不同贮藏年限哈蟆油的电泳比较

哈蟆油是一种名贵的动物药,为东北地区特产的一种营养价值极高的滋补性中药。哈蟆油在贮藏过程中,常常颜色变深变暗,出现类似“走油”的现象,这些现象不仅使哈蟆油的品质降低,还直接影响其经济效益。哈蟆油中含有大量蛋白质、氨基酸等,这些成分的变化是否会引起其品质发生变化,故本实验采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法考察了不同贮藏年限哈蟆油的蛋白质情况。     

RP-HPLC法测定哈蟆油中胆固醇棕榈酸酯含量

目的运用RP-HPLC法测定哈蟆油中胆固醇棕榈酸酯的含量。方法使用Agilent zorbax-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相∶甲醇-水（79∶21）;柱温：30℃;体积流速：1.5 mL/min;检测波长：210nm;进样量均为10μL。结果哈蟆油中胆固醇棕榈酸酯进样量在0.188 4~0.502 4μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.61%,RSD值为1.01%,且重复性、精密度、稳定性均良好。结论此方法可以通过RP-HPLC法快速、稳定、精密的测定哈蟆油中胆固醇棕榈酸酯的含量,减少以往利用正相色谱的不便。     

不同提取方法对哈蟆油中雌二醇含量的影响

目的 利用3种不同方法提取哈蟆油中雌二醇并测定其相应雌二醇含量,优选出提取哈蟆油中雌二醇最佳方法.方法 采用ODS-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为磷酸水-乙腈-甲醇(63:32:5);检测波长:280 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min.结果 90%乙醇提取法中雌二醇含量为7.5μg/g,超临界提取法中(无夹带剂)雌二醇含量为1.25μg/g,超临界提取法中(有夹带剂)雌二醇为0.83μg/g.结论 利用90%乙醇提取哈蟆油中雌二醇方法最佳.     

哈蟆油对哮喘豚鼠炎性因子及肺组织病理变化的影响

目的探讨哈蟆油对哮喘豚鼠模型的影响和作用机制。方法健康雄性豚鼠60只,分为空白对照组,模型组,阳性对照组(地塞米松,1 mg/kg),哈蟆油高、中、低(400、200、100 mg/kg)剂量组,卵清蛋白激发造模,腹主动脉取血,酶联免疫法检测豚鼠血清中IL-4、IL-5、免疫球蛋白Ig E含量;HE染色观察肺组织病理学改变。结果与正常组相比,模型组IL-4、IL-5、IgE数量均显著增加差异具有统计学意义(P0.01);与模型组相比,阳性对照组,哈蟆油高、中剂量给药组IL-4、IL-5、IgE数量均极具显著性差异有统计学意义(P0.01)。哈蟆油低剂量组差异具有统计学意义(P0.05)。病理结果模型组平滑肌增厚,炎性浸润较为显著,各给药组均不同程度得到改善。结论哈蟆油可缓解哮喘豚鼠模型的症状,其作用途径可能与降低机体炎性因子的分泌、改善免疫平衡有关。     

哈蟆油的免疫调节作用及其微球的制备工艺

目的：研究哈蟆油对免疫系统的影响,并探讨其制备成微球的工艺。方法：50只ICR小鼠随机分为空白对照组、模型组、哈蟆油低剂量组（0.1 g·kg^-1）、哈蟆油中剂量组（0.4 g·kg^-1）和哈蟆油高剂量组（1.0 g·kg^-1）,每组10只。采用流式细胞术检测小鼠脾T淋巴细胞亚群含量,ELISA法测定脾T淋巴细胞中白细胞介素2（IL-2）含量。以喷雾干燥法制备哈蟆油微球,采用正交试验法考察进风温度、出风温度、物料比、进料速度,以平均粒径、粒径分布、载药量、包封率为考察指标,确定哈蟆油微球最佳制备工艺。结果：与空白对照组比较,模型组小鼠的脾T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比值明显增加,差异均有统计学意义（P<0.001）;与模型组比较,哈蟆油低剂量组小鼠的脾T淋巴细胞亚群CD3+和CD4+水平明显降低（P<0.001）,CD4+/CD8+比值明显降低（P<0.05）;与空白对照组比较,模型组小鼠的脾T淋巴细胞中IL-2含量明显降低（P<0.001）;与模型组比较,哈蟆油低、中、高剂量组小鼠的脾T淋巴细胞中IL-2含量均显著增高（P<0.001）。采用喷雾干燥法制备微球,最佳工艺为A3B1C1D1,即物料比1∶3、进风温度130℃、出风温度100℃、进料速度     

中药蛤蟆油的鉴定研究

对哈蟆油(Rana temporaria chensinesis)和中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)干燥输卵管进行了性状与理化鉴定,结果表明在灼热变化,水泡膨胀系数,化学定性反应,酸水解氨基酸,碱水解色氨酸,游离氨基酸的定性定量等方面,二者均有明显差异,提供了鉴定哈蟆油真伪的依据与方法,证实中华大蟾蜍干燥输卵管不能充哈蟆油药用。     

0.5%哈蟆油匀浆对NK细胞活性和细胞免疫功能影响实验研究

目的:观察0.5%(g/mL)哈蟆油匀浆对NK细胞活性和增强细胞免疫作用的影响。方法:用乳酸脱氢酶LDH测定法研究对NK细胞活性的影响;用小鼠迟发型变态反应(DTH)研究对细胞免疫功能的影响。结果:经口给予小鼠不同剂量的0.5%哈蟆油匀浆30 d,对小鼠NK细胞活性无影响;能增强小鼠迟发型变态反应,即能增强细胞免疫功能。结论:0.5%哈蟆油匀浆对NK细胞活性无影响,根据动物实验结果,成人每日服用20 mL具有增强细胞免疫的作用。     

基于配方配伍药效学及正交试验优选复方哈蟆油片配方组成及工艺参数

目的优选复方哈蟆油片配方及提取工艺。方法设黄芪-红景天(A)、黄芪-哈蟆油(B)、黄芪-红景天-哈蟆油(C)3个药物配伍组,每组分别设3个亚组和空白对照组,给不同剂量及配方的提取物30 d后,观察各组小鼠体质量和负重游泳时间。优选出复方哈蟆油片的最佳配方:采用L9(34)正交试验设计,以黄芪甲苷及红景天苷为考察指标,优选出最佳提取工艺条件。结果黄芪+红景天+哈蟆油中剂量组小鼠的游泳时间明显长于对照组(P0.05)。复方哈蟆油片最佳水提工艺为加入8倍量水,煎煮3次,每次1.5 h。结论黄芪+红景天+哈蟆油配方具有显著缓解小鼠体力疲劳的作用。优选的提取工艺对各功效成分提取率均较高,可以为制剂大生产提供依据。     

哈蟆油水提物祛痰及免疫作用初步研究

本实验研究了哈蟆油水提物在祛痰及免疫功能方面的药理作用^[1],祛痰作用实验采取小鼠酚红法^[2],免疫作用实验采用碳粒廓清法^[3]来研究哈蟆油对单核细胞吞噬功能的影响。结果表明哈蟆油无祛痰作用;但对小白鼠血中炭粒清除速度有加快的作用。免疫实验的研究结果表明哈蟆油对小白鼠的单核细胞的吞噬功能有促进作用。这一结果为哈蟆油的进一步开发利用提供了药理依据。     

哈蟆油对免疫力低下小鼠体内脂肪酸含量的影响

目的：观察不同剂量哈蟆油水溶液对小鼠脾脏中脂肪酸含量的影响。方法：20只小鼠随机分为4组（高、低剂量组、模型对照组及正常对照组）,分别灌胃不同剂量哈蟆油水溶液及生理盐水,10d后,高、低剂量组及模型对照组深部X射线照射,造成免疫力低下模型,24h后,断头处死,取脾;皂化法提取脾中脂肪酸,气相色谱测定含量。结果：与模型组比较,高、低剂量组中的两种单不饱和脂肪酸n-7与模型组含量均有极显著性差异,n-3及n-6系脂肪酸与模型组有显著性差异。结论：在小鼠免疫力低下时,哈蟆油具有调节其免疫器官中脂肪酸含量的作用,从而提高其免疫功能。     

林蛙油化学成分及药理作用研究

目的：归纳总结目前文献报道有关林蛙油有效成分及药理作用的研究概况,为林蛙油进一步开发和利用提供参考。方法通过查阅搜集已发表的各类文献中对于林蛙油的研究内容,总结出林蛙油的有效成分及药理作用。结果林蛙油主要成分是蛋白质、脂肪酸、糖类、维生素、微量元素等多种化学活性成分,具有增加机体免疫功能、抗氧化、抗疲劳、抗衰老和镇咳祛痰等多种药理活性。结论林蛙油主要用于治疗病后体虚或消耗性疾病、更年期综合征、骨质疏松症、咳嗽等疾病。     

大鼠卵巢颗粒细胞体外培养及哈蟆油对其增殖功能的影响

目的 采用CCK-8法研究哈蟆油对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,对比分析哈蟆油含药血清对颗粒细胞的最佳作用浓度和时间,为进一步体外试验奠定基础.方法 选用25日龄未成年雌性SD大鼠,腹腔注射孕马血清,48 h后脱颈处死,收集卵巢颗粒细胞,在DMEM-F12培养液中培养,并通过HE染色和免疫荧光技术对颗粒细胞进行鉴定.25只SD大鼠分为正常对照组、阳性药对照组、哈蟆油低、中、高剂量组,灌胃给药7d后采血并分离血清.将体积分数为10％,20％,40％,80％各组不同浓度的含药血清加入体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞体系中,采用CCK-8法检测各组24、48 h和72 h细胞增殖情况.结果 哈蟆油显著提高了颗粒细胞的增殖能力,有一定的量效和时效关系,随着哈蟆油浓度的增加,其促增殖能力逐渐增强,在作用48 h后,20％浓度体积分数的哈蟆油含药血清组最为显著(P＜0.05).结论 体外建立大鼠卵巢颗粒细胞的培养方法,有助于深入研究哈蟆油等中药对卵巢的作用和机制.     

HPLC法测定中药炮制辅料醋中酸性成分的含量

目的：对炮制辅料醋中总酸和乳酸含量进行测定，建立乳酸含量的测定方法。方法：采用酸碱滴定法测定15种醋的总酸的含量。采用树脂基高效液相色谱柱对15种醋的乳酸含量进行HPLC色谱法测定。结果：测定15种醋中的总酸含量范围是35．60-55．58mg/mL，乳酸的含量范围是2．48-23．40mg/mL。其中“恒顺镇江香醋”的总酸含量最高，“山西陈世家老陈醋（三年酿）”的乳酸含量最高。结论：较以往的测乳酸前需将乳酸前处理相比较，本实验的树脂基高效液相色谱柱测定的乳酸含量的方法，重复性好，方便操作，可以作为测定乳酸含量的方法；也为优选炮制辅料醋提供了一定的参考依据。     

足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量动态比较

目的 了解足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量的动态变化。方法 采用氨基本自动分析仪对不同泌乳期的足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量进行测定。结果 牛磺酸、谷氨酸／谷氨酰胺是母乳乳中最丰富的游离氨基酸,而谷氨酸／谷氨酰胺,亮氨酸生门冬氨酸是蛋白质中含量最丰富的氨基酸,提示了其对新生儿的最佳供应,早产儿母乳中氨基酸谱变化与足和母乳有所不同,但更符合于早产儿的需求。结论 从氨     

葡萄树伤流液的未来——新疆葡萄树伤流液的化学成分及其抗氧化性研究

目的探讨新疆葡萄树伤流液的化学成分及其抗氧化性作用。方法以理化鉴别方法对新疆葡萄树伤流液化学成分进行预试;以没食子酸为标准品,采用Folin—CiocaIteu比色法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中总多酚的含量;以葡萄糖为标7伟品,采用硫酸蒽酮法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中多糖的含量;以牛血清蛋白为标准品,采用考马斯亮蓝法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中蛋白的含量;采用ICP—OES法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中矿质元素的含量;采用高效液相色谱法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中氨基酸的含量。以抗坏血酸（O．2mg／mL）为对照,采用羟自由基试剂盒法检测新疆葡萄树伤流液的抗氧化活性。结果新疆不同品种、不同产地葡萄树伤流液中,多酚含量为2．6～6．6mg／L,多糖含量为18．3～816mg／L,蛋白含量为3．0～22．4mg／L;氨基酸有17种,总含量为6．20～201．22mg／L;矿质元素有10种,含量为0．06～118．71mg／L;且清除·OH能力明显高于Vc。结论新疆葡萄树伤流液富含氨基酸、多糖、多酚、蛋白等化学成分,并且由于品种和产地不同,氨基酸、多糖、多酚、蛋白的含量有差异;葡萄树伤流液对·OH的清除能力强,其抗氧化活性随葡萄品种、产地、生态气候条件的不同有所差异。     

阴离子色谱-脉冲安培检测法测定酒中氨基酸

目的建立不同种类酒中氨基酸的高效阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法测定。方法样品用去离子水稀释后经滤膜过滤直接进样,采用梯度洗脱、阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法测定了黄酒、清酒、葡萄酒和啤酒中的氨基酸。结果五种黄酒氨基酸平均含量是3155．15mg／L,清酒氨基酸平均含量为2435．53mg／L,葡萄酒氨基酸平均含量为1158．66mg／L,啤酒氨基酸平均含量为773．54mg／L。结论利用阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法测定不同种类酒中的氨基酸,样品前处理简单,方法适用性宽,测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。     

人工蛇胆汁中胆汁酸的薄层色谱分析

采用薄层色谱法考察了人工蛇胆汁的胆汁酸组成;以双波长薄层扫描法对人工蛇胆汁中的主要胆汗２酸成分牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸（包括牛磺鹅去氧胆酸）进行了测定。薄层色谱斑点清晰;人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸（扬牛磺鹅去氧胆酸）的含量分别为４０．２２ｍｇ／ｍＬ和２．３５ｍｇ／ｍＬ。结果表明牛磺胆酸是人工蛇胆汁中的主要胆汁酸成分;薄层鉴别和含量测定方法简便、可靠,重现性好,可用于人工蛇胆汁的质量控制。