观察期为５０ｄ，每１０ｄ为一个观察点。结果显示，与皮肤移植结果一致。该方法似可作为近交系小鼠的遗传监测的手段之一。     

西藏小型猪线粒体D-loop区及微卫星多态性的遗传学分析

目的通过分析西藏小型猪线粒体控制区(D-loop区)及微卫星位点的遗传多态性,检测西藏小型猪的遗传背景,从而为其作为实验动物提供分子生物学方面的可靠依据。方法利用特异性引物对西藏小型猪的线粒体D-loop区及10个具有多态性的微卫星位点进行扩增,割胶纯化并对线粒体D-loop区进行测序,另外采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离微卫星位点的等位基因。结果西藏小型猪线粒体D-loop区全序列没有多态性,微卫星位点则具有高度的遗传多态性和杂合度,分别为0.584和0.573。结论西藏小型猪线粒体基因组无多态性,证明其在母系进化和遗传上与其他猪种较为一致,本实验所用的西藏小型猪生长于一个封闭的环境,导致其微卫星位点遗传多态性的中低度水平。