多孔β-磷酸三钙/胶原支架与犬牙周膜细胞三维复合体的构建

目的:探索用多孔β-磷酸三钙/胶原(β-TCP/col)支架与犬牙周膜细胞(PDLCs)在体外构建三维复合体.方法:分离培养犬PDLCs,并对其来源进行鉴定;利用甲基噻唑基四唑法检测β-TCP/col浸提液对PDLCs增殖的影响;并将第3代PDLCs以2×10⁵/mL的浓度接种于β-TCP/col支架上进行三维复合体的体外构建,用扫描电镜观察.结果:β-TCP/col浸提液对犬PDLCs增殖无不良影响;PDLCs可在材料的三维结构上贴附生长,细胞充分伸展,且表面可见明显分泌物. 结论:多孔β-磷酸三钙/胶原支架与犬牙周膜细胞具有良好的生物相容性,二者可在体外构建成三维复合体,提示该材料具有成为牙周组织工程理想支架材料的潜力.     

SGBG/PHBV构建牙周组织工程支架的初步研究

目的研究溶胶-凝胶生物活性玻璃（SGBG）／聚羟基烷酸酯（PHBV）与人牙周韧带细胞（PDLCs）的生物相容性，为牙周组织工程支架的选择提供依据。方法通过体外细胞培养实验，包括采用MTT比色分析法的浸提液实验，测定材料对人牙周韧带细胞有无毒性；及人牙周韧带细胞与SGBG／PHBV体外三维培养的直接接触法，通过扫描电镜，上清液羟脯氨酸含量的测定，检测材料对细胞生长形态及分泌功能的影响。结果SGBG／PHBV对人牙周韧带细胞无毒性，细胞在SGBG／PHBV三维支架上贴附及生长良好，实验组上清液羟脯氨酸含量测定值与对照组差异有显著性，材料不影响细胞的分泌功能，同时支架材料的三维结构更能促进细胞的分泌功能。结论SGBG／PHBV作为支架材料，有良好的生物相容性，有望应用于牙周组织缺损的组织工程修复。     

双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性

【目的】 研究双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性?【方法】 组织块培养法培养原代人牙周膜细胞?MTT法测胶原支架不同浓度浸提液的细胞毒性?将人牙周膜细胞与支架材料三维培养,通过扫描电镜?组织切片观察其复合情况,并检测三维培养后细胞碱性磷酸酶(ALP)?羟脯氨酸(HYP)的分泌情况? 【结果】 不同浓度材料浸提液毒性评级为0 ~ 1级?细胞与支架复合培养后,细胞在支架上黏附?增殖良好,支架材料内部细胞分布均匀,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部?细胞与胶原支架复合培养24 h后,细胞的ALP活性与对照组无明显差异(P > 0.05),复合培养48?72 h后,细胞的ALP活性高于对照组(P < 0.05)?复合培养24?48?72 h后,细胞的HYP活性均高于对照组(P < 0.05)?【结论】 双层胶原支架具有良好的生物相容性,可进一步应用于牙周组织工程的研究?     

去抗原异种松质骨的生物相容性研究

目的：了解去抗原异种松质骨（antigen—extracted xenogeneic cancellousbone，AEXCB）对骨髓基质细胞增殖的影响，为细胞移植载体的选择提供依据。方法：取新生小牛股骨下端松质骨，经物理化学处理，制成去抗原异种松质骨载体，与兔骨髓基质细胞bone marrow stromalcells，BMSC）体外复合培养，通过扫描电镜、MTF测试法、考马斯亮蓝和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法，观察去抗原异种松质骨材料对细胞生长、增殖及功能表达的影响。结果：骨髓基质细胞能在AEXCB材料上粘附、增殖，细胞形态良好。去抗原异种松质骨与BMSC作用后ALP活性的吸光度（OD）值，与对照组比较无显著差异。结论：去抗原异种松质骨材料无细胞毒性作用，具有良好的细胞相容性，可用作骨组织工程的支架材料。     

狗牙周膜细胞与壳聚糖-磷酸三钙三维培养的实验研究

目的：建立狗牙周膜细胞（PDLCs）体外三维立体培养模型,探讨以狗PDLCs为种子细胞,以壳聚糖-磷酸三钙复合体为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法：冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙多孔复合支架材料,组织块法培养狗牙周膜细胞,取第4代细胞传代扩增后接种到三维支架上,体外继续培养。免疫组化方法鉴定细胞起源;MTT法检测支架对狗PDLCs增殖的影响;取培养3、6?d的细胞-支架复合物的标本,用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的形态及在支架上的粘附、生长情况。结果：免疫组化显示,狗PDLCs抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,证实为中胚层来源。MTT法检测结果显示,支架材料对狗PDLCs的生长、增殖与空白对照组相比差异均无统计学意义(P＞0．05)。扫描电镜示壳聚糖-磷酸三钙复合体具有良好的多孔网状结构,狗PDLCs在支架上贴附牢固,伸展充分,增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。结论：壳聚糖-磷酸三钙具有良好的粘附性和细胞相容性,狗PDLCs与之复合培养生长良好,表明以自体PDLCs为种子细胞、以壳聚糖-磷酸三钙为支架材料进行的牙周组织工程是可行的。     

蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞毒性的实验研究

目的研究不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细袍的毒性及其影响细胞增殖的因素。方法采用组织块培养法体外原代培养鼠胚表皮细胞，用直接接触法和浸提液法体外培养鼠胚表皮细胞，MTT比色法检测其在不同蚕丝蛋白材料上的增殖活力和细胞相对增殖率，进行毒性分析；并用活细胞计数法观察不同蚕丝蛋白材料对鼠胚表皮细胞生长的影响。结果鼠胚表皮细胞在1、2、4、5、7、8、10号各型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力与细胞对照组相当（P〉0.05）；在3、6、9号化学交联或HY-823交联型蚕丝蛋白材料上生长，其增殖活力均低于细胞对照组（P〈0．05）；而在11号蚕丝蛋白材料其增殖活力显著低于细胞对照组（P〈0．01）。1、7号丝胶材料细胞毒性分级为0级（无毒），2、3、4、5、6、8、9、10号各型蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为1级（轻微毒），而11号蚕丝蛋白材料细胞毒性分级为2级（中度毒）。活细胞计数结果与MTT检测结果基本相一致。结论除11号蚕丝蛋白材料外，1～10号各型蚕丝蛋白材料无明显细胞毒性，能支持鼠胚表皮细胞正常生长，具有良好的细胞相容性。     

去抗原异种松质骨与骨髓基质干细胞相容性研究

目的：了解去抗原异种松质骨（AEXCB）对骨髓基质干细胞增殖的影响，为细胞移植载体的选择提供依据。方法：取新生小牛股骨下端松质骨经物理化学处理，制成去抗原异种松质骨载体，与兔骨髓基质干细胞（BMSC）体外复合培养，通过扫描电镜、MTT测试法、考马斯亮蓝和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法，观察去抗原异种松质骨材料对细胞生长、增殖及功能表达的影响。结果：骨髓基质干细胞能在AEXCB材料上粘附、增殖，细胞形态良好。去抗原异种松质骨与BMSC作用后ALP活性的吸光收（OD）值，与对照组比较无显差异。结论：去抗原异种松质骨材料无细胞毒性作用，具有良好的细胞相容性。可用作骨组织工程的支架材料。     

骨髓基质细胞和胶原膜BME-10X生物相容性的实验研究

目的 观察胶原膜BME-10X与Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)的生物相容性,为将其运用于组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据.方法 体外培养Beagle犬BMSCs,并与胶原膜BME-10X复合培养.HE染色检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.结果 BMSCs复合胶原膜后生长良好,MTT及ALP结果均显示,在各时间点,对照组和实验组间增殖及ALP活性均无显著性差异(P>0.05).结论 胶原膜BME-10X有良好的生物相容性,有望成为BMSCs的载体材料应用于牙周组织工程研究.     

HA-P软腭植入材料的研制及细胞毒性检测

目的:研制一种新的治疗鼾症的软腭植入系统微创手术的生物材料并于体外检测其细胞毒性,探讨将其应用于软腭植入系统的可能性.方法:将羟基磷灰石颗粒(HA)、聚乳酸-三亚甲基碳酸酯P(LATMC)按一定比例复合,利用有机溶剂注模法,制备重组软腭植入材料;并采用MTT检测法,将不同浓度的HA-P浸提液与MH-3T3成纤维细胞接触1、3、5 d,检测细胞的增殖活性,计算细胞的相对增殖度,用6级毒性法进行评级.结果:研制不同浓度的HA-P材料浸提液在不同的时间点培养的细胞均正常增殖(P＞0.05),毒性级别为0～1级.结论:研制的HA-P材料具有良好的细胞相容性,可能是一种良好的软腭植入系统材料.     

改性聚乳酸与Schwann细胞的生物相容性研究

目的:对不同的改性聚乳酸材料进行Schwann细胞(SC)生物相容性观察。方法:采用细胞增殖度法,观察不同材料浸提液对SC增殖影响,进行毒性评级;采用相差显微镜、扫描电镜、荧光分光光度法观察细胞形态以及黏附情况。结果:除2#材料(PLA-g-HEMH)的高浓度浸提液毒级为2级外,其余毒级均为0~1级,细胞生长良好,其黏附性较未改性聚乳酸高,但所有材料SC的黏附性仍低于培养板(P<0.01)。结论:改性后的材料细胞生物相容性良好,其表面亲水性增加,但2#材料可能在改性过程中表面酸度增加,在处理上有必要改进。     

丝素蛋白与丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料体外细胞相容性的比较

目的探讨丝素蛋白（SF）与丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料（SF/HA）的体外细胞相容性,为组织工程提供理想的生物支架材料。方法将小鼠的骨髓间充质干细胞（C3H10T1/2）接种于上述两种生物材料上,运用四唑盐比色试验（MTT法）检测细胞的增殖能力,利用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上的生长形态。结果 C3H10T1/2在SF与SF/HA上都能很好地黏附、生长和增殖。SF、SF/HA和C3H10T1/2都有良好的细胞相容性。结论 3%SF、6%SF、600%SF/HA3组多孔材料的体外细胞相容性最好。     

体外评估硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞生物相容性的研究

背景：中风和神经系统的外伤和卒中可导致神经功能缺损,同时伴随轴突受损,形成胶质瘢痕、空腔和裂隙。嗅鞘细胞作为自体移植最佳的候选细胞,可以分泌神经营养因子促进轴突的生长。并且生物支架具有多孔的三维立体结构,能够运载细胞填充和桥连这些空隙。因此移植支架联合种子细胞是一种修复神经组织重要的策略。 方法：硫酸肝素-胶原蛋白生物支架经过一系列的程序而制作成功。将硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞在体外共培养,在第1、3、5和7天时用MTT法检测细胞活性。数据分析采用重复测量设计的方差分析,当P < 0.05时被认为具有显著性差异。之后将嗅鞘细胞用CFSE标记,通过流式细胞仪检测标记率为99.8%。用CFSE标记后的嗅鞘细胞以适宜的浓度种植于支架上。细胞在支架上的粘附和生长可以通过荧光显微镜和扫描电镜直接追踪和观察。 结果：硫酸肝素-胶原蛋白生物支架具有稳定的三维立体结构,对于嗅鞘细胞无毒性（F= 0.14,P= 0.9330）。除此之外,细胞及其轴突也能够在该支架中很好的黏附和生长。 结论：本实验表明硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞在体外具有很好的生物相容性。因此,硫酸肝素-胶原蛋白生物支架可能可以作为一种载体,种植嗅鞘细胞后应用于神经组织工程。     

In vitro evaluation of the compatibility of a novel collagen-heparan sulfate biological scaffold with olfactory ensheathing cells

Background Stroke and traumatic injury to the nerve system may trigger axonal destruction and the formation of scar tissue, cystic cavitations and physical gaps. Olfactory ensheathing cells （OECs） can secrete neurotrophic factors to promote neurite growth and thus act as a prime candidate for autologous transplantation. Biological scaffolds can provide a robust delivery vehicle to injured nerve tissue for neural cell transplantation strategies, owing to the porous three-dimensional structures （3D）. So transplantation of the purposeful cells seeded scaffolds may be a promising method for nerve tissue repair. This study aimed to evaluate the compatibility of a novel collagen-heparan sulfate biological scaffold with olfactory ensheathing cells in vitro. Methods Collagen-heparan sulfate （CHS） biological scaffolds were made, and then the scaffolds and OECs were co-cultured in vitro. The viability of OECs was tested by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyl tetrazolium （MTT） assay at days 1, 3, 5 and 7. Statistical analysis was evaluated by student＇s ttest. Significance was accepted at P 〈0.05. OECs were labeled with carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester （CFSE）, and the CFSE-labeled OECs were seeded into CHS scaffolds. The attachment and growth of OECs in CHS scaffolds were observed and traced directly by fluorescent microscopy and environmental scanning electron microscope （ESEM）. Results CHS biological scaffolds had steady porous 3D structures and no cytotoxicity to OECs （F=-0.14, P=-0.9330）. CHS biological scaffolds were good bridging materials for OECs attachment and proliferation, and they promoted the axonal growth. Conclusion The compatibility of CHS biological scaffolds with OECs is pretty good and CHS biological scaffold is a promising cell carrier for the implantation of OECs in nerve tissue bioengineering.     

转化生长因子β1基因修饰的间充质干细胞／仿生基质材料的体外复合培养

目的 探讨转化生长因子β1（TGF－β1)基因转染对间充质干细胞（MSCs)增殖分化的影响,评价涂覆多聚赖氨酸（PLYS）的聚DL乳酸（PDLIA）仿生基质材料能否作为关节软骨组织工程学研究的支架材料。方法 将组织工程学与分子生物学有机结合,体外将具有多重生物学效应的TGF－β1基因转入关节软骨组织工程首选种子细胞－－间充质干细胞（MSCs）,并与表面涂覆PLYS的PDLLA可降解三维多孔基质材料体外复合培养。以单纯空载体转染MSCs为对照,通过扫描电镜等方法观察种子细胞的粘附、增殖及分化等情况。结果 基质材料孔隙率为88％,其中孔径为150－200μm的有效孔占80％。所有细胞增能很好地粘附于基质材料上,其中TGF－β1基因修饰的MSCs增殖分化活性明显优于对照组。结论 利用扮子组织工程学原理可使TGF－β1持续高效发挥作用,使提高关节软骨缺损的修复质量和远期疗效成为可能。涂覆PLYS的PDLLA仿生基质材料不仅具有良好的生物相容性和结构相容性,而且具有更好的表面相容性和生物学活性,在一定程度上解决了细胞－－基质材料之间非的界面不相容问题,是关节软骨缺损修复的良好基质材料。     

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的 探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异.方法 组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异.结果 不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用.HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附.     

新型脱细胞脑组织修复支架的制备及其细胞相容性

 【目的】研制天然脱细胞脑组织修复支架,并对其形态结构、主要成分和细胞相容性进行分析,为研制出理想的脑损伤修复支架提供初步的实验依据。【方法】取成年Sprague-Dawley （SD）大鼠脑皮质,运用冻融、Triton X-100、脱氧胆酸钠、DNA/RNA酶等进行脱细胞处理并予京尼平（Genipin,GP）交联,对处理后的支架材料进行形态结构观察、主要成分分析和细胞相容性观察。【结果】经脱细胞处理后,脑组织细胞成分已去除,形态上具有高度仿生的三维立体空间网状结构。经GP交联后脱细胞支架空间网状结构变得更为明显,无菌保留3个月未见明显降解。平均孔径（14.9±2.5）μm,孔隙率达（90.4±2.2）％。脱细胞支架细胞外基质成分层粘连蛋白(Laminin,LN)强阳性表达、纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）和Ⅳ型胶原（Collagen Ⅳ,Col Ⅳ）弱阳性表达。神经干细胞与脱细胞支架共培养,HE可见细胞外基质支架间大量细胞粘附; SEM下可见大量神经干细胞粘附在支架材料表面,部分细胞表面有突起。【结论】初步研制的脱细胞脑组织支架呈立体空间网状结构,部分保留了细胞外基质成分,并具有良好的细胞相容性。     

RGD序列胶原缓释微球涂层生物活性多孔支架细胞相容性的研究

背景本课题组已经成功制备了硫酸钙与冻干骨复合多孔生物支架,设法提高其细胞相容性仍需继续探索。目的研究RGD缓释微球表面修饰的硫酸钙冻干骨新型生物支架的细胞相容性。方法首先利用煅烧和挂浆的方法制备RGD涂层生物活性多孔支架,通过倒置显微镜观察第三代成骨细胞在对照组(原支架)和实验组(表面修饰后的支架)复合培养的生长分布情况,然后利用扫描电镜观察新型涂层支架和复合培养后的表面情况。分别测定细胞与新型RGD复合直接培养后的细胞蛋白质和细胞黏附率来分析其增殖和分化的能力。结果经过复合培养和对照,新型RGD涂层生物支架组的细胞黏附率明显高于对照组,不同时期的细胞蛋白质也明显要高于对照组(P<0.05),并且新型RGD涂层生物支架的孔隙中有细胞长入的情况。结论 RGD序列缓释微球涂层表面修饰可以提高硫酸钙/冻干骨生物多孔支架的细胞相容性。     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.