金龟子绿僵菌固态发酵生产壳聚糖酶优化工艺的研究

目的 研究一种绿僵菌固态发酵产壳聚糖酶的新方法.方法 使用正交实验方法研究以日本根霉液态发酵后的菌丝体粉末为氮源,麸皮为碳源时,绿僵菌固态发酵产壳聚糖酶的最佳条件.结果 在起始pH5.0,27℃下培养120 h,C/N为l:4、固液比为1:1.4,绿僵菌发酵产壳聚糖酶活性最高.在优化的条件下,固态发酵产壳聚糖酶的最大活性可达35.08 U/g干培养基.     

真菌多糖激发子对桦褐孔菌多酚积累影响的研究

目的 研究真菌多糖激发子对深层培养的桦褐孔菌抗氧化和抗肿瘤酚类化合物积累的影响。方法 在桦褐孔菌的培养基中分别加入15、45、100 μg/mL的真菌多糖激发子,测定胞内外多酚的量和主要组成成分,抗氧化活性和抗肿瘤活性,并测定不同培养条件下菌丝体内苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶的活性。多酚的量以Folin-Ciocalteu法测定。利用HPLC法测定多酚的组成成分。抗氧化活性以清除超氧阴离子的能力表示。利用MTT法测定多酚对HeLa细胞的抑制率。苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶活性均以分光光度计法测定。结果 添加45 μg/mL的真菌多糖激发子可使桦褐孔菌胞内、胞外酚类化合物分别达到最高水平71.8和182.1 mg/L,明显地高于正常对照组胞内(42.6 mg/g)和胞外(83.6 mg/L)。真菌多糖激发子显著提高了苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶的活性。不同培养条件下产生的胞内、胞外酚类化合物主要组成成分不同,但均具有抗氧化和抗肿瘤等活性,尤其是添加45 μg/mL真菌多糖激发子的培养体系。结论 真菌多糖激发子可上调深层发酵培养的桦褐孔菌酚类化合物的积累以及抗氧化和抑制肿瘤细胞的活性。     

重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究

目的通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺。方法通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况。进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测。结果优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45%、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h。该发酵条件下得菌量为25g/L。SRH蛋白表达量为45%,并且90%以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg。结论建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性。     

灵芝液体发酵产漆酶最佳培养基和培养条件研究

目的研究灵芝液体发酵产漆酶的最佳培养基和培养条件。方法以灵芝S3号菌株为试验材料,以灵芝漆酶活性为衡量指标,通过正交试验分别对灵芝液体发酵培养基及培养条件进行优化筛选。结果筛出最佳培养基组成为葡萄糖30g/L、棉花0.2%、磷酸氢二铵0.66g/L、干酪素0.5%、聚山梨酯-800.15%;优化培养条件为初始pH5.5、装液量75mL、接种量12.5%、菌龄5×24h、培养时间9×24h。结论优化培养基及培养条件后,发酵液中灵芝漆酶活性显著提高。     

基因工程抗体anti-HBsAgFab原核表达体系大规模培养条件的实验研究

目的 探讨含anti-HBsAg Fab/pBAD表达载体的工程化大肠杆菌的大规模培养条件。方法 在摇瓶发酵条件下探讨工程菌的生长和表达规律,摸索最佳的培养模式及诱导表达条件。后根据摇瓶发酵结果于发酵罐中行补料高密度发酵试验,确定最佳补料模式。结果 由摇瓶发酵获得的数据表明,以培养体系处于对数生长中期为诱导表达的起点、在25 ℃条件下以0.2% 阿拉伯糖诱导12 h,Fab的得率最佳,采用溶氧控制补料模式可使培养体系的最大D₆₀₀达到55.2,相当于湿菌含量110 g/L水平;同时,经证实Fab的抗原结合活性良好。结论 初步确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺路线,为应用原核表达体系工业化大批量生产基因工程抗体奠定了基础。     

基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白

在摇瓶条件下对基因工程菌Pichia pastoris的发酵条件进行了实验，并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时，接种量为10%且种子细胞光密度（OD600）为20左右时，细胞生长的延迟期约为2.11h，细胞生长光密度与培养时间的关系模型为：y=0.7841e^0.2319t（线性相关系数r=0.9936）；在补料发酵时细胞浓度可达115g/L-160g/L（干重），在120h重组人血清白蛋白表达量达3.6g/L。     

竹黄菌的液体发酵及生物学活性研究

目的 研究竹黄菌的液体发酵最优条件及生物学活性。方法 利用单因素实验方法比较不同培养条件对竹黄菌生长和产竹红菌素的影响,考察了竹黄菌发酵液抗菌和抗氧化的生物学活性。结果 竹黄菌的较优培养条件为：蔗糖2.0%,葡萄糖3.0%,土豆20%,pH 7.0,菌种活化后放置72 h接种;竹黄菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、黑曲霉和黑根霉等均表现出了较强的抗性,对氧自由基和·OH的清除率分别为84.2%和76.32%。结论 竹黄菌的液体发酵条件简单,发酵产物具有一定的广谱抗菌性能和抗氧化活性,在养殖业中有着良好的应用前景。     

半纤维素酶水解物木糖醇发酵酵母菌的筛选

对 7株酵母菌通过商品木糖培养基摇瓶初筛 ,选出热带假丝酵母 (Candidatropicalis )AY 91 0 0 9作为出发菌株进行驯化培养 ,结合木糖平板筛选出一株优良的木糖醇生产菌C .tropicalisLH - 0 81 ,并用其进行了玉米芯半纤维素酶水解物发酵制备木糖醇的初步试验。 2 5 0mL摇瓶发酵结果表明 ,当水解物中还原糖浓度为 1 5 .2 4 g/L ,装料量为 1 0 0mL ,初始 pH值5 .4 ,(2 8± 1 )℃培养 72h木糖醇浓度 2 .1 9g/L ,还原糖利用率 2 8.7% ,转化率 0 .5 0 g/g ;木糖转化率 0 .75 g/g ,达到理论转化率的 83.3%。     

重组复合干扰素基因工程菌发酵培养条件的研究

目的:研究表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coliDH5α(pBV220/con-IFN)的发酵条件。方法:在摇瓶实验中,采用正交设计法和均匀设计法确定较佳培养基组分;使用20 L发酵罐进行补料分批发酵实验,研究影响菌体生长和con-IFN表达的因素(如溶氧、补料、温度和诱导时间)。结果:发酵培养基配方为蛋白胨10 g/L,酵母膏7.5 g/L,甘油0.5%,Na2HPO4.12H2O 20.13 g/L,KH2PO410.37 g/L,NaCl 9.31 g/L。确定了高密度发酵工艺,即优化的发酵培养基,初始pH7.2,接种量5%,溶氧15%,先经35℃培养4 h,后降温至30℃培养2 h,再以42℃诱导7 h,诱导的同时补料酵母膏0.5%。在此条件下,发酵液可得15.2 g/L湿菌体,con-IFN的表达量占菌体总蛋白的49.60%,每毫升发酵液的抗病毒活性为9.69×108IU。结论:获得了较满意的优化培养基配方和发酵条件,为下游纯化和进一步大规模生产奠定了基础。     

利用板蓝根水提醇沉物生产产朊假丝酵母

目的以板蓝根的水提醇沉物为原料培养产朊假丝酵母。方法将原料液化、糖化处理后,以此水解液为发酵液进行液态发酵,并对该菌在水解液中的生长特性及发酵条件进行研究。结果优化后的培养条件为:水解液还原糖含量2.65%,温度28℃,pH值5.5～6.5,接种量9%,装液量100mL(500mL三角瓶)。在优化培养条件下培养20h后,产朊假丝酵母的生长达到稳定期,其活菌数达到6.61×108/mL。经检测,干燥后的菌粉中靛玉红达0.45μg/g。结论以板蓝根水提醇沉物为原料生产产朊假丝酵母是可行的。     

Treatment and Reuse of Domestic Wastewater for Irrigation and Aquaculture Purposes

The feasibility of sewage treatment via combined chemical-biological techniques has been investigated. Two-stages pilot plant were designed for this purpose. The first stage was direct chemical coagulation-sedimentation using ferric chloride in-combination with lime to reduce the organic load and to remove the colloidal and suspended solids. A comparison of two separation techniques namely chemical coagulation conventional sedimentation and chemical coagulation tube settler sedimentation were investigated. The second stage was either high rate oxidation pond or biological sand-bed to oxidize ammonia to nitrate. The results obtained showed that the effluent produced from the first stage is amaenable for restricted irrigation purposes. The HIROP proved to be satisfactory second treatment method for removal of pollutant. In addition high algal biomass was obtained. However, the use of sand-bed for nitrification proved to be more efficient, complete removal of ammonia was achieved. Average residual COD and BOD values were 66 and 38 mg O2/L, respectively. Fish toxicity was completely eliminated after the nitrification processes.     

Isolation and characterization of a new heterotrophic nitrifying Bacillus sp. strain

Objective To characterize the heterotrophic nitrifying bacteria. Methods The bacteria were isolated from membrane bioreactor for treating synthetic wastewater using the method newly introduced in this study. Fluorescence in situ hybridization （FISH） was used to validate the nonexistence of autotrophic ammonia oxidizers and nitrite oxidizers. Batch tests were carried out to investigate the capability of heterotrophic nitrification by the pure culture. Phylogenetic analysis of the pure culture was performed. Results A heterotrophic nitrifier, named Bacillus sp. LY, was newly isolated from the membrane bioreactor system in which the efficiency of TN removal was up to 80%. After 24-day, incubation, the removal efficiency of COD by Bacillus sp. LY was 71.7 %. The ammonium nitrogen removal rate after assimilation nearly ceased by Bacillus sp. LY was 74.7% The phylogenetic tree of Bacillus sp. LY and the neighbouring nitrifiers were given. Conclusions The batch test results indicate that Bacillus sp. LY can utilize the organic carbon as the source of assimilation when it grows on glucose and ammonium chloride medium accompanying the formation of oxidized-nitrogen. It also can denitrify nitrate while nitrifying. Bacillus sp. LY may become a new bacterial resource for heterotrophic nitrification and play a bioremediation role in nutrient removal.     

右江隆安河段水污染事件的调查与分析

目的了解右江隆安河段河水污染现状、隆安备用水厂水质卫生状况,为进一步加强水源和水厂的卫生管理提供依据。方法现场调查和实验室检查。结果检测3份隆安不同河段河水,总氮分别为0.78mg/L、1.45mg/L和0.96mg/L,为Ⅲ-Ⅳ类水;23∶50采集的隆安备用水厂水源水氨氮1.30mg/L,为Ⅳ类水,出厂水氨氮0.72mg/L,氨氮超出国家标准0.44倍,出厂水仍不合格。结论右江隆安河段河水有机物污染较严重,不能作为集中式生活饮用水水源,必须加强对隆安河段河水和备用水厂的水质监督监测。     

长江下游太湖流域江阴段2008-2011年水源水氨氮、高锰酸盐指数动态变化分析

目的揭示长江太湖流域江阴段水源水中氨氮、高锰酸盐指数的污染变化规律。方法 2008-2011年对江阴段3个水厂取水点源水进行氨氮、高锰酸盐指数监测。结果 4年间氨氮在0.10～0.86mg/L之间,平均值(0.15±0.18)mg/L;总体呈逐年上升趋势,每年间差异无统计学意义。季节上枯水期污染严重,丰水期较轻。高锰酸盐指数在0.24～2.80mg/L之间,平均值(1.79±1.20)mg/L;呈逐年上升趋势,每年间差异有统计学意义,季节上秋季污染最严重。结论长江太湖流域江阴段源水中氨氮、高锰酸盐指数呈逐年上升趋势,有机污染物是两者升高的内在因素。     

高层建筑二次供水水质调查

①目的　了解高层建筑二次加压供水水质状况。②方法　采取２２ 处高层建筑二次加压供水水样,分别测定细菌总数、总大肠菌群数、余氯及氨氮等指标,并与一般水网水样检测结果进行比较。③结果　冬春季及夏秋季二次供水水样中的细菌总数、总大肠菌群数及氨氮含量均高于同期一般水网水样,差异有显著性（ｔ＝ ２．５７～２８．６２, Ｐ＜ ０．０５,０．０１）;余氯含量低于同期一般水网水样,差异有显著性（ｔ＝ ２４．５０～３１．５８, Ｐ＜ ０．０１）。夏秋季二次供水水样中细菌总数、总大肠菌群数、氨氮含量高于冬春季（ｔ＝ ２．２４～２４．７２, Ｐ＜ ０．０５,０．０１）。④结论　二次加压供水水质较一般水网水质差。     

汶川映秀镇地震后各种临时水源水的有机物污染调查

目的:明确汶川映秀地震后各种生活用水水源有机物污染状况,为选择安全、永久性饮用水水源提供科学依据.方法:收集映秀镇地震后32～37 d各灾民居住点附近山泉水(6处)、山涧水(4处)、地面水(岷江、皮条河、岷江与皮条河汇合)、降水(雨水18处)、军车净化水(7处)水源为研究对象,以瓶装饮用矿泉水作为对照,利用85-型检水箱对上述水源中的氨氮、亚硝酸盐氮、pH值、浑浊度(肉眼观察)、异臭味和余氯等指标进行快速检测,通过各类水样均数和χ2检验分析.结果:有2/4处山涧水和全部江河水的氨氮含量在0.10～0.18 mg/L之间.其他山泉水、山涧水、地面水、军车净化水与饮用矿泉水相比,氨氮、亚硝酸盐氮含量间均无显著区别.但是下雨12 h后暴露雨水和帐篷落下雨水的平均氨氮含量分别为0.625 mg/L和0.913 mg/L,显著高于瓶装矿泉水(0 mg/ml)和安全标准(<0.05 mg/L).部分帐篷落下雨水中可检出亚硝酸盐氮.暴露雨水pH值(平均6.07)显著低于泉水(平均6.55)、山涧水(平均6.60)和地面水(平均6.63).消毒饮用水余氯4/7个点未检出.结论:映秀镇震后所有居民点的山泉水无有机物的新、旧污染.山涧水以及岷江或皮条河水经过净化、消毒处理后同样可以作为生活饮用水水源.雨水氨氮超标说明空气生物污染严重,主要是新近污染.目前军民饮用水氯化消毒不规范.     

不同镇痛方法对剖宫产术后镇痛效果的影响

目的:观察不同镇痛方法对剖宫产术后产妇的镇痛效果,评价其安全性、有效性及经济成本。方法:180例我院拟行剖宫产手术的初产妇,随机分为6组(n=30),采用患者自控硬膜外镇痛(PCEA)或自控静脉镇痛(PCIA)。1PCEA-RS组:0.2%罗哌卡因复合舒芬太尼0.5μg/ml,2PCEA-RT组:0.2%罗哌卡因复合曲马多8 mg/ml,3PCEA-RF组:0.2%罗哌卡因复合芬太尼5μg/ml,4PCIA-S组:舒芬太尼0.5μg/ml,5PCIA-T组:曲马多8 mg/ml+格拉斯琼3 mg,6PCIA-F组:芬太尼5μg/ml。注射速度2 ml/h,PCA量0.5 ml,锁定时间15 min,观察并记录患者术后的疼痛评分、恶心呕吐、肢体麻木、尿潴留等不良反应。结果:各组产妇在术后各时段的VAS评分、满意度、PCA次数上相比差异无统计学意义(P>0.05);PCEA组镇痛成本明显高于PCIA组(P<0.05);PCEA组产妇肢体麻木明显多于PCIA组。结论:硬膜外和静脉自控镇痛都可有效缓解剖宫产术后产妇伤口疼痛,静脉镇痛更利于产妇活动,照顾婴儿,极少有镇痛泵意外脱落,有较高的满意度,且成本低。     

云南灯盏花胶囊对慢性肾功能衰竭大鼠TGF-β_1与PAI-1 mRNA表达及肾功能的影响

目的:研究中药复方制剂云南灯盏花胶囊对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾功能及肾组织纤维化的影响。方法:60只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、苯那普利组和灯盏花组。应用Platt 5/6肾切除方法制备CRF模型。苯那普利组予盐酸苯那普利(0.29 mg/100 g)灌胃,灯盏花组予灯盏花胶囊(0.3 g/100 g)灌胃,正常组及模型组予等量生理盐水灌胃,疗程12周。检测各组大鼠血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量;RT-PCR方法检测各组大鼠肾组织肿瘤生长因子-β1(TGF-β1)、血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA表达。结果:灯盏花组及苯那普利组大鼠血清肌酐、尿素氮浓度和24 h尿蛋白定量与模型组比较均明显降低(P0.05),且灯盏花组大鼠血清肌酐、24 h尿蛋白定量均低于苯那普利组(P0.05)。灯盏花组、苯那普利组大鼠肾组织TGF-β1和PAI-1 mRNA表达均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05),且灯盏花组TGF-β1和PAI-1 mRNA表达水平低于苯那普利组(P0.05)。结论:云南灯盏花胶囊能改善CRF大鼠的肾功能,抑制肾组织纤维化。     

氮离子注入介导麻黄基因组DNA转化酵母菌

目的以麻黄碱为目标产物,探讨氮离子(N )注入介导麻黄基因组DNA在酵母菌中的转化。方法通过N 注入介导蓝麻黄基因组DNA分别在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和异常汉逊酵母Hansenula anomala中随机转化,转化后的酵母菌经BTB指示性辅助筛选、斜面传代和液体培养后,用铜铬盐定性检识和RP-HPLC方法,检测重组酵母菌胞外和胞内麻黄碱的量。结果获得了遗传稳定的以葡萄糖为碳源、NaNO3为氮源生物合成麻黄碱和(或)伪麻黄碱的重组酵母菌9株。液体培养72 h,RP-HPLC测试胞外麻黄碱和伪麻黄碱的最高量分别为18.85和2.88 mg/L;胞内麻黄碱和伪麻黄碱最高量分别为4.29和22.16 mg/g干细胞。结论采用离子注入介导麻黄基因组DNA大分子转化技术,通过适当的筛选方法,可获得易于人工培养的产生麻黄碱等次生代谢产物的微生物工程菌株。     

帕瑞昔布钠对老年结直肠癌根治术患者脑保护的影响

目的 观察帕瑞昔布钠对老年结直肠癌根治术患者脑保护的影响。 方法 选择2015年1月—2017年1月浙江省荣军医院收治的符合结直肠癌根治术手术指征的老年患者72例纳入本研究,随机分为2组,每组36例。麻醉诱导前,观察组静脉注射帕瑞昔布钠0.6 mg/kg,对照组静脉注射等剂量生理盐水,之后2组均静注0.3 mg长托宁、0.05 mg/kg咪达唑仑、3μg/kg芬太尼、1.0~1.5 mg/kg丙泊酚、0.15 mg/kg苯磺酸顺-阿曲库铵行麻醉诱导,术中均泵注4~8 mg/(kg·h)丙泊酚及间断静注0.05 mg芬太尼、5 mg顺式-阿曲库铵维持脑电双频指数(BIS)于40~60之间。记录2组患者入室后、诱导后、气管插管后、手术1 h、手术结束血流动力学指标;并于入室后、手术结束、术后12 h、术后24 h、术后48 h抽取静脉血测定血清S100β蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平,进行统计学分析;比较2组术中不良反应发生率。 结果 观察组T₂、T₃时刻MAP及HR水平均低于对照组(P<0.05),且对照组T₂、T₃时刻MAP及HR水平均低于T₀时刻(P<0.05),观察组血流动力学更为平稳;观察组给予帕瑞昔布钠后,T₁、T₂、T₃、T₄时刻血清S100β蛋白、NSE水平均低于对照组(均P<0.05);且2组T₁、T₂、T₃、T₄血清S100β蛋白、NSE水平均高于T₀水平(均P<0.05)。2组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 帕瑞昔布钠对老年结直肠癌根治术患者血流动力学平稳,且脑保护作用佳,临床应用安全。