大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变早期的基因表达变化

目的:探讨Wallerian溃变早期激活神经损伤修复与再生的分子机制。方法:建立大鼠损伤坐骨神经模型,通过表达谱基因芯片和生物信息学方法,全面系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端Wallerian溃变早期的基因表达变化,运用RT-PCR、Western Blot和Immunohistochemistry等方法验证和鉴定表达谱基因芯片分析结果。结果:大鼠坐骨神经损伤后,坐骨神经远端在Wallerian溃变早期即有1546个显著表达差异基因和21种显著性差异基因表达趋势;基因功能注释和信号通路分析显示,Wallerian溃变早期有58种信号通路被激活,形成Wallerian溃变早期的信号调控网络。结论:大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变早期即有大量基因的表达变化和多种信号途径的激活,本研究可为神经损伤修复与再生提供理论基础。     

慢性镉中毒致大鼠肌萎缩侧索硬化症样改变的研究

目的:探讨小剂量慢性镉中毒法建立大鼠肌萎缩侧索硬化症动物模型的可行性.方法:成年大鼠饮水慢性染镉.每天饮用含镉去离子水(150mg/L),记录每天饮水量,120 d后取材.采用神经电生理、光镜、电镜技术测定大鼠坐骨神经传导速度、股二头肌形态学变化、脊髓前角运动神经元形态学变化;同时采用原子吸收石墨炉法、生物化学技术测定脊髓内镉含量以及脊髓组织细胞内铜锌超氧化物歧化酶1(CuZn-SOD_1)活性、丙二醛含量的变化.结果:染镉后120d,大鼠运动神经传导速度减慢但股二头肌纤维直径变化不明显;脊髓前角运动神经元胞体平均截面积有变小、神经元胞浆内粗面内质网排列紊乱并出现核糖体脱颗粒现象;染镉后脊髓内镉含量增加、脊髓组织匀浆内CuZn-SOD_1酶活性降低,而丙二醛含量升高.结论:镉可以在成年大鼠脊髓内蓄积,导致前角运动神经元形态和功能损伤.提示慢性镉中毒法可用于建立大鼠肌萎缩侧索硬化症的动物模型.     

TLR4在大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变过程中的体内作用研究*

目的：研究TLR4（Toll-like receptor 4）在大鼠坐骨神经损伤后,Wallerian溃变过程中的作用,为周围神经损伤修复与再生的研究提供实验依据。方法：制备大鼠损伤坐骨神经模型;利用修饰过的TLR4基因过表达质粒导入大鼠损伤坐骨神经远端组织;通过实时荧光定量PCR和Western Blot的方法分析损伤7d、14d后基因和蛋白的表达,以及相关信号通路的变化。结果：在大鼠坐骨神经损伤7d、14d后,实时荧光定量PCR显示,远端TLR4的过表达引起Bax、Bcl-2、NF2、NT3、PKCα等基因的表达变化,Western Blot显示TLR4过表达后,p-AKT/AKT、p-c-Jun/c-Jun和p-ERK/ERK等蛋白的表达发生显著性差异。结论：TLR4在大鼠坐骨神经损伤后,Wallerian溃变过程中可能发挥了重要的调控作用。     

大鼠坐骨神经损伤后嘌呤P2Y4受体表达变化的实验研究

目的：观察嘌呤P2Y4受体在大鼠坐骨神经损伤后脊髓、背根神经节及坐骨神经中表达的变化规律,初步探讨三磷酸腺苷/三磷酸鸟苷（ATP/UTP）在周围神经再生中的作用机理。方法：42只SD大鼠随机分为正常组（6只）,对照组（6只）和实验组（30只）,实验组大鼠制成一侧坐骨神经切断修复模型,分别于术后1d,1、2、3、4周切取坐骨神经近远断端各5mm、腰膨大部位脊髓以及对应损伤侧背根神经节,以β-肌动蛋白作为内参对照,应用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法观察P2Y4 mRNA表达的变化规律。对照组大鼠只做切口不做手术,正常组大鼠取材作为正常对照,并对RT-PCR产物进行序列测定。结果：在正常组及对照组脊髓及坐骨神经有P2Y4 mRNA的表达,背根神经节则无表达。坐骨神经切断后,吻合口远端P2Y4 mRNA的表达逐渐增加,近端则逐渐降低;脊髓内表达2周达高峰,4周恢复正常;在背根神经节,术后1、2、3周出现弱阳性,4周时表达消失。结论：ATP/UTP通过P2Y4受体参与了周围神经损伤后的病理生理改变,在周围神经损伤后的修复过程中起一定作用。     

地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的:周围神经损伤的再生修复是神经科学研究的重要课题.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在神经系统的生长发育过程中起重要作用.地塞米松可用于治疗神经损伤.文中通过制备大鼠坐骨神经钳夹损伤模型,观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元bFGF的影响. 方法:56只Wistar大鼠分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:神经损伤后即刻局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5mg/(kg·d);等渗盐水组:在神经损伤后等时间点注射等量等渗盐水;正常对照组:不做任何处理.用免疫组化技术观察脊髓前角运动神经元bFGF的变化. 结果:地塞米松明显提高神经损伤后脊髓运动神经元bFGF的表达. 结论:地塞米松通过增强坐骨神经钳夹损伤后脊髓前角运动神经元内bFGF的表达,促进受损神经元的功能恢复.     

转化生长因子β1在大鼠周围神经再生过程中的作用

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠周围神经损伤后再生过程中的作用及是否参与了再生中脊髓前角运动神经元碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的调节。方法: 将48只成年SD大鼠在右侧坐骨神经压榨损伤术后随机分为TGFβ1组和生理盐水（NS）组。TGFβ1组在坐骨神经压榨损伤近心端注射TGFβ1 50μL(0.1μg/mL)，术后隔日在右侧下肢后群肌内注射TGFβ1 50μL, 对照组同样方法注射等量NS。实验动物分别存活3，7，14和21d后运用免疫组织化学方法检测TGFβ1对脊髓前角运动神经元bFGF蛋白的表达变化。存活21d的实验动物还用半薄切片和Fast Blue逆行荧光示踪方法观察TGFβ1对坐骨神经损伤后远端的再生情况。结果：TGFβ1组脊髓前角bFGF蛋白的表达高于NS组（P<0.05）；损伤远侧端再生轴突数目、直径与髓鞘厚度TGFβ1组均明显好于NS组（P<0.05）； TGFβ1实验组脊髓和背根节内荧光标记细胞数量明显多于NS组（P<0.01）。结论：外源性TGFβ1可以促进周围神经损伤后再生；TGFβ1上调周围神经损伤后脊髓前角运动神经元bFGF的表达。     

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。     

大鼠坐骨神经移植后脊髓相应节段运动神经元中P-Erk1/2的表达和变化

目的 研究成年大鼠坐骨神经损伤后脊髓相应节段运动神经元中P-Erk1/2的表达和变化.方法 健康成年雄性Wister大鼠共50只,坐骨神经切断组,将动物模型于术后1W、2W、4W、6W、8W处死后取患侧L4～L6脊髓,Western-Blot方法 检测P-ERK1/2在脊髓中的表达变化,并将两组所得数值进行统计学分析.结果 脊髓前角运动神经元中的P-ERK1/2在假手术组仅有少量表达并维持在一定的水平;在坐骨神经切断组中,术后1W内表达增加、2W达高峰、8W恢复正常水平.结论 大鼠坐骨神经切断后可能是通过激活MAPK/ERK1/2信号通路的方式,对脊髓前角运动神经元的凋亡进行调控.     

地塞米松对坐骨神经损伤后脊髓神经元形态的影响

目的 观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元形态学的影响.方法 27只成年Wis-tar 雄性大鼠随机分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:于神经损伤后局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5 mg/(kg·d);生理盐水组:在神经损伤后注射等量生理盐水;正常对照组:不做任何处理.手术后不同时间段分别取各组动物L4～L6节段脊髓,制做石蜡切片,观察脊髓运动神经元形态及数量的变化.结果 神经损伤组可见同侧脊髓前角运动神经元胞体变小,尼氏体数目减少,模糊不清.地塞米松组神经损伤后的脊髓前角运动神经元和尼氏体的形态明显改善,数量增加.结论 大鼠坐骨神经损伤后局部应用地塞米松可改善脊髓前角运动神经元的形态结构,恢复蛋白质合成功能.     

家族性肌萎缩性侧索硬化症一家系6例

肌萎缩性侧索硬化症是运动神经元病的代表疾病。国外文献报道在肌萎缩性侧索硬化症中约有5%～10%为家族性[1],称家族性肌萎缩性侧索硬化症(familidamyotrophiclateralsclerosis),呈常染色体显性遗传,临床上难与典型的肌萎缩性侧索硬化症相区别[2],国内少有报道。我们在临床工作中发现一家系报告如下。1　病例报告本组一家系(见图1),共三代35人,6例为本病患者。图1　家族性肌萎缩性侧索硬化症患者家系谱　　例1,先证者,女,30岁,农民,1997年8月4日来诊。1997年1月无诱因出现后颈部不适,伴双上肢无力,于当地医院就诊,诊断为颈椎病,给予牵引、离…     

坐骨神经缺损后神经组织再生早期信号调控研究

目的:采用基因芯片技术结合信号传递调控网络(Signal-Flow)分析技术,探讨坐骨神经缺损近端神经组织早期分子信号调控机理。方法:SD大鼠坐骨神经缺损0h、0.5h、1h、3h、6h和9h后,取0.5cm近端神经组织进行mRNA芯片检测,进行差异基因的筛选和信号传递调控网络分析,并采用qRT-PCR对相关基因行表达趋势验证。结果:共筛选差异显著性基因2850个,抗凋亡相关因子和紧密连接蛋白等构成信号传递调控网络的核心部分。Birc2、Birc3和Tnfrsf1a早期上调抑制凋亡相关基因,紧密连接蛋白cldn14促进与其家族成员的结合。结论:抗凋亡因子和紧密连接蛋白可能是坐骨神经缺损后神经组织再生的内在早期调控分子,推测与神经组织损伤后内在的再生能力调控机制相关。     

周围神经损伤的瓦勒变性期修复

目的：研究瓦勒变性期修复神经损伤的效果。方法：２０只ＳＤ大鼠均分为两组,切断右侧坐骨神经,Ａ组在神经损伤后两周修复,Ｂ组在神经损伤时就修复。术后３个对比两组再生神经的功能,电生理和形态学指标。结果：Ａ组大鼠再生神经的功能,电生理和形态学指标与Ｂ组比较差异有显著性。     

利用神经再生室观察FK506促进神经再生的实验研究

目的探讨免疫抑制剂FK506促神经再生的作用及药物应用方法。方法将雄性SD大鼠60只随机分成3组,每组20只,切断双侧坐骨神经制成坐骨神经再生室模型。A组在再生室内注入生理盐水;B组在再生室内注入盐水,颈后皮下注射FK5061mg／kg,连续14d;C组在再生室内注入1μg／mlFK506。观察神经损伤局部的免疫反应、检测腓肠肌湿重、组织形态学及图像分析、电生理学。结果B、C组大鼠神经损伤局部淋巴细胞浸润程度较A组轻微。6周时大鼠腓肠肌湿重为：A组平均579mg,B组平均725mg,C组平均761mg,B、C组大鼠腓肠肌湿重明显优于A组;组织形态学观察与图像分析显示,有髓神经纤维总数为：A组平均720根,B组平均778根,C组平均772根,在有髓神经纤维密度、平均轴突直径、髓鞘厚度等指标中,B组结果明显优于A组。结论（1）大鼠全身应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经功能的恢复。（2）局部应用FK506对早期损伤神经有一定的保护作用。     

生物粘接端端缝合法修复大鼠周围神经损伤的形态学研究

目的用生物粘接端端缝合法修复大鼠周围神经损伤后,研究再生神经的形态学变化.方法选用60只Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组.在手术显微镜下,实验组用生物粘接端端缝合法修复坐骨神经损伤,对照组则采用单纯端端缝合法修复,术后1至6周分期处死取材,用光镜、电镜对比观察神经纤维再生的形态学改变.结果实验组在修复初期雪旺(Schwann)细胞增生明显,不同时间段的神经纤维再生速度、数目、髓鞘厚度明显优于对照组.结论生物粘接端端缝合法,在修复周围神经损伤中可刺激雪旺细胞增殖,缩短Bungner带的形成时间,对神经再生有明显的促进作用.     

大鼠坐骨神经-20℃川芎嗪玻璃化液保存对异体移植后神经再生的影响

目的：探讨不同时间段-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠异体坐骨神经对异体移植后神经再生的影响．方法：-20℃川芎嗪玻璃化液（200mg／L川芎嗪）（A组）保存成年SD雄性大鼠坐骨神经,时间分别为1,2wk,然后选择成年Wistar雄性大鼠坐骨神经缺损模型作为受体,神经段复温后移植给受体,术后进行大体观察以及移植神经的大体、电生理、荧光逆行示踪、运动终板等检查;并分别与-20℃玻璃化液（不含川芎嗪）（B组）和-196℃川芎嗪玻璃化液（200mg／L川芎嗪）（C组）保存的坐骨神经进行比较．结果：保存1wk时-20℃川芎嗪玻璃化液组与-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果无差异,与-20℃玻璃化液组的差异有显著性（P〈0．01）;保存2wk以后3组中以-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果最好,-20℃川芎嗪玻璃化液组其次,-20℃玻璃化液组最差．结论：玻璃化保存液中加入川芎嗪可提高大鼠同种异体神经的保存温度值,-20℃时可保存大鼠周围神经1wk．     

复方丹参注射液和甲基泼尼松龙联合治疗周围神经损伤的实验研究

目的探讨联合应用复方丹参注射液和甲基泼尼松龙（methylprednisolone，MP）对周围神经损伤的治疗效果和意义。方法采用52只SD大鼠造成急性坐骨神经损伤，随机分为4组，每组13只，分别给予复方丹参注射液（丹参组）、MP（MP组）、二药联合应用（联合组）及生理盐水（对照组）治疗，损伤后1个月，比较治疗后不同治疗组神经传导速度及光镜下形态学变化。结果单位视野下神经纤维数量及神经传导速度3个治疗组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；丹参组同MP组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；MP组，丹参组与联合组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论复方丹参与甲基泼尼松龙对神经再生有积极效果，复方丹参注射液与甲基泼尼松龙在治疗周围神经损伤时具有协同作用。     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

电针治疗周围神经损伤后损伤局部差异表达基因分析

[目的] 通过分析电针治疗周围神经损伤后损伤局部差异表达基因,进一步阐明电针治疗周围神经损伤机制。[方法] 选取大鼠坐骨神经横断伤模型为研究对象,随机分为空白组、模型组、电针模型组,于电针6 d后取损伤处坐骨神经,通过高通量技术筛选差异基因,对差异基因进行GO功能分析、KEGG通路分析。[结果] 模型组与空白组相比,上调差异基因3 001个,下调差异基因1 169个。电针模型组与模型组相比,表达上调差异基因24个,下调差异基因80个,结合GO分析结果和KEGG富集分析结果,筛选出了可能与电针治疗周围神经损伤相关的8个通路：白细胞跨内皮迁移通路、γ-氨基丁酸能突触通路、胆碱能突触通路、5-羟色胺突触通路、钙信号通路、紧密连接通路、黏着斑通路、肌动蛋白细胞骨架的调控通路。[结论] 电针可能是通过改变细胞电位平衡、神经元轴突再生骨架结构的重建以及白细胞的迁移而改变周围神经损伤后修复与再生的微环境,从而促进了受损神经的再生。     

生物粘接端端缝合法修复早期周围神经损伤的免疫组化实验研究

目的观察以自体外周血为生物膜室的生物粘接端端缝合法修复早期周围神经损伤的效果。方法选用Wistar大鼠60只，制成坐骨神经损伤模型，然后在双目放大镜下分别用生物粘接端端缝合法和单纯端端缝合法修复损伤的坐骨神经，术后1、2、3、4、5、6周进行坐骨神经功能指数（SFI）测定，并分批处死大鼠取坐骨神经进行离体神经传导速度（NCV）测定和免疫组织化学观察。结果生物粘接端端缝合组在SFI、NCV两项指标上均优于对照组（P〈0．0l或0.05）；免疫组织化学观察表现为生物粘接端端缝合组在修复早期免疫反应更加强烈，着色更深、时间提前，过程缩短。结论生物粘接端端缝合法可以促进神经再生，加快神经再生速度与功能恢复。     

枸杞多糖对大鼠坐骨神经损伤修复后影响的实验研究

目的：评价应用枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对大鼠坐骨神经损伤修复后再生的影响。方法:取SD大鼠40只，随机分为4组，切断右侧坐骨神经后原位吻合，造成损伤模型。术后实验组给以枸杞多糖腹腔注射。对照组给等量生理盐水。各组分别于术后第4、8周行运动神经传导速度、形态学及图像分析等测定各项指标。结果:LBP实验组在术后4周、8周时吻合口远段再生神经纤维轴突的数目、有髓神经纤维直径均不如对照组。术后8周时。运动神经传导速度恢复率低于对照组。结论:枸杞多糖有抑制大鼠坐骨神经断伤吻合后神经再生的作用。