血浆Dickkopf-1在类风湿关节炎患者中的表达及其与外周血T细胞亚群的相关性

目的: 检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆Dickkopf-1(DKK-1)水平,并分析其与外周血T细胞亚群、临床指标之间的相关性。方法: 采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测32例RA患者及20例健康对照者的血浆DKK-1的水平,并记录RA患者的各项临床表现和实验室指标。流式细胞仪检测RA患者外周血T细胞亚群(包括Treg、nTreg、aTreg、sTreg、Teff、Tfh、CD4⁺CD161⁺T、CD8⁺T、CD8⁺CD161⁺T细胞)。比较两组血浆DKK-1的水平,并分析其与外周血T细胞亚群、临床指标的相关性。结果: (1)RA患者血浆DKK-1浓度为(124.97±64.98) ng/L,健康对照组血浆DKK-1浓度为(84.95±13.74) ng/L,RA患者血浆DKK-1水平显著高于健康对照组(P<0.05),RA患者外周血CD8⁺CD161⁺T细胞百分比显著高于健康对照组(P<0.05)。(2)血浆DKK-1水平与红细胞沉降率(r=0.406,P=0.021)、DAS28评分(r=0.372,P=0.036)、免疫球蛋白G(r=0.362,P=0.042)、免疫球蛋白A(r=0.377,P=0.033)呈正相关;与年龄、病程、C-反应蛋白、类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、免疫球蛋白M、补体C3、补体C4、白细胞计数、中性粒细胞百分比无相关性。(3)RA患者血浆DKK-1水平与外周血CD8⁺CD161⁺T细胞百分比呈正相关(r=0.413,P=0.019);与Treg、nTreg、aTreg、sTreg、Teff、Tfh、CD4⁺CD161⁺T、CD8⁺T细胞无相关性。(4)外周血CD161⁺CD8⁺T细胞百分比与红细胞沉降率(r=-0.415,P=0.004)、C-反应蛋白(r=-0.393,P=0.007)、DAS28评分(r=-0.392,P=0.007)、类风湿因子(r=-0.535,P<0.001)、抗环瓜氨酸肽抗体(r=-0.589,P<0.001)、免疫球蛋白G(r=-0.368,P=0.012)、免疫球蛋白M(r=-0.311,P=0.035)呈负相关;与年龄、病程、免疫球蛋白A、补体C3、补体C4、白细胞计数、中性粒细胞百分比无相关性。结论: RA患者血浆DKK-1水平和外周血T细胞亚群中的CD8⁺CD161⁺T细胞百分比均升高,可能与患者体内促炎细胞因子的分泌有关;DKK-1参与骨稳态的调节,可用作RA骨破坏的标志物。     

新型冠状病毒肺炎淋巴细胞亚群与严重程度的相关分析

目的:了解不同临床亚型新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 19, COVID-19)患者淋巴细胞亚群的差异。方法:选取2020年2月8日至3月28日在华中科技大学同济医学院附属同济医院中法新城院区由三家援鄂医疗队负责的隔离病房收治的81例COVID-19患者为研究对象。根据相关诊断标准,将患者的疾病状态分为普通型(35例)、重型(39例)、危重型(7例)。检测血常规、淋巴细胞亚群等指标,比较不同临床亚型组患者间各指标是否存在差异。结果:三组患者淋巴细胞、T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞绝对数等指标差异均有统计学意义(P<0.05),危重型患者上述指标均明显低于普通型及重型患者,且随疾病严重程度加重呈递减趋势。22例患者首次检测时T淋巴细胞、B淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞及NK细胞绝对数、CD4⁺/CD8⁺六项指标均在正常参考值范围内,59例患者上述指标存在异常,以NK细胞和CD8⁺T淋巴细胞绝对数减少最为常见(61%,56%)。将NK、CD8⁺T淋巴细胞绝对数均低于正常参考值范围患者作为一组,其余指标异常患者作为一组,前者危重型患者较多(普通型:重型:危重型分别为4:8:7 vs. 19:21:0,P=0.001),且死亡病例均在此组(6例 vs. 0例,P=0.001)。15例患者B淋巴细胞绝对数低于正常参考值范围,余64例均在正常参考值范围内,减低组与正常组普通型:重型:危重型分别为4:7:4和30:31:3,减低组危重型患者比例多于正常组,两组间差异有统计学意义(P=0.043)。结论:COVID-19患者临床亚型越危重淋巴细胞各亚群绝对数越低。     

三七总皂苷对再生障碍性贫血小鼠T淋巴细胞亚群的影响及其促造血作用

目的：探讨三七总皂苷（PNS）对再生障碍性贫血模型小鼠T淋巴细胞亚群和造血功能的影响,阐明PNS对再生障碍性贫血小鼠的治疗机制。方法：50只小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量PNS组、中剂量PNS组和高剂量PNS组,低、中和高剂量PNS组小鼠分别腹腔注射100、200和400 mg·kg^-1PNS,对照组和模型组小鼠给予等体积生理盐水,连续给药14 d。测量小鼠体质量并计算脾脏及胸腺指数,采用流式细胞术检测小鼠外周血CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞百分率并计算CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞的比值,ELISA法测定小鼠血清γ干扰素（INF-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,采用血细胞分析仪检测小鼠红细胞（RBC）、骨髓单个核细胞（BMCs）、白细胞（WBC）、血小板（Plt）数量及血红蛋白（Hb）水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数、外周血CD4⁺T淋巴细胞百分率及CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值明显降低（P<0.05）,外周血RBC、BMCs、WBC、Plt数量和Hb水平明显降低（P<0.05）,外周血CD8⁺T淋巴细胞百分率和血清中INF-γ、TNF-α水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,低、中和高剂量PNS组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数、CD4⁺T淋巴细胞百分率和CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值明显升高（P<0.05）,外周血RBC、BMCs、WBC、Plt数量和Hb水平明显升高（P<0.05）,CD8⁺T淋巴细胞百分率和血清中INF-γ、TNF-α水平明显降低（P<0.05）。结论：PNS呈剂量依赖性调节T淋巴细胞亚群的平衡,抑制INF-γ和TNF-α释放,提高造血相关因子水平,从而改善再生障碍性贫血小鼠的造血功能。     

外周血淋巴细胞亚群、NK细胞检测在诊断儿童传染性单核细胞增多症中的临床价值

目的 分析传染性单核细胞增多症(IM)患儿外周血中淋巴细胞亚群及NK细胞计数及比例的变化,探讨淋巴细胞亚群及NK细胞检测对IM患儿的临床意义。方法 选择2020年3月—2021年7月本院儿科收治的IM患儿21例作为IM组,同时选择同期在本院儿科就诊的其他疾病患儿20例作为对照组。比较两组患者之间CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B细胞及CD16⁺CD56⁺NK细胞计数和百分比的变化,并比较他们之间的差异。结果 IM组患儿CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞及CD16⁺56⁺NK细胞计数值均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),并且IM组CD4⁺T细胞/CD8⁺T细胞比值倒置;两组患儿之间CD19B+细...     

系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群的分布及其与疾病活动和预后的关系

目的：分析系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中T淋巴细胞亚群的分布,并阐明其与SLE疾病活动性及预后的关系。方法：收集100例初治SLE患者外周血,分析不同临床亚型SLE患者（肾脏受累、皮肤受累、关节受累、血液系统受累和不同疾病活动期） T淋巴细胞亚群计数,评估初治SLE患者基线期临床指标与T淋巴细胞亚群计数之间的关系。100例患者中有78例随访12个月,随访患者中26例出现不良预后,比较预后不良组与临床缓解组SLE患者T淋巴细胞亚群计数;SLE患者T淋巴细胞亚群计数与临床指标的相关性分析采用Spearman相关分析。结果：狼疮肾炎组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于非狼疮肾炎组（P<0.05）,关节受累组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞计数低于非关节受累组（P<0.05）,皮肤受累组SLE患者CD8+T淋巴细胞计数低于非皮肤受累组（P<0.05）,血液系统受累组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于非血液系统受累组（P<0.05）。SLE患者基线水平CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数与SLE疾病活动性指标（SLEDAI）评分呈负相关关系（r=-0.391,P=0.001;r=-0.360,P=0.002;r=-0.315,P=0.008）;CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞计数与SLE患者血浆C3水平呈正相关关系（r=0.407,P=0.001;r=0.395,P=0.001;r=0.254,P=0.035）;CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数与SLE患者外周血淋巴细胞（LY）计数呈正相关关系（r=0.717,P=0.000;r=0.617,P=0.000;r=0.599,P=0.000）;重度活动组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于轻度活动组（P<0.05）;预后不良组SLE患者CD3+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞计数于临床缓解组（P<0.05）。结论：T淋巴细胞亚群分布在不同亚组SLE患者中各有不同,并且与SLE疾病活动性密切关联;CD4+T淋巴细胞计数与SLE患者预后不良有关,有可能成为SLE疾病活动性标志物和预后判断的标志物。     

结核病患者淋巴细胞亚群与临床特征及相关指标的分析

目的 探讨结核病患者外周血淋巴细胞亚群与临床特征及相关指标的关系。方法 选取湖南省某胸科医院住院的500例结核病患者为研究对象,收集其基本信息、临床特征和检测结果,对数据进行分析。结果 500例结核患者,不同年龄、不同患者类型各组间相比,CD3⁺T、CD8⁺T、CD4⁺T细胞绝对计数差异有统计学意义(t=2.895、t=3.109、t=2.091,t=3.858、t=3.448、t=3.042,P<0.05)。不同肺受累范围组及是否耐药组各组间相比,CD3⁺T和CD8⁺T细胞绝对计数差异有统计学意义(t=5.387、t=6.697,t=2.529、t=2.418,P<0.05)。不同结核类型组间相比,CD3⁺T、CD4⁺T细胞、NK细胞绝对计数差异有统计学意义(F=7.814、F=12.223、F=11.246,P<0.05)。痰涂片、痰培养各阳性组与阴性组相比,CD3⁺T、CD8^+<...     

肺腺癌患者单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血 淋巴细胞亚群变化及其临床意义

目的：观察肺腺癌患者行单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血T、B和NK淋巴细胞亚群变化,探讨其与患者临床病理参数的相关性及其可能的临床意义。方法：选取经单孔胸腔镜肺叶切除术治疗的肺腺癌患者66例,于入院当天（D0）、术后第1天（D1）和术后第5天（D5）分别抽取外周静脉血。采用血细胞计数仪和流式细胞术检测CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比,计算手术前后患者T、B和NK淋巴细胞百分比的变化（ΔD0-1、ΔD0-5和ΔD1-5）,分析其术后早期变化规律及与患者临床病理参数的关系。结果：与D0时比较,D1和D5时患者外周血中CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比降低（P<0.01）;D5时患者外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞百分比高于D1时（t=5.362,P<0.01;t=5.202,P<0.05）。D5与D1时患者CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比比较差异无统计学意义（P>0.05）。D0和D5时非吸烟患者CD8+T淋巴细胞百分比明显高于吸烟患者（t=2.162,P<0.05;t=1.974,P<0.05）,而D0时吸烟患者CD19+B细胞百分比明显高于非吸烟患者（t=-1.137,P<0.05）;D0时肿瘤T1期患者CD8+T淋巴细胞百分比明显高于T2-3期患者（t=1.684,P<0.05）;而D5时肿瘤T1期患者CD19+B淋巴细胞百分比明显高于T2~4期患者（t=1.431,P<0.05）;病理分期Ⅰ期患者CD19+B淋巴细胞百分比明显高于病理分期Ⅱ-Ⅲ期患者（t=2.134,P<0.05）。男性患者术后CD4+T淋巴细胞百分比变化（ΔD1-5）明显高于同期女性（t=1.707,P<0.05）;CD8+T淋巴细胞百分比变化（ΔD0-1和ΔD0-5）与肿瘤T分期呈负相关关系（r=-0.366,P<0.01;r=-0.252,P<0.05）;病理分期Ⅱ-Ⅲ期患者CD19+B淋巴细胞百分比变化（ΔD0-5和ΔD1-5）明显高于病理分期Ⅰ期患者（t=2.075,P<0.05;t=2.140,P<0.05）;CD56+NK淋巴细胞百分比变化（ΔD0-5）与患者年龄和吸烟状况有相关性,高龄患者（≥60岁）的ΔD0-5小于低龄患者（<60岁）（t=1.557,P<0.05）,吸烟患者ΔD0-5小于不吸烟患者（t=-0.592,P<0.05）;患者CD56+NK淋巴细胞百分比变化（ΔD1-5）与肿瘤T分期呈负相关关系（r=-0.286,P<0.05）。结论：淋巴细胞亚群百分比的变化程度与患者年龄、性别、吸烟状况和肿瘤T分期有关。     

高危型HPV感染不孕症女性外周血T淋巴细胞亚群分布特征及辅助生殖临床结局

目的：探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染不孕症女性外周血T淋巴细胞亚群分布特征及应用辅助生殖技术的临床效果和妊娠结局。方法：选取2020年5月—2022年10月我院收治的62例宫颈高危型HPV感染不孕症患者为试验组,同时选取50例HPV感染阴性不孕症患者为参照组,试验组患者根据感染的HPV类型分为HPV16型组(29例)、HPV18型组(21例)、其他(12例)。患者入院后均采集外周静脉血,同时均接受我院体外受精—胚胎移植进行辅助生殖,随访观察妊娠结局。比较两组患者外周血T淋巴细胞亚群水平、B细胞百分比、NK细胞百分比及CD4⁺/CD8⁺分布特征;比较试验组不同HPV感染类型及妊娠成功、失败患者外周血T淋巴细胞亚群水平及B细胞、NK细胞百分比。结果：试验组患者外周血CD3⁺、CD4⁺、NK细胞百分比及CD4⁺/CD8⁺比值低于参照组,CD8⁺高于参照组(P<0.05),两组外周血B细胞百分比无明显差异(P>0.05)。H...     

IL-33诱导的小鼠过敏原非依赖性哮喘样模型肺组织免疫细胞及亚群的改变

目的 本研究旨在通过对白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）诱导的过敏原非依赖性哮喘样模型小鼠的观察,探索IL-33对小鼠肺组织中T、B淋巴细胞亚群,自然杀伤T（natural killer T,NKT）细胞和固有淋巴样2型细胞（type 2 innate lymphoid cells,ILC2）的生物学作用。方法 采用数字表法将小鼠随机分为氯化钠注射液（normal saline,NS）组和IL-33组,分别将NS、IL-33于1~6 d连续滴鼻,之后隔天滴鼻至18 d制备小鼠哮喘模型。采用有创肺功能检测小鼠气道高反应性;肺组织切片染色观察气道炎性反应;流式细胞术检测小鼠肺组织中T、B细胞亚群,NKT细胞和ILC2细胞数量及比例变化。结果 与NS组相比,鼻腔给予IL-33刺激可引起小鼠气道反应性增高,气道周围炎性细胞浸润和杯状细胞增生。IL-33组小鼠肺组织T细胞（CD3⁺T）及其亚群细胞数增多,Th2细胞（CD3⁺CD8^-IL-4⁺）出现优势分化,Th1/Th2细胞比例下降（P<0.01）;B细胞（CD19⁺B）及其亚群（B1a：CD19⁺CD23^-CD5⁺CD11b⁺,B1b：CD19⁺CD23^-CD5^-CD11b⁺和B2：CD19⁺CD23⁺B220⁺）以及ILC2细胞（lineage^-ICOS⁺ST2⁺）数出现明显增加（P<0.01）;NKT细胞（CD3⁺CD8^-CD49b⁺）比例无明显改变（P>0.05）。结论 IL-33可能通过直接或间接作用造成肺组织T、B淋巴细胞亚群和ILC2细胞的数量及比例改变,打破局部免疫系统平衡,引发哮喘炎性反应。     

系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞miR-126及宿主基因EGFL7DNA甲基化状态分析

目的: 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者CD4⁺T细胞miR-126宿主基因EGFL7的甲基化水平对miR-126表达的调控。方法: 采用实时qPCR检测SLE患者CD4⁺T细胞miR-126及EGFL7 mRNA表达水平;亚硫酸氢钠基因组测序法检测EGFL7基因启动子区甲基化状态。结果: miR-126及其宿主基因EGFL7在SLE患者CD4⁺T细胞表达上调(P<0.01),EGFL7 mRNA表达水平与miR-126的表达呈正相关(r=0.538,P=0.015)。miR-126是一个内含子miRNA,位于宿主基因EGFL7基因座第7个内含子中,其自身的基因序列中包含29个CpG位点。但该区域甲基化水平在SLE患者CD4⁺T细胞和正常对照组间差异无统计学意义(P=0.907)。而SLE患者CD4⁺T细胞中EGFL7基因启动子区甲基化水平显著降低(P<0.05)。结论: SLE患者CD4⁺T细胞miR-126宿主基因EGFL7启动子区甲基化状态调控宿主基因本身及其miR-126的表达。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

HBV慢性感染者肝脏组织中CD4+T、CD8+T和FoxP3+Tregs细胞的表达水平

?目的:计数慢性乙型肝炎病毒( HBV)感染者肝脏组织中CD4⁺T、CD8⁺T和FoxP3⁺Tregs细胞,观察不同免疫状态下的肝脏组织中CD4⁺T和CD8⁺T细胞表达水平之间的差异,探索其临床意义。方法: 选取慢性HBV感染者68例,健康对照组(非HBV感染组)30例,运用免疫组织化学的方法进行检测。结果:慢性HBV感染组的CD4⁺T、CD8⁺T和FoxP3⁺Tregs细胞表达水平明显升高,与非HBV感染组相比,P均<0.001;在HBV感染组中,CD4⁺T和CD8⁺T细胞在免疫耐受期患者肝脏组织中的表达水平最低,CD4⁺T、CD8⁺T细胞在免疫清除期、再活动期中的表达水平与二者在免疫耐受期相比,均有增高趋势,然而CD4⁺T、CD8⁺T细胞的表达水平在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期及再活动期任意两期之间比较,P均>0.05。结论:CD4⁺T和CD8⁺T细胞在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期及再活动期患者肝脏组织中表达水平的变化趋势在一定程度上反应了各期肝脏的免疫状态;FoxP3⁺ Tregs细胞可能与HBV感染慢性化有关。